RU2688832C2 - Гибридные белки и способы стимуляции роста растений, защиты растений и иммобилизации спор bacillus на растениях - Google Patents
Гибридные белки и способы стимуляции роста растений, защиты растений и иммобилизации спор bacillus на растениях Download PDFInfo
- Publication number
- RU2688832C2 RU2688832C2 RU2015144152A RU2015144152A RU2688832C2 RU 2688832 C2 RU2688832 C2 RU 2688832C2 RU 2015144152 A RU2015144152 A RU 2015144152A RU 2015144152 A RU2015144152 A RU 2015144152A RU 2688832 C2 RU2688832 C2 RU 2688832C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- seq
- sequence
- signal sequence
- amino acids
- protein
- Prior art date
Links
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 696
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 693
- 230000008635 plant growth Effects 0.000 title claims abstract description 96
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 47
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 title claims abstract description 12
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 title claims description 17
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 title description 3
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 claims abstract description 806
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 182
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 66
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims abstract description 65
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims abstract description 56
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims abstract description 56
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 16
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims abstract description 12
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 3
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 958
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 683
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 644
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims description 644
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 179
- 241000654838 Exosporium Species 0.000 claims description 174
- 241000193755 Bacillus cereus Species 0.000 claims description 84
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 claims description 56
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims description 56
- -1 Hg-Syv46 Proteins 0.000 claims description 44
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 43
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 43
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 43
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 40
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 35
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 claims description 33
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 30
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 30
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 27
- 241000194106 Bacillus mycoides Species 0.000 claims description 24
- 241000193388 Bacillus thuringiensis Species 0.000 claims description 22
- 239000000813 peptide hormone Substances 0.000 claims description 20
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 claims description 18
- 108010040721 Flagellin Proteins 0.000 claims description 16
- 229940097012 bacillus thuringiensis Drugs 0.000 claims description 15
- SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N indole-3-acetic acid Chemical class C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CNC2=C1 SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 239000002689 soil Substances 0.000 claims description 15
- 239000003053 toxin Substances 0.000 claims description 13
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 claims description 13
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 claims description 13
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 claims description 12
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 claims description 12
- 108700019535 Phosphoprotein Phosphatases Proteins 0.000 claims description 10
- 102000045595 Phosphoprotein Phosphatases Human genes 0.000 claims description 10
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 claims description 10
- WHOOUMGHGSPMGR-UHFFFAOYSA-N indol-3-ylacetaldehyde Chemical compound C1=CC=C2C(CC=O)=CNC2=C1 WHOOUMGHGSPMGR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 230000000749 insecticidal effect Effects 0.000 claims description 10
- 102000004157 Hydrolases Human genes 0.000 claims description 9
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 claims description 9
- 101000898643 Candida albicans Vacuolar aspartic protease Proteins 0.000 claims description 8
- 101000898783 Candida tropicalis Candidapepsin Proteins 0.000 claims description 8
- 101000898784 Cryphonectria parasitica Endothiapepsin Proteins 0.000 claims description 8
- 101000763602 Manilkara zapota Thaumatin-like protein 1 Proteins 0.000 claims description 8
- 101000763586 Manilkara zapota Thaumatin-like protein 1a Proteins 0.000 claims description 8
- 101000966653 Musa acuminata Glucan endo-1,3-beta-glucosidase Proteins 0.000 claims description 8
- 101000933133 Rhizopus niveus Rhizopuspepsin-1 Proteins 0.000 claims description 8
- 101000910082 Rhizopus niveus Rhizopuspepsin-2 Proteins 0.000 claims description 8
- 101000910079 Rhizopus niveus Rhizopuspepsin-3 Proteins 0.000 claims description 8
- 101000910086 Rhizopus niveus Rhizopuspepsin-4 Proteins 0.000 claims description 8
- 101000910088 Rhizopus niveus Rhizopuspepsin-5 Proteins 0.000 claims description 8
- 101000898773 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) Saccharopepsin Proteins 0.000 claims description 8
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 8
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 claims description 8
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 8
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 8
- 230000028070 sporulation Effects 0.000 claims description 8
- 108010022172 Chitinases Proteins 0.000 claims description 7
- 102000012286 Chitinases Human genes 0.000 claims description 7
- 229940122618 Trypsin inhibitor Drugs 0.000 claims description 7
- 101710162629 Trypsin inhibitor Proteins 0.000 claims description 7
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 7
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 7
- HOWHQWFXSLOJEF-MGZLOUMQSA-N systemin Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)OC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1N(C(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)N)C(C)C)CCC1 HOWHQWFXSLOJEF-MGZLOUMQSA-N 0.000 claims description 7
- 108010050014 systemin Proteins 0.000 claims description 7
- 239000002753 trypsin inhibitor Substances 0.000 claims description 7
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 7
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 6
- OOXNYFKPOPJIOT-UHFFFAOYSA-N 5-(3-bromophenyl)-7-(6-morpholin-4-ylpyridin-3-yl)pyrido[2,3-d]pyrimidin-4-amine;dihydrochloride Chemical compound Cl.Cl.C=12C(N)=NC=NC2=NC(C=2C=NC(=CC=2)N2CCOCC2)=CC=1C1=CC=CC(Br)=C1 OOXNYFKPOPJIOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 108010076278 Adenosine kinase Proteins 0.000 claims description 6
- 102100032534 Adenosine kinase Human genes 0.000 claims description 6
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 6
- HOLQXBRPSSZJMZ-FGRXCANLSA-N (2s)-n-[(2s)-1-[[(2s)-6-amino-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-6-amino-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-amino-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxohexan-2-yl]amino]-1-oxop Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(N)=O HOLQXBRPSSZJMZ-FGRXCANLSA-N 0.000 claims description 5
- PAJPWUMXBYXFCZ-UHFFFAOYSA-N 1-aminocyclopropanecarboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1(N)CC1 PAJPWUMXBYXFCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 102000004008 5'-Nucleotidase Human genes 0.000 claims description 5
- 108700004024 5'-Nucleotidase Proteins 0.000 claims description 5
- 102100029457 Adenine phosphoribosyltransferase Human genes 0.000 claims description 5
- 108010024223 Adenine phosphoribosyltransferase Proteins 0.000 claims description 5
- 101100365087 Arabidopsis thaliana SCRA gene Proteins 0.000 claims description 5
- 241000193738 Bacillus anthracis Species 0.000 claims description 5
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 claims description 5
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 claims description 5
- 108700016270 ENOD40 Proteins 0.000 claims description 5
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 5
- 108010036176 Melitten Proteins 0.000 claims description 5
- 108010033272 Nitrilase Proteins 0.000 claims description 5
- 101150097393 SCR gene Proteins 0.000 claims description 5
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 claims description 5
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 claims description 5
- 101710115637 Zeatin O-glucosyltransferase Proteins 0.000 claims description 5
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 claims description 5
- 108010049351 adenosine nucleosidase Proteins 0.000 claims description 5
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 5
- 108010019084 mastoparan Proteins 0.000 claims description 5
- MASXKPLGZRMBJF-MVSGICTGSA-N mastoparan Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(N)=O MASXKPLGZRMBJF-MVSGICTGSA-N 0.000 claims description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 5
- VDXZNPDIRNWWCW-JFTDCZMZSA-N melittin Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(N)=O)CC1=CNC2=CC=CC=C12 VDXZNPDIRNWWCW-JFTDCZMZSA-N 0.000 claims description 5
- 230000001069 nematicidal effect Effects 0.000 claims description 5
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 claims description 5
- 108010075410 zea-mays insulin-like growth factor Proteins 0.000 claims description 5
- 108091005658 Basic proteases Proteins 0.000 claims description 4
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 claims description 4
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 claims description 4
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 claims description 4
- 241000019011 Tasa Species 0.000 claims description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 4
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 claims description 4
- 229940065181 bacillus anthracis Drugs 0.000 claims description 4
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 4
- 102000005927 Cysteine Proteases Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000787 Subtilisin Proteins 0.000 claims description 3
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims description 3
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 claims description 3
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 claims description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 3
- IXORZMNAPKEEDV-OBDJNFEBSA-N gibberellin A3 Chemical class C([C@@]1(O)C(=C)C[C@@]2(C1)[C@H]1C(O)=O)C[C@H]2[C@]2(C=C[C@@H]3O)[C@H]1[C@]3(C)C(=O)O2 IXORZMNAPKEEDV-OBDJNFEBSA-N 0.000 claims description 3
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 claims description 3
- 241001219268 Bacillus gaemokensis Species 0.000 claims description 2
- 241000906059 Bacillus pseudomycoides Species 0.000 claims description 2
- 241000964241 Bacillus samanii Species 0.000 claims description 2
- UDMBCSSLTHHNCD-UHFFFAOYSA-N Coenzym Q(11) Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(O)=O)C(O)C1O UDMBCSSLTHHNCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 102000005593 Endopeptidases Human genes 0.000 claims description 2
- 108010059378 Endopeptidases Proteins 0.000 claims description 2
- 241000896533 Gliocladium Species 0.000 claims description 2
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 claims description 2
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 claims description 2
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 claims description 2
- 108010059712 Pronase Proteins 0.000 claims description 2
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 claims description 2
- 108090001109 Thermolysin Proteins 0.000 claims description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 claims description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 claims description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims description 2
- 229940055729 papain Drugs 0.000 claims description 2
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 claims description 2
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 claims description 2
- 108010054442 polyalanine Proteins 0.000 claims description 2
- 108010094020 polyglycine Proteins 0.000 claims description 2
- 229920000232 polyglycine polymer Polymers 0.000 claims description 2
- 229940076788 pyruvate Drugs 0.000 claims description 2
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 claims description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 claims description 2
- 229960001322 trypsin Drugs 0.000 claims description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims description 2
- 241000006378 Bacillus cereus group Species 0.000 claims 51
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 claims 47
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 claims 24
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 claims 19
- LFLZOWIFJOBEPN-UHFFFAOYSA-N nitrate, nitrate Chemical compound O[N+]([O-])=O.O[N+]([O-])=O LFLZOWIFJOBEPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 12
- 108010011619 6-Phytase Proteins 0.000 claims 11
- 229940085127 phytase Drugs 0.000 claims 11
- BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N Methylamine Chemical compound NC BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 10
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 claims 9
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 claims 9
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 claims 9
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 claims 9
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 claims 9
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 claims 9
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 claims 9
- 108010084185 Cellulases Proteins 0.000 claims 8
- 102000005575 Cellulases Human genes 0.000 claims 8
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 claims 8
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 claims 8
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 claims 8
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 8
- 108010089807 chitosanase Proteins 0.000 claims 8
- 239000003337 fertilizer Substances 0.000 claims 8
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 claims 8
- 108090000913 Nitrate Reductases Proteins 0.000 claims 7
- 108010025915 Nitrite Reductases Proteins 0.000 claims 7
- 108010047754 beta-Glucosidase Proteins 0.000 claims 7
- 102000006995 beta-Glucosidase Human genes 0.000 claims 7
- 229940106157 cellulase Drugs 0.000 claims 7
- 230000000855 fungicidal effect Effects 0.000 claims 7
- 239000000417 fungicide Substances 0.000 claims 7
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 claims 6
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 claims 6
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 6
- 108010020943 Nitrogenase Proteins 0.000 claims 6
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims 6
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 5
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims 5
- 239000002917 insecticide Substances 0.000 claims 5
- ROWKJAVDOGWPAT-UHFFFAOYSA-N Acetoin Chemical compound CC(O)C(C)=O ROWKJAVDOGWPAT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 4
- 108700023418 Amidases Proteins 0.000 claims 4
- 241001328122 Bacillus clausii Species 0.000 claims 4
- 102000005744 Glycoside Hydrolases Human genes 0.000 claims 4
- 108010031186 Glycoside Hydrolases Proteins 0.000 claims 4
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 claims 4
- 108010059820 Polygalacturonase Proteins 0.000 claims 4
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 4
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 claims 4
- 102000005922 amidase Human genes 0.000 claims 4
- ZCCIPPOKBCJFDN-UHFFFAOYSA-N calcium nitrate Chemical compound [Ca+2].[O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O ZCCIPPOKBCJFDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 4
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 claims 4
- 239000013522 chelant Substances 0.000 claims 4
- 108010093305 exopolygalacturonase Proteins 0.000 claims 4
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 claims 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims 4
- 108060006633 protein kinase Proteins 0.000 claims 4
- ZEYHEAKUIGZSGI-UHFFFAOYSA-N 4-methoxybenzoic acid Chemical compound COC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 ZEYHEAKUIGZSGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- 101710121765 Endo-1,4-beta-xylanase Proteins 0.000 claims 3
- JCMUOFQHZLPHQP-UHFFFAOYSA-N L-L-Ophthalmic acid Natural products OC(=O)CNC(=O)C(CC)NC(=O)CCC(N)C(O)=O JCMUOFQHZLPHQP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- 235000019738 Limestone Nutrition 0.000 claims 3
- CPLXHLVBOLITMK-UHFFFAOYSA-N Magnesium oxide Chemical compound [Mg]=O CPLXHLVBOLITMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- 102000005262 Sulfatase Human genes 0.000 claims 3
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 claims 3
- 239000003905 agrochemical Substances 0.000 claims 3
- JFDZBHWFFUWGJE-UHFFFAOYSA-N benzonitrile Chemical compound N#CC1=CC=CC=C1 JFDZBHWFFUWGJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 claims 3
- 235000010216 calcium carbonate Nutrition 0.000 claims 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims 3
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 claims 3
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 claims 3
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 claims 3
- 230000002363 herbicidal effect Effects 0.000 claims 3
- 239000004009 herbicide Substances 0.000 claims 3
- 239000006028 limestone Substances 0.000 claims 3
- 108010088490 ophthalmic acid Proteins 0.000 claims 3
- JCMUOFQHZLPHQP-BQBZGAKWSA-N ophthalmic acid Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](CC)NC(=O)CC[C@H](N)C(O)=O JCMUOFQHZLPHQP-BQBZGAKWSA-N 0.000 claims 3
- HVVLQPOCRDLFGA-UHFFFAOYSA-N ophthalmic acid Natural products CCC(NC(=O)C(N)CCC(=O)O)C(=O)NCC(=O)O HVVLQPOCRDLFGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- 239000003415 peat Substances 0.000 claims 3
- SUSQOBVLVYHIEX-UHFFFAOYSA-N phenylacetonitrile Chemical class N#CCC1=CC=CC=C1 SUSQOBVLVYHIEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 claims 3
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 claims 3
- 239000004576 sand Substances 0.000 claims 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims 3
- 108060007951 sulfatase Proteins 0.000 claims 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- YIKWKLYQRFRGPM-UHFFFAOYSA-N 1-dodecylguanidine acetate Chemical compound CC(O)=O.CCCCCCCCCCCCN=C(N)N YIKWKLYQRFRGPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 2-(3-bromo-2-fluorophenyl)acetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC(Br)=C1F PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- QJZYHAIUNVAGQP-UHFFFAOYSA-N 3-nitrobicyclo[2.2.1]hept-5-ene-2,3-dicarboxylic acid Chemical compound C1C2C=CC1C(C(=O)O)C2(C(O)=O)[N+]([O-])=O QJZYHAIUNVAGQP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N Acetamide Chemical compound CC(N)=O DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 108091005508 Acid proteases Proteins 0.000 claims 2
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 claims 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 241000976738 Bacillus aryabhattai Species 0.000 claims 2
- 101900117090 Bacillus subtilis Endoglucanase Proteins 0.000 claims 2
- KXDAEFPNCMNJSK-UHFFFAOYSA-N Benzamide Chemical compound NC(=O)C1=CC=CC=C1 KXDAEFPNCMNJSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 239000005766 Dodine Substances 0.000 claims 2
- 239000005769 Etridiazole Substances 0.000 claims 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 239000005867 Iprodione Substances 0.000 claims 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 2
- PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N Manganese Chemical compound [Mn] PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 239000005807 Metalaxyl Substances 0.000 claims 2
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims 2
- ZRWPUFFVAOMMNM-UHFFFAOYSA-N Patulin Chemical compound OC1OCC=C2OC(=O)C=C12 ZRWPUFFVAOMMNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 claims 2
- 241000589180 Rhizobium Species 0.000 claims 2
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 claims 2
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- XLOMVQKBTHCTTD-UHFFFAOYSA-N Zinc monoxide Chemical compound [Zn]=O XLOMVQKBTHCTTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 claims 2
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 claims 2
- 239000003619 algicide Substances 0.000 claims 2
- 150000008052 alkyl sulfonates Chemical class 0.000 claims 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N ammonia Natural products N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 claims 2
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 claims 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 claims 2
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 claims 2
- OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L calcium sulfate Chemical compound [Ca+2].[O-]S([O-])(=O)=O OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims 2
- 239000004927 clay Substances 0.000 claims 2
- 239000002361 compost Substances 0.000 claims 2
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 claims 2
- 239000010949 copper Substances 0.000 claims 2
- YPHMISFOHDHNIV-FSZOTQKASA-N cycloheximide Chemical compound C1[C@@H](C)C[C@H](C)C(=O)[C@@H]1[C@H](O)CC1CC(=O)NC(=O)C1 YPHMISFOHDHNIV-FSZOTQKASA-N 0.000 claims 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 claims 2
- KQTVWCSONPJJPE-UHFFFAOYSA-N etridiazole Chemical compound CCOC1=NC(C(Cl)(Cl)Cl)=NS1 KQTVWCSONPJJPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 108010037896 heparin-binding hemagglutinin Proteins 0.000 claims 2
- 239000004021 humic acid Substances 0.000 claims 2
- AMWRITDGCCNYAT-UHFFFAOYSA-L hydroxy(oxo)manganese;manganese Chemical compound [Mn].O[Mn]=O.O[Mn]=O AMWRITDGCCNYAT-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 2
- GFAZHVHNLUBROE-UHFFFAOYSA-N hydroxymethyl propionaldehyde Natural products CCC(=O)CO GFAZHVHNLUBROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- ONUFESLQCSAYKA-UHFFFAOYSA-N iprodione Chemical compound O=C1N(C(=O)NC(C)C)CC(=O)N1C1=CC(Cl)=CC(Cl)=C1 ONUFESLQCSAYKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- JJWLVOIRVHMVIS-UHFFFAOYSA-N isopropylamine Chemical compound CC(C)N JJWLVOIRVHMVIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 229920005610 lignin Polymers 0.000 claims 2
- YIXJRHPUWRPCBB-UHFFFAOYSA-N magnesium nitrate Chemical compound [Mg+2].[O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O YIXJRHPUWRPCBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 239000000395 magnesium oxide Substances 0.000 claims 2
- 235000012245 magnesium oxide Nutrition 0.000 claims 2
- 239000011572 manganese Substances 0.000 claims 2
- 229910052748 manganese Inorganic materials 0.000 claims 2
- ZQEIXNIJLIKNTD-UHFFFAOYSA-N methyl N-(2,6-dimethylphenyl)-N-(methoxyacetyl)alaninate Chemical compound COCC(=O)N(C(C)C(=O)OC)C1=C(C)C=CC=C1C ZQEIXNIJLIKNTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 239000011785 micronutrient Substances 0.000 claims 2
- 235000013369 micronutrients Nutrition 0.000 claims 2
- 239000003750 molluscacide Substances 0.000 claims 2
- 230000002013 molluscicidal effect Effects 0.000 claims 2
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N monobenzene Natural products C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 238000010397 one-hybrid screening Methods 0.000 claims 2
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 claims 2
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 claims 2
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 claims 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims 2
- FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N potassium nitrate Chemical compound [K+].[O-][N+]([O-])=O FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims 2
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 claims 2
- 108010070880 sigma K Proteins 0.000 claims 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims 2
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 claims 2
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims 2
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 claims 2
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 claims 2
- 239000011701 zinc Substances 0.000 claims 2
- WTFXTQVDAKGDEY-UHFFFAOYSA-N (-)-chorismic acid Natural products OC1C=CC(C(O)=O)=CC1OC(=C)C(O)=O WTFXTQVDAKGDEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- GXEKYRXVRROBEV-FBXFSONDSA-N (1r,2s,3r,4s)-7-oxabicyclo[2.2.1]heptane-2,3-dicarboxylic acid Chemical compound C1C[C@@H]2[C@@H](C(O)=O)[C@@H](C(=O)O)[C@H]1O2 GXEKYRXVRROBEV-FBXFSONDSA-N 0.000 claims 1
- JYEUMXHLPRZUAT-UHFFFAOYSA-N 1,2,3-triazine Chemical compound C1=CN=NN=C1 JYEUMXHLPRZUAT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-trimethyl-N-[3-(trifluoromethyl)phenyl]benzenesulfonamide Chemical compound CC1=CC(C)=CC(C)=C1S(=O)(=O)NC1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- IOHPVZBSOKLVMN-UHFFFAOYSA-N 2-(2-phenylethyl)benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1CCC1=CC=CC=C1 IOHPVZBSOKLVMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- HIXDQWDOVZUNNA-UHFFFAOYSA-N 2-(3,4-dimethoxyphenyl)-5-hydroxy-7-methoxychromen-4-one Chemical class C=1C(OC)=CC(O)=C(C(C=2)=O)C=1OC=2C1=CC=C(OC)C(OC)=C1 HIXDQWDOVZUNNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- WTLNOANVTIKPEE-UHFFFAOYSA-N 2-acetyloxypropanoic acid Chemical compound OC(=O)C(C)OC(C)=O WTLNOANVTIKPEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- QRNATDQRFAUDKF-UHFFFAOYSA-N 2-carbamothioylsulfanylethyl carbamodithioate Chemical class NC(=S)SCCSC(N)=S QRNATDQRFAUDKF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- BZSXEZOLBIJVQK-UHFFFAOYSA-N 2-methylsulfonylbenzoic acid Chemical compound CS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1C(O)=O BZSXEZOLBIJVQK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- ZURLOZJIDLZAOI-UHFFFAOYSA-N 3,4-dihydropyrazol-5-one Chemical compound O=C1CCN=N1 ZURLOZJIDLZAOI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- QXDOFVVNXBGLKK-UHFFFAOYSA-N 3-Isoxazolidinone Chemical compound OC1=NOCC1 QXDOFVVNXBGLKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- XTWYTFMLZFPYCI-KQYNXXCUSA-N 5'-adenylphosphoric acid Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O XTWYTFMLZFPYCI-KQYNXXCUSA-N 0.000 claims 1
- ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-J ATP(4-) Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)[C@H]1O ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-J 0.000 claims 1
- 241001508581 Acaulosporaceae Species 0.000 claims 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 1
- XTWYTFMLZFPYCI-UHFFFAOYSA-N Adenosine diphosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O XTWYTFMLZFPYCI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N Adenosine triphosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 101710186708 Agglutinin Proteins 0.000 claims 1
- 241000588986 Alcaligenes Species 0.000 claims 1
- 241000588813 Alcaligenes faecalis Species 0.000 claims 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 claims 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000004114 Ammonium polyphosphate Substances 0.000 claims 1
- 241001295809 Archaeosporaceae Species 0.000 claims 1
- 241000235349 Ascomycota Species 0.000 claims 1
- 241000894008 Azorhizobium Species 0.000 claims 1
- 241000589151 Azotobacter Species 0.000 claims 1
- 241000006381 Bacillus flexus Species 0.000 claims 1
- 241000194107 Bacillus megaterium Species 0.000 claims 1
- 241000210691 Bacillus nealsonii Species 0.000 claims 1
- 241000221198 Basidiomycota Species 0.000 claims 1
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 claims 1
- 239000005996 Blood meal Substances 0.000 claims 1
- 241000589173 Bradyrhizobium Species 0.000 claims 1
- 101710169754 CD-NTase-associated protein 12 Proteins 0.000 claims 1
- 229910021532 Calcite Inorganic materials 0.000 claims 1
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M Carbamate Chemical compound NC([O-])=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 claims 1
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 claims 1
- 239000005749 Copper compound Chemical class 0.000 claims 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 claims 1
- QSJXEFYPDANLFS-UHFFFAOYSA-N Diacetyl Chemical group CC(=O)C(C)=O QSJXEFYPDANLFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000005696 Diammonium phosphate Substances 0.000 claims 1
- 241000966651 Diversisporaceae Species 0.000 claims 1
- 101100136146 Drosophila melanogaster Pep gene Proteins 0.000 claims 1
- 241000588914 Enterobacter Species 0.000 claims 1
- 241000588697 Enterobacter cloacae Species 0.000 claims 1
- 108050000194 Expansin Proteins 0.000 claims 1
- 235000019733 Fish meal Nutrition 0.000 claims 1
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-M Fluoride anion Chemical compound [F-] KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 1
- 241001476001 Gastridium <grass> Species 0.000 claims 1
- 241001583500 Geosiphonaceae Species 0.000 claims 1
- 241001508593 Gigasporaceae Species 0.000 claims 1
- 241001508585 Glomeraceae Species 0.000 claims 1
- 241000235503 Glomus Species 0.000 claims 1
- 102000004366 Glucosidases Human genes 0.000 claims 1
- 108010056771 Glucosidases Proteins 0.000 claims 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 101710146024 Horcolin Proteins 0.000 claims 1
- IMQLKJBTEOYOSI-GPIVLXJGSA-N Inositol-hexakisphosphate Chemical compound OP(O)(=O)O[C@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H]1OP(O)(O)=O IMQLKJBTEOYOSI-GPIVLXJGSA-N 0.000 claims 1
- 101710167241 Intimin Proteins 0.000 claims 1
- 101710198693 Invasin Proteins 0.000 claims 1
- 241000588748 Klebsiella Species 0.000 claims 1
- 241000588752 Kluyvera Species 0.000 claims 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 claims 1
- 108010029541 Laccase Proteins 0.000 claims 1
- 101710189395 Lectin Proteins 0.000 claims 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 claims 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 claims 1
- 101100055468 Leifsonia xyli subsp. xyli (strain CTCB07) pepA gene Proteins 0.000 claims 1
- 108010054320 Lignin peroxidase Proteins 0.000 claims 1
- 229910021380 Manganese Chloride Inorganic materials 0.000 claims 1
- GLFNIEUTAYBVOC-UHFFFAOYSA-L Manganese chloride Chemical compound Cl[Mn]Cl GLFNIEUTAYBVOC-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- 108010059896 Manganese peroxidase Proteins 0.000 claims 1
- 101710179758 Mannose-specific lectin Proteins 0.000 claims 1
- 101710150763 Mannose-specific lectin 1 Proteins 0.000 claims 1
- 101710150745 Mannose-specific lectin 2 Proteins 0.000 claims 1
- 241000970829 Mesorhizobium Species 0.000 claims 1
- 101100066989 Mus musculus Fndc5 gene Proteins 0.000 claims 1
- 101100137338 Mus musculus Prep gene Proteins 0.000 claims 1
- 241000186359 Mycobacterium Species 0.000 claims 1
- 101100291944 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) pep gene Proteins 0.000 claims 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 claims 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 claims 1
- 241000237502 Ostreidae Species 0.000 claims 1
- 241000179039 Paenibacillus Species 0.000 claims 1
- 241000285107 Paenibacillus massiliensis Species 0.000 claims 1
- 241001057811 Paracoccus <mealybug> Species 0.000 claims 1
- 241000947167 Paracoccus kondratievae Species 0.000 claims 1
- 241001295757 Paraglomeraceae Species 0.000 claims 1
- 108010064785 Phospholipases Proteins 0.000 claims 1
- 102000015439 Phospholipases Human genes 0.000 claims 1
- 102000004861 Phosphoric Diester Hydrolases Human genes 0.000 claims 1
- 108090001050 Phosphoric Diester Hydrolases Proteins 0.000 claims 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- IMQLKJBTEOYOSI-UHFFFAOYSA-N Phytic acid Natural products OP(O)(=O)OC1C(OP(O)(O)=O)C(OP(O)(O)=O)C(OP(O)(O)=O)C(OP(O)(O)=O)C1OP(O)(O)=O IMQLKJBTEOYOSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- SIOXPEMLGUPBBT-UHFFFAOYSA-N Picolinic acid Natural products OC(=O)C1=CC=CC=N1 SIOXPEMLGUPBBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims 1
- 229920000037 Polyproline Polymers 0.000 claims 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 claims 1
- 108010009413 Pyrophosphatases Proteins 0.000 claims 1
- 102000009609 Pyrophosphatases Human genes 0.000 claims 1
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M Pyruvate Chemical compound CC(=O)C([O-])=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 1
- 241000347124 Sacculosporaceae Species 0.000 claims 1
- 241001135312 Sinorhizobium Species 0.000 claims 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 claims 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 claims 1
- GNVMUORYQLCPJZ-UHFFFAOYSA-M Thiocarbamate Chemical class NC([S-])=O GNVMUORYQLCPJZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 1
- 241000223259 Trichoderma Species 0.000 claims 1
- 241000499912 Trichoderma reesei Species 0.000 claims 1
- 229920001807 Urea-formaldehyde Polymers 0.000 claims 1
- FMRLDPWIRHBCCC-UHFFFAOYSA-L Zinc carbonate Chemical compound [Zn+2].[O-]C([O-])=O FMRLDPWIRHBCCC-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- 241000758405 Zoopagomycotina Species 0.000 claims 1
- QFHMNFAUXJAINK-UHFFFAOYSA-N [1-(carbamoylamino)-2-methylpropyl]urea Chemical group NC(=O)NC(C(C)C)NC(N)=O QFHMNFAUXJAINK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- UGXQOOQUZRUVSS-ZZXKWVIFSA-N [5-[3,5-dihydroxy-2-(1,3,4-trihydroxy-5-oxopentan-2-yl)oxyoxan-4-yl]oxy-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methyl (e)-3-(4-hydroxyphenyl)prop-2-enoate Chemical compound OC1C(OC(CO)C(O)C(O)C=O)OCC(O)C1OC1C(O)C(O)C(COC(=O)\C=C\C=2C=CC(O)=CC=2)O1 UGXQOOQUZRUVSS-ZZXKWVIFSA-N 0.000 claims 1
- 230000000895 acaricidal effect Effects 0.000 claims 1
- 239000000642 acaricide Substances 0.000 claims 1
- UDMBCSSLTHHNCD-KQYNXXCUSA-N adenosine 5'-monophosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O UDMBCSSLTHHNCD-KQYNXXCUSA-N 0.000 claims 1
- LNQVTSROQXJCDD-UHFFFAOYSA-N adenosine monophosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(CO)C(OP(O)(O)=O)C1O LNQVTSROQXJCDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000000910 agglutinin Substances 0.000 claims 1
- 229940005347 alcaligenes faecalis Drugs 0.000 claims 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 claims 1
- 150000008055 alkyl aryl sulfonates Chemical class 0.000 claims 1
- 229940037003 alum Drugs 0.000 claims 1
- DIZPMCHEQGEION-UHFFFAOYSA-H aluminium sulfate (anhydrous) Chemical compound [Al+3].[Al+3].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O DIZPMCHEQGEION-UHFFFAOYSA-H 0.000 claims 1
- BIGPRXCJEDHCLP-UHFFFAOYSA-N ammonium bisulfate Chemical compound [NH4+].OS([O-])(=O)=O BIGPRXCJEDHCLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 claims 1
- LFVGISIMTYGQHF-UHFFFAOYSA-N ammonium dihydrogen phosphate Chemical compound [NH4+].OP(O)([O-])=O LFVGISIMTYGQHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229910000387 ammonium dihydrogen phosphate Inorganic materials 0.000 claims 1
- XGGLLRJQCZROSE-UHFFFAOYSA-K ammonium iron(iii) sulfate Chemical compound [NH4+].[Fe+3].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O XGGLLRJQCZROSE-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims 1
- 235000019826 ammonium polyphosphate Nutrition 0.000 claims 1
- 229920001276 ammonium polyphosphate Polymers 0.000 claims 1
- 239000001166 ammonium sulphate Substances 0.000 claims 1
- XYXNTHIYBIDHGM-UHFFFAOYSA-N ammonium thiosulfate Chemical compound [NH4+].[NH4+].[O-]S([O-])(=O)=S XYXNTHIYBIDHGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- IMHBYKMAHXWHRP-UHFFFAOYSA-N anilazine Chemical compound ClC1=CC=CC=C1NC1=NC(Cl)=NC(Cl)=N1 IMHBYKMAHXWHRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 150000003931 anilides Chemical class 0.000 claims 1
- 229920000617 arabinoxylan Polymers 0.000 claims 1
- 125000003710 aryl alkyl group Chemical group 0.000 claims 1
- NGLMYMJASOJOJY-UHFFFAOYSA-O azanium;calcium;nitrate Chemical compound [NH4+].[Ca].[O-][N+]([O-])=O NGLMYMJASOJOJY-UHFFFAOYSA-O 0.000 claims 1
- RIOXQFHNBCKOKP-UHFFFAOYSA-N benomyl Chemical compound C1=CC=C2N(C(=O)NCCCC)C(NC(=O)OC)=NC2=C1 RIOXQFHNBCKOKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 150000001555 benzenes Chemical class 0.000 claims 1
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 claims 1
- HAVZTGSQJIEKPI-UHFFFAOYSA-N benzothiadiazine Chemical compound C1=CC=C2C=NNSC2=C1 HAVZTGSQJIEKPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- MITFXPHMIHQXPI-UHFFFAOYSA-N benzoxaprofen Natural products N=1C2=CC(C(C(O)=O)C)=CC=C2OC=1C1=CC=C(Cl)C=C1 MITFXPHMIHQXPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 claims 1
- 239000007844 bleaching agent Substances 0.000 claims 1
- 239000002374 bone meal Substances 0.000 claims 1
- 229940036811 bone meal Drugs 0.000 claims 1
- 239000001273 butane Substances 0.000 claims 1
- 229940065285 cadmium compound Drugs 0.000 claims 1
- 150000001662 cadmium compounds Chemical class 0.000 claims 1
- AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L calcium dihydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Ca+2] AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- 239000000920 calcium hydroxide Substances 0.000 claims 1
- 235000011116 calcium hydroxide Nutrition 0.000 claims 1
- 229910001861 calcium hydroxide Inorganic materials 0.000 claims 1
- BRPQOXSCLDDYGP-UHFFFAOYSA-N calcium oxide Chemical compound [O-2].[Ca+2] BRPQOXSCLDDYGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000000292 calcium oxide Substances 0.000 claims 1
- ODINCKMPIJJUCX-UHFFFAOYSA-N calcium oxide Inorganic materials [Ca]=O ODINCKMPIJJUCX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- YYRMJZQKEFZXMX-UHFFFAOYSA-N calcium;phosphoric acid Chemical compound [Ca+2].OP(O)(O)=O.OP(O)(O)=O YYRMJZQKEFZXMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 claims 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 claims 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 claims 1
- 239000003610 charcoal Substances 0.000 claims 1
- WTFXTQVDAKGDEY-HTQZYQBOSA-N chorismic acid Chemical compound O[C@@H]1C=CC(C(O)=O)=C[C@H]1OC(=C)C(O)=O WTFXTQVDAKGDEY-HTQZYQBOSA-N 0.000 claims 1
- 238000009264 composting Methods 0.000 claims 1
- 150000001880 copper compounds Chemical class 0.000 claims 1
- 229910000365 copper sulfate Inorganic materials 0.000 claims 1
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- FWFSEYBSWVRWGL-UHFFFAOYSA-N cyclohex-2-enone Chemical class O=C1CCCC=C1 FWFSEYBSWVRWGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- AZSFNUJOCKMOGB-UHFFFAOYSA-K cyclotriphosphate(3-) Chemical compound [O-]P1(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])(=O)O1 AZSFNUJOCKMOGB-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims 1
- MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N diammonium hydrogen phosphate Chemical compound [NH4+].[NH4+].OP([O-])([O-])=O MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 235000019838 diammonium phosphate Nutrition 0.000 claims 1
- 229910000388 diammonium phosphate Inorganic materials 0.000 claims 1
- CDMADVZSLOHIFP-UHFFFAOYSA-N disodium;3,7-dioxido-2,4,6,8,9-pentaoxa-1,3,5,7-tetraborabicyclo[3.3.1]nonane;decahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.[Na+].[Na+].O1B([O-])OB2OB([O-])OB1O2 CDMADVZSLOHIFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- DLSNDYKSNXOOFM-UHFFFAOYSA-L disodium;4-oxido-4-sulfanylidenebutanoate Chemical class [Na+].[Na+].[O-]C(=O)CCC([O-])=S DLSNDYKSNXOOFM-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 claims 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims 1
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N ether Chemical class CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 claims 1
- 210000003746 feather Anatomy 0.000 claims 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 claims 1
- 239000011790 ferrous sulphate Substances 0.000 claims 1
- 235000003891 ferrous sulphate Nutrition 0.000 claims 1
- 239000004467 fishmeal Substances 0.000 claims 1
- 108010020566 glyoxal oxidase Proteins 0.000 claims 1
- 239000002515 guano Substances 0.000 claims 1
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims 1
- 239000010903 husk Substances 0.000 claims 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 claims 1
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 claims 1
- UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N iron oxide Inorganic materials [Fe]=O UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- RUTXIHLAWFEWGM-UHFFFAOYSA-H iron(3+) sulfate Chemical compound [Fe+3].[Fe+3].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O RUTXIHLAWFEWGM-UHFFFAOYSA-H 0.000 claims 1
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 claims 1
- 229910000360 iron(III) sulfate Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 claims 1
- 108010062085 ligninase Proteins 0.000 claims 1
- 239000010871 livestock manure Substances 0.000 claims 1
- 239000001095 magnesium carbonate Substances 0.000 claims 1
- 235000014380 magnesium carbonate Nutrition 0.000 claims 1
- ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L magnesium carbonate Chemical compound [Mg+2].[O-]C([O-])=O ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- 229910000021 magnesium carbonate Inorganic materials 0.000 claims 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 claims 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 claims 1
- AXZKOIWUVFPNLO-UHFFFAOYSA-N magnesium;oxygen(2-) Chemical compound [O-2].[Mg+2] AXZKOIWUVFPNLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- OJXVUEMVNWMNCR-UHFFFAOYSA-L magnesium;potassium;sulfate Chemical compound [Mg+2].[K+].[O-]S([O-])(=O)=O OJXVUEMVNWMNCR-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- 239000011565 manganese chloride Substances 0.000 claims 1
- 235000002867 manganese chloride Nutrition 0.000 claims 1
- 229940099607 manganese chloride Drugs 0.000 claims 1
- 229940099596 manganese sulfate Drugs 0.000 claims 1
- 239000011702 manganese sulphate Substances 0.000 claims 1
- 235000007079 manganese sulphate Nutrition 0.000 claims 1
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- 229940100892 mercury compound Drugs 0.000 claims 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 claims 1
- VLAPMBHFAWRUQP-UHFFFAOYSA-L molybdic acid Chemical compound O[Mo](O)(=O)=O VLAPMBHFAWRUQP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- 235000019837 monoammonium phosphate Nutrition 0.000 claims 1
- 239000006012 monoammonium phosphate Substances 0.000 claims 1
- 239000002362 mulch Substances 0.000 claims 1
- LZGUHMNOBNWABZ-UHFFFAOYSA-N n-nitro-n-phenylnitramide Chemical class [O-][N+](=O)N([N+]([O-])=O)C1=CC=CC=C1 LZGUHMNOBNWABZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N n-pentane Natural products CCCCC OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 claims 1
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 claims 1
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 claims 1
- 229940049964 oleate Drugs 0.000 claims 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 claims 1
- 108010003052 omptin outer membrane protease Proteins 0.000 claims 1
- NDLPOXTZKUMGOV-UHFFFAOYSA-N oxo(oxoferriooxy)iron hydrate Chemical compound O.O=[Fe]O[Fe]=O NDLPOXTZKUMGOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 235000020636 oyster Nutrition 0.000 claims 1
- 239000001814 pectin Substances 0.000 claims 1
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 claims 1
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 claims 1
- 239000010451 perlite Substances 0.000 claims 1
- 235000019362 perlite Nutrition 0.000 claims 1
- 239000003209 petroleum derivative Substances 0.000 claims 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000002367 phosphate rock Substances 0.000 claims 1
- OJMIONKXNSYLSR-UHFFFAOYSA-N phosphorous acid Chemical compound OP(O)O OJMIONKXNSYLSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 claims 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 claims 1
- XNGIFLGASWRNHJ-UHFFFAOYSA-L phthalate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)C1=CC=CC=C1C([O-])=O XNGIFLGASWRNHJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- 235000002949 phytic acid Nutrition 0.000 claims 1
- 229940068041 phytic acid Drugs 0.000 claims 1
- 239000000467 phytic acid Substances 0.000 claims 1
- 229940081066 picolinic acid Drugs 0.000 claims 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 claims 1
- 108010026466 polyproline Proteins 0.000 claims 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims 1
- 150000004804 polysaccharides Chemical class 0.000 claims 1
- 229920001021 polysulfide Polymers 0.000 claims 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 claims 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 claims 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 claims 1
- 239000004323 potassium nitrate Substances 0.000 claims 1
- 235000010333 potassium nitrate Nutrition 0.000 claims 1
- OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L potassium sulfate Chemical compound [K+].[K+].[O-]S([O-])(=O)=O OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- 229910052939 potassium sulfate Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000001120 potassium sulphate Substances 0.000 claims 1
- 235000011151 potassium sulphates Nutrition 0.000 claims 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims 1
- 239000002728 pyrethroid Substances 0.000 claims 1
- 150000003248 quinolines Chemical class 0.000 claims 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 claims 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims 1
- 239000002893 slag Substances 0.000 claims 1
- 239000011684 sodium molybdate Substances 0.000 claims 1
- 235000015393 sodium molybdate Nutrition 0.000 claims 1
- TVXXNOYZHKPKGW-UHFFFAOYSA-N sodium molybdate (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][Mo]([O-])(=O)=O TVXXNOYZHKPKGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N sodium nitrate Chemical class [Na+].[O-][N+]([O-])=O VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 235000010344 sodium nitrate Nutrition 0.000 claims 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 claims 1
- 235000010339 sodium tetraborate Nutrition 0.000 claims 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 claims 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 claims 1
- 239000010902 straw Substances 0.000 claims 1
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 claims 1
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M sulfonate Chemical compound [O-]S(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 1
- 239000002426 superphosphate Substances 0.000 claims 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 claims 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 claims 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 claims 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 claims 1
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 claims 1
- 150000003505 terpenes Chemical class 0.000 claims 1
- 235000007586 terpenes Nutrition 0.000 claims 1
- 150000003852 triazoles Chemical class 0.000 claims 1
- 108010074821 trimetaphosphatase Proteins 0.000 claims 1
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 claims 1
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 claims 1
- UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N triphosphoric acid Chemical compound OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 claims 1
- 150000003672 ureas Chemical class 0.000 claims 1
- 239000010455 vermiculite Substances 0.000 claims 1
- 235000019354 vermiculite Nutrition 0.000 claims 1
- 229910052902 vermiculite Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 claims 1
- 239000010803 wood ash Substances 0.000 claims 1
- 229920001221 xylan Polymers 0.000 claims 1
- 150000004823 xylans Chemical class 0.000 claims 1
- 239000011667 zinc carbonate Substances 0.000 claims 1
- 235000004416 zinc carbonate Nutrition 0.000 claims 1
- 229910000010 zinc carbonate Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000011787 zinc oxide Substances 0.000 claims 1
- LRXTYHSAJDENHV-UHFFFAOYSA-H zinc phosphate Chemical compound [Zn+2].[Zn+2].[Zn+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O LRXTYHSAJDENHV-UHFFFAOYSA-H 0.000 claims 1
- 229910000165 zinc phosphate Inorganic materials 0.000 claims 1
- NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate Chemical compound [Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- 229910000368 zinc sulfate Inorganic materials 0.000 claims 1
- 229960001763 zinc sulfate Drugs 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 abstract 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 34
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 31
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 19
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 19
- 241001157813 Cercospora Species 0.000 description 17
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 16
- 239000000047 product Substances 0.000 description 16
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 16
- 229930192334 Auxin Natural products 0.000 description 11
- 239000002363 auxin Substances 0.000 description 11
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 11
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 9
- 241000131448 Mycosphaerella Species 0.000 description 9
- 210000004215 spore Anatomy 0.000 description 9
- 241001660259 Cereus <cactus> Species 0.000 description 8
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 8
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 8
- 241000876848 Capnodium Species 0.000 description 7
- 241001480224 Heterodera Species 0.000 description 7
- 239000004062 cytokinin Substances 0.000 description 7
- UQHKFADEQIVWID-UHFFFAOYSA-N cytokinin Natural products C1=NC=2C(NCC=C(CO)C)=NC=NC=2N1C1CC(O)C(CO)O1 UQHKFADEQIVWID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 7
- 241000002793 Bacillus cereus VD200 Species 0.000 description 6
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 6
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 6
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 6
- 241000272168 Laridae Species 0.000 description 6
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 6
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 6
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 6
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 6
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 6
- 235000021242 lactoferrin Nutrition 0.000 description 6
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 6
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 6
- 241000216654 Armillaria Species 0.000 description 5
- 241000034280 Bacillus anthracis str. Sterne Species 0.000 description 5
- 241000002788 Bacillus cereus VD166 Species 0.000 description 5
- 241001508802 Diaporthe Species 0.000 description 5
- 108010063045 Lactoferrin Proteins 0.000 description 5
- 102000010445 Lactoferrin Human genes 0.000 description 5
- NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N N-benzyladenine Chemical compound N=1C=NC=2NC=NC=2C=1NCC1=CC=CC=C1 NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- CSSYQJWUGATIHM-IKGCZBKSSA-N l-phenylalanyl-l-lysyl-l-cysteinyl-l-arginyl-l-arginyl-l-tryptophyl-l-glutaminyl-l-tryptophyl-l-arginyl-l-methionyl-l-lysyl-l-lysyl-l-leucylglycyl-l-alanyl-l-prolyl-l-seryl-l-isoleucyl-l-threonyl-l-cysteinyl-l-valyl-l-arginyl-l-arginyl-l-alanyl-l-phenylal Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 CSSYQJWUGATIHM-IKGCZBKSSA-N 0.000 description 5
- 229940078795 lactoferrin Drugs 0.000 description 5
- 241000223600 Alternaria Species 0.000 description 4
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241001306278 Diaporthe amygdali Species 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Natural products NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241001314407 Microsphaera Species 0.000 description 4
- 241000228453 Pyrenophora Species 0.000 description 4
- 101000693619 Starmerella bombicola Lactone esterase Proteins 0.000 description 4
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 4
- 229920002549 elastin Polymers 0.000 description 4
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 3
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 3
- 241000380490 Anguina Species 0.000 description 3
- 108010062877 Bacteriocins Proteins 0.000 description 3
- 241000222380 Coleosporium Species 0.000 description 3
- 108010026206 Conalbumin Proteins 0.000 description 3
- 241001312183 Coniothyrium Species 0.000 description 3
- 241000461762 Cylindrosporium Species 0.000 description 3
- 241000235819 Cytospora Species 0.000 description 3
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 3
- 108010002069 Defensins Proteins 0.000 description 3
- 102000000541 Defensins Human genes 0.000 description 3
- 241000221997 Exobasidium Species 0.000 description 3
- 241000221779 Fusarium sambucinum Species 0.000 description 3
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 3
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 3
- 241001085796 Hyaloperonospora Species 0.000 description 3
- 241000228456 Leptosphaeria Species 0.000 description 3
- 241001143352 Meloidogyne Species 0.000 description 3
- 108700023158 Phenylalanine ammonia-lyases Proteins 0.000 description 3
- 239000000589 Siderophore Substances 0.000 description 3
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 3
- 230000000507 anthelmentic effect Effects 0.000 description 3
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 3
- UZKQTCBAMSWPJD-UQCOIBPSSA-N cis-zeatin Chemical compound OCC(/C)=C\CNC1=NC=NC2=C1N=CN2 UZKQTCBAMSWPJD-UQCOIBPSSA-N 0.000 description 3
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 3
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 210000004897 n-terminal region Anatomy 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- 230000012743 protein tagging Effects 0.000 description 3
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 3
- JLIDBLDQVAYHNE-YKALOCIXSA-N (+)-Abscisic acid Chemical compound OC(=O)/C=C(/C)\C=C\[C@@]1(O)C(C)=CC(=O)CC1(C)C JLIDBLDQVAYHNE-YKALOCIXSA-N 0.000 description 2
- ZLIGRGHTISHYNH-UHFFFAOYSA-N (E)-3-indolyl-acetaldoxime Natural products C1=CC=C2C(CC=NO)=CNC2=C1 ZLIGRGHTISHYNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZLIGRGHTISHYNH-SDQBBNPISA-N (Z)-indol-3-ylacetaldehyde oxime Chemical compound C1=CC=C2C(C\C=N/O)=CNC2=C1 ZLIGRGHTISHYNH-SDQBBNPISA-N 0.000 description 2
- WNCFBCKZRJDRKZ-UHFFFAOYSA-N 4-chloroindole-3-acetic acid Chemical compound C1=CC(Cl)=C2C(CC(=O)O)=CNC2=C1 WNCFBCKZRJDRKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001395644 Asteridiella Species 0.000 description 2
- 241000190146 Botryosphaeria Species 0.000 description 2
- 241000555706 Botryosphaeria dothidea Species 0.000 description 2
- 241000123650 Botrytis cinerea Species 0.000 description 2
- 241000905906 Cercospora apii Species 0.000 description 2
- 241001057651 Cercospora solani Species 0.000 description 2
- 241000222290 Cladosporium Species 0.000 description 2
- 241001149955 Cladosporium cladosporioides Species 0.000 description 2
- 241000222239 Colletotrichum truncatum Species 0.000 description 2
- 241000371644 Curvularia ravenelii Species 0.000 description 2
- 108010005843 Cysteine Proteases Proteins 0.000 description 2
- 241001508801 Diaporthe phaseolorum Species 0.000 description 2
- 241000471401 Dothiorella Species 0.000 description 2
- 108010014258 Elastin Proteins 0.000 description 2
- 102000016942 Elastin Human genes 0.000 description 2
- 101710114192 Elicitin Proteins 0.000 description 2
- 241000965549 Erysiphe penicillata Species 0.000 description 2
- 241000123326 Fomes Species 0.000 description 2
- 241000145502 Fusarium subglutinans Species 0.000 description 2
- 241001508332 Gaeumannomyces graminis var. graminis Species 0.000 description 2
- 241000897358 Georgefischeriaceae Species 0.000 description 2
- 241000923667 Globodera tabacum Species 0.000 description 2
- 241000190716 Gymnoconia nitens Species 0.000 description 2
- 241000613443 Helicobasidium longisporum Species 0.000 description 2
- 241001540513 Hoplolaimus Species 0.000 description 2
- 108010042653 IgA receptor Proteins 0.000 description 2
- 235000010254 Jasminum officinale Nutrition 0.000 description 2
- 240000005385 Jasminum sambac Species 0.000 description 2
- 241000662749 Marasmiellus stenophyllus Species 0.000 description 2
- 241000932771 Meliola Species 0.000 description 2
- 244000309623 Mycosphaerella angulata Species 0.000 description 2
- 241000905012 Neonectria candida Species 0.000 description 2
- 241000577892 Neonectria coccinea Species 0.000 description 2
- 241000190509 Ophiobolus Species 0.000 description 2
- 241000315044 Passalora arachidicola Species 0.000 description 2
- 102100034014 Prolyl 3-hydroxylase 3 Human genes 0.000 description 2
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 241001272906 Stagonosporopsis caricae Species 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 229940050528 albumin Drugs 0.000 description 2
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 230000006696 biosynthetic metabolic pathway Effects 0.000 description 2
- OWBTYPJTUOEWEK-UHFFFAOYSA-N butane-2,3-diol Chemical compound CC(O)C(C)O OWBTYPJTUOEWEK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 244000053095 fungal pathogen Species 0.000 description 2
- 150000002333 glycines Chemical class 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- ZOAMBXDOGPRZLP-UHFFFAOYSA-N indole-3-acetamide Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)N)=CNC2=C1 ZOAMBXDOGPRZLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DMCPFOBLJMLSNX-UHFFFAOYSA-N indole-3-acetonitrile Chemical compound C1=CC=C2C(CC#N)=CNC2=C1 DMCPFOBLJMLSNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JTEDVYBZBROSJT-UHFFFAOYSA-N indole-3-butyric acid Chemical compound C1=CC=C2C(CCCC(=O)O)=CNC2=C1 JTEDVYBZBROSJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 2
- MBBOMCVGYCRMEA-UHFFFAOYSA-N tryptophol Chemical compound C1=CC=C2C(CCO)=CNC2=C1 MBBOMCVGYCRMEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KLHVMDVTFJHVNF-UHFFFAOYSA-N 1,4-dihydroxyindole-2,3-dione Chemical compound N1(C(=O)C(=O)C=2C(=CC=CC1=2)O)O KLHVMDVTFJHVNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 1-prop-2-ynoxypropan-2-ol Chemical compound CC(O)COCC#C GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PGPWHULCWSVBCH-SNAWJCMRSA-N 2-[[(e)-but-1-enyl]amino]-3-methyl-7h-purin-4-ol Chemical compound CN1C(N/C=C/CC)=NC=C2NC=NC21O PGPWHULCWSVBCH-SNAWJCMRSA-N 0.000 description 1
- WLJVXDMOQOGPHL-PPJXEINESA-N 2-phenylacetic acid Chemical compound O[14C](=O)CC1=CC=CC=C1 WLJVXDMOQOGPHL-PPJXEINESA-N 0.000 description 1
- RSTKLPZEZYGQPY-UHFFFAOYSA-N 3-(indol-3-yl)pyruvic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)C(=O)O)=CNC2=C1 RSTKLPZEZYGQPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010000816 3-oxoadipate enol-lactonase Proteins 0.000 description 1
- 239000003563 4-chloroindole-3-acetic acid Substances 0.000 description 1
- CKOMXBHMKXXTNW-UHFFFAOYSA-N 6-methyladenine Chemical compound CNC1=NC=NC2=C1N=CN2 CKOMXBHMKXXTNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010051457 Acid Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 102000013563 Acid Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 241000353845 Acrocalymma walkeri Species 0.000 description 1
- 241001107053 Adelges tsugae Species 0.000 description 1
- 241000589155 Agrobacterium tumefaciens Species 0.000 description 1
- 241001103808 Albifimbria verrucaria Species 0.000 description 1
- 241001149961 Alternaria brassicae Species 0.000 description 1
- 241001157812 Alternaria brassicicola Species 0.000 description 1
- 241000027112 Alternaria carthami Species 0.000 description 1
- 241001608434 Alternaria cinerariae Species 0.000 description 1
- 241000946391 Alternaria citri Species 0.000 description 1
- 241000212251 Alternaria dauci Species 0.000 description 1
- 241000212252 Alternaria dianthi Species 0.000 description 1
- 241000323750 Alternaria dianthicola Species 0.000 description 1
- 241000795679 Alternaria euphorbiicola Species 0.000 description 1
- 241000412356 Alternaria leucanthemi Species 0.000 description 1
- 241000619298 Alternaria limicola Species 0.000 description 1
- 241001275965 Alternaria linicola Species 0.000 description 1
- 241000412366 Alternaria mali Species 0.000 description 1
- 241000266345 Alternaria radicina Species 0.000 description 1
- 241000429802 Alternaria saponariae Species 0.000 description 1
- 241000429811 Alternariaster helianthi Species 0.000 description 1
- 241000673723 Ampelophaga Species 0.000 description 1
- 241000380508 Anguina agrostis Species 0.000 description 1
- 241001101044 Anguina australis Species 0.000 description 1
- 241000380499 Anguina funesta Species 0.000 description 1
- 241001444083 Aphanomyces Species 0.000 description 1
- 241000172143 Aphanomyces cochlioides Species 0.000 description 1
- 241001444080 Aphanomyces euteiches Species 0.000 description 1
- 244000309627 Aphanomyces euteiches f. sp. pisi Species 0.000 description 1
- 241000294569 Aphelenchoides Species 0.000 description 1
- 241001370455 Aphelenchoides arachidis Species 0.000 description 1
- 241001425476 Apiosporina morbosa Species 0.000 description 1
- 241000795618 Armillaria solidipes Species 0.000 description 1
- 241000216674 Armillaria tabescens Species 0.000 description 1
- 241001337924 Arthrocladiella Species 0.000 description 1
- 241000222195 Ascochyta Species 0.000 description 1
- 241000128742 Ascochyta fabae Species 0.000 description 1
- 241000222197 Ascochyta rabiei Species 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000321828 Aureobasidium lini Species 0.000 description 1
- 108090000145 Bacillolysin Proteins 0.000 description 1
- 241000343778 Bacillus anthracis str. H9401 Species 0.000 description 1
- 231100000699 Bacterial toxin Toxicity 0.000 description 1
- 244000309494 Bipolaris glycines Species 0.000 description 1
- 241000228438 Bipolaris maydis Species 0.000 description 1
- 241001450781 Bipolaris oryzae Species 0.000 description 1
- 241000231619 Bipolaris sacchari Species 0.000 description 1
- 241001262172 Bipolaris setariae Species 0.000 description 1
- 241000190150 Bipolaris sorokiniana Species 0.000 description 1
- 241001262168 Bipolaris stenospila Species 0.000 description 1
- 241000266355 Bipolaris tetramera Species 0.000 description 1
- 241000121260 Bipolaris victoriae Species 0.000 description 1
- 241000228439 Bipolaris zeicola Species 0.000 description 1
- 241000000632 Biscogniauxia capnodes Species 0.000 description 1
- 241000142563 Biscogniauxia marginata Species 0.000 description 1
- 241000393031 Biscogniauxia nummularia Species 0.000 description 1
- 241000222478 Bjerkandera adusta Species 0.000 description 1
- 241000235553 Blakeslea trispora Species 0.000 description 1
- 241001480061 Blumeria graminis Species 0.000 description 1
- 241000895526 Blumeria graminis f. sp. avenae Species 0.000 description 1
- 241000895502 Blumeria graminis f. sp. tritici Species 0.000 description 1
- 241001273385 Boeremia lycopersici Species 0.000 description 1
- 244000309610 Botryosphaeria cocogena Species 0.000 description 1
- 244000309603 Botryosphaeria disrupta Species 0.000 description 1
- 241001447136 Botryosphaeria quercuum Species 0.000 description 1
- 241001153761 Botryosporium Species 0.000 description 1
- 241000123649 Botryotinia Species 0.000 description 1
- 241001065413 Botrytis fabae Species 0.000 description 1
- 241000233685 Bremia lactucae Species 0.000 description 1
- 241000556446 Brenneria salicis Species 0.000 description 1
- 241000589638 Burkholderia glumae Species 0.000 description 1
- 241001186912 Cactodera cacti Species 0.000 description 1
- 241001545603 Cadophora malorum Species 0.000 description 1
- 241000127127 Caespitotheca Species 0.000 description 1
- 241000899379 Calonectria indusiata Species 0.000 description 1
- 241000124182 Calonectria kyotensis Species 0.000 description 1
- 241000122175 Calonectria pteridis Species 0.000 description 1
- 241000384752 Calonectria quinqueseptata Species 0.000 description 1
- 241000959626 Calvatia Species 0.000 description 1
- 241001264599 Camarotella costaricensis Species 0.000 description 1
- 241001478315 Candidatus Liberibacter asiaticus Species 0.000 description 1
- 108090000489 Carboxy-Lyases Proteins 0.000 description 1
- 102000004031 Carboxy-Lyases Human genes 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241001065134 Catenulocercospora fusimaculans Species 0.000 description 1
- 241001115395 Caulimoviridae Species 0.000 description 1
- 241000719323 Cephaleuros parasiticus Species 0.000 description 1
- 241001435629 Cephalosporium gramineum Species 0.000 description 1
- 241000221544 Ceratobasidium Species 0.000 description 1
- 241000221545 Ceratobasidium cornigerum Species 0.000 description 1
- 241000934679 Ceratobasidium noxium Species 0.000 description 1
- 241001085757 Ceratobasidium ramicola Species 0.000 description 1
- 244000309514 Ceratobasidium setariae Species 0.000 description 1
- 241001085758 Ceratobasidium stevensii Species 0.000 description 1
- 241001344837 Ceratobasidium theobromae Species 0.000 description 1
- 241001247264 Ceratocystis adiposa Species 0.000 description 1
- 241000221868 Ceratocystis fimbriata Species 0.000 description 1
- 241001331773 Cercospora apiicola Species 0.000 description 1
- 241000338134 Cercospora asparagi Species 0.000 description 1
- 244000309655 Cercospora atrofiliformis Species 0.000 description 1
- 241000530549 Cercospora beticola Species 0.000 description 1
- 241000515070 Cercospora brassicicola Species 0.000 description 1
- 241000113395 Cercospora capsici Species 0.000 description 1
- 241001597133 Cercospora carotae Species 0.000 description 1
- 241000515063 Cercospora gerberae Species 0.000 description 1
- 241000315055 Cercospora hayi Species 0.000 description 1
- 241001658057 Cercospora kikuchii Species 0.000 description 1
- 244000309532 Cercospora lentis Species 0.000 description 1
- 244000309656 Cercospora longipes Species 0.000 description 1
- 241001366070 Cercospora longissima Species 0.000 description 1
- 244000309550 Cercospora medicaginis Species 0.000 description 1
- 244000309644 Cercospora minima Species 0.000 description 1
- 241000437818 Cercospora vignicola Species 0.000 description 1
- 241000907567 Choanephora Species 0.000 description 1
- 241001451061 Choanephora cucurbitarum Species 0.000 description 1
- 241000602352 Choanephora infundibulifera Species 0.000 description 1
- 241000593874 Chondrostereum purpureum Species 0.000 description 1
- 241000865175 Chrysomyxa Species 0.000 description 1
- 241001556664 Chrysomyxa ledicola Species 0.000 description 1
- 241000834246 Chrysomyxa piperiana Species 0.000 description 1
- 241001409734 Chrysomyxa rhododendri Species 0.000 description 1
- 241001065123 Chuppomyces handelii Species 0.000 description 1
- 241001635604 Cladosporium arthropodii Species 0.000 description 1
- 241000395101 Cladosporium echinulatum Species 0.000 description 1
- 241001149956 Cladosporium herbarum Species 0.000 description 1
- 241001065110 Clarohilum henningsii Species 0.000 description 1
- 241000228437 Cochliobolus Species 0.000 description 1
- 241001205279 Coleosporium ipomoeae Species 0.000 description 1
- 241000222381 Coleosporium tussilaginis Species 0.000 description 1
- 241000222199 Colletotrichum Species 0.000 description 1
- 241001123536 Colletotrichum acutatum Species 0.000 description 1
- 241001133184 Colletotrichum agaves Species 0.000 description 1
- 244000309633 Colletotrichum arachidis Species 0.000 description 1
- 241000706636 Colletotrichum cereale Species 0.000 description 1
- 241001626333 Colletotrichum crassipes Species 0.000 description 1
- 241001480648 Colletotrichum dematium Species 0.000 description 1
- 241001480649 Colletotrichum destructivum Species 0.000 description 1
- 241001123532 Colletotrichum fragariae Species 0.000 description 1
- 241001529387 Colletotrichum gloeosporioides Species 0.000 description 1
- 241001466031 Colletotrichum gossypii Species 0.000 description 1
- 241001600676 Colletotrichum higginsianum Species 0.000 description 1
- 241001344659 Colletotrichum kahawae subsp. kahawae Species 0.000 description 1
- 241001120669 Colletotrichum lindemuthianum Species 0.000 description 1
- 241000289517 Colletotrichum lini Species 0.000 description 1
- 244000309634 Colletotrichum mangenoti Species 0.000 description 1
- 241000222233 Colletotrichum musae Species 0.000 description 1
- 241000606071 Colletotrichum nigrum Species 0.000 description 1
- 241000222235 Colletotrichum orbiculare Species 0.000 description 1
- 241001306229 Colletotrichum spinaciae Species 0.000 description 1
- 241000456686 Colletotrichum sublineola Species 0.000 description 1
- 241001480730 Colletotrichum trichellum Species 0.000 description 1
- 241000222237 Colletotrichum trifolii Species 0.000 description 1
- 101000981560 Comamonas testosteroni 2-pyrone-4,6-dicarbaxylate hydrolase Proteins 0.000 description 1
- 241001087348 Coniella castaneicola Species 0.000 description 1
- 241000326334 Coniella diplodiella Species 0.000 description 1
- 241000335952 Coniella fragariae Species 0.000 description 1
- 244000309643 Coniothecium chomatosporum Species 0.000 description 1
- 241001661271 Coniothyrium wernsdorffiae Species 0.000 description 1
- 241001408064 Coprinopsis psychromorbida Species 0.000 description 1
- 241000433975 Corallomycetella repens Species 0.000 description 1
- 241001548492 Coreus Species 0.000 description 1
- 241001288809 Coriolopsis Species 0.000 description 1
- 241001288817 Coriolopsis gallica Species 0.000 description 1
- 244000309674 Corticium invisum Species 0.000 description 1
- 244000309611 Corticium penicillatum Species 0.000 description 1
- 244000309675 Corticium theae Species 0.000 description 1
- 241000745230 Corynespora torulosa Species 0.000 description 1
- 241000652564 Coryneum Species 0.000 description 1
- 241000709673 Coxsackievirus B4 Species 0.000 description 1
- 241001123528 Cronartium ribicola Species 0.000 description 1
- 241000949609 Cryphonectriaceae Species 0.000 description 1
- 241000123288 Cryptoporus Species 0.000 description 1
- 241001116394 Cryptosporella Species 0.000 description 1
- 241001446627 Cryptosporiopsis tarraconensis Species 0.000 description 1
- 241000223208 Curvularia Species 0.000 description 1
- 241001100121 Curvularia caricae-papayae Species 0.000 description 1
- 241000295670 Curvularia cymbopogonis Species 0.000 description 1
- 241000367101 Curvularia hawaiiensis Species 0.000 description 1
- 241000223211 Curvularia lunata Species 0.000 description 1
- 241001586664 Curvularia senegalensis Species 0.000 description 1
- 241000171730 Curvularia trifolii Species 0.000 description 1
- 241000072225 Curvularia tuberculata Species 0.000 description 1
- 241000723247 Cylindrocarpon Species 0.000 description 1
- 244000309573 Cylindrocarpon musae Species 0.000 description 1
- 241001324718 Cylindrocladiella camelliae Species 0.000 description 1
- 241000975676 Cylindrocladiella parva Species 0.000 description 1
- 241000122173 Cylindrocladium Species 0.000 description 1
- 241001312162 Cylindrocladium clavatum Species 0.000 description 1
- 244000309673 Cylindrocladium lanceolatum Species 0.000 description 1
- 241000272272 Cymadothea trifolii Species 0.000 description 1
- 241000324121 Cytospora leucostoma Species 0.000 description 1
- 244000309602 Cytospora palmarum Species 0.000 description 1
- 241001368840 Cytospora personata Species 0.000 description 1
- 241001102823 Cytospora sacchari Species 0.000 description 1
- 241001345881 Cytospora sacculus Species 0.000 description 1
- 241000480111 Cytospora terebinthi Species 0.000 description 1
- 241000031930 Dactuliophora Species 0.000 description 1
- 241000123276 Daedaleopsis confragosa Species 0.000 description 1
- 241000969022 Dasineura Species 0.000 description 1
- 241000045372 Datronia scutellata Species 0.000 description 1
- 244000309665 Deightoniella papuana Species 0.000 description 1
- 241000555268 Dendroides Species 0.000 description 1
- 241001228898 Dendrophoma Species 0.000 description 1
- 241000032598 Dendrophora Species 0.000 description 1
- 241001547000 Dermea Species 0.000 description 1
- 241000330280 Diaporthaceae Species 0.000 description 1
- 241000707499 Diaporthe arctii Species 0.000 description 1
- 241000866066 Diaporthe caulivora Species 0.000 description 1
- 241001645342 Diaporthe citri Species 0.000 description 1
- 241001235320 Diaporthe conorum Species 0.000 description 1
- 241000042001 Diaporthe helianthi Species 0.000 description 1
- 241000257726 Diaporthe melonis Species 0.000 description 1
- 241001645345 Diaporthe perniciosa Species 0.000 description 1
- 241000993915 Diaporthe rudis Species 0.000 description 1
- 241000382787 Diaporthe sojae Species 0.000 description 1
- 241001645343 Diaporthe tanakae Species 0.000 description 1
- 241000633687 Diaporthe toxica Species 0.000 description 1
- 241001331024 Dicarpella dryina Species 0.000 description 1
- 241001273416 Didymella arachidicola Species 0.000 description 1
- 241001273467 Didymella pinodes Species 0.000 description 1
- 244000309497 Dilophospora alopecuri Species 0.000 description 1
- 244000309663 Dimeriella sacchari Species 0.000 description 1
- 241000461780 Diplocarpon Species 0.000 description 1
- 241000461782 Diplocarpon mespili Species 0.000 description 1
- 241000663351 Diplocarpon rosae Species 0.000 description 1
- 241000935926 Diplodia Species 0.000 description 1
- 241000662779 Diplodia corticola Species 0.000 description 1
- 244000309591 Diplodia manihoti Species 0.000 description 1
- 241001674393 Diplodia mutila Species 0.000 description 1
- 244000309681 Diplodia theae-sinensis Species 0.000 description 1
- 241000898353 Discosia artocreas Species 0.000 description 1
- 241001523339 Discula theae-sinensis Species 0.000 description 1
- 241001065542 Distocercospora Species 0.000 description 1
- 241000399934 Ditylenchus Species 0.000 description 1
- 241000536866 Ditylenchus africanus Species 0.000 description 1
- 241000710421 Ditylenchus angustus Species 0.000 description 1
- 241000399948 Ditylenchus destructor Species 0.000 description 1
- 241000399949 Ditylenchus dipsaci Species 0.000 description 1
- 241001525375 Dolichodorus heterocephalus Species 0.000 description 1
- 241001326550 Dothideomycetes Species 0.000 description 1
- 241000407125 Dothiorella gregaria Species 0.000 description 1
- 241000887180 Dothiorella ulmi Species 0.000 description 1
- 241001465185 Drechslera avenae Species 0.000 description 1
- 241000906475 Drechslera campanulata Species 0.000 description 1
- 241000992431 Drechslera dematioidea Species 0.000 description 1
- 241000081867 Drechslera gigantea Species 0.000 description 1
- 241000591358 Eballistra oryzae Species 0.000 description 1
- 241000380050 Eballistraceae Species 0.000 description 1
- 241000123322 Echinodontium tinctorium Species 0.000 description 1
- 241001318114 Endoconidiophora coerulescens Species 0.000 description 1
- 244000309695 Entyloma lineatum Species 0.000 description 1
- 241000984019 Erysiphe cruciferarum Species 0.000 description 1
- 241001246394 Erysiphe flexuosa Species 0.000 description 1
- 241001337814 Erysiphe glycines Species 0.000 description 1
- 241001609665 Erysiphe heraclei Species 0.000 description 1
- 241000322816 Erysiphe hommae Species 0.000 description 1
- 241001489205 Erysiphe pisi Species 0.000 description 1
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 1
- 241000667469 Eutypella parasitica Species 0.000 description 1
- 241001234058 Eutypella scoparia Species 0.000 description 1
- 241001411323 Exobasidium reticulatum Species 0.000 description 1
- 241001661371 Exobasidium vexans Species 0.000 description 1
- 102000018389 Exopeptidases Human genes 0.000 description 1
- 108010091443 Exopeptidases Proteins 0.000 description 1
- 241000223682 Exophiala Species 0.000 description 1
- 241001065087 Exosporium livistonicola Species 0.000 description 1
- 241000847652 Fomes fasciatus Species 0.000 description 1
- 241000927584 Frankliniella occidentalis Species 0.000 description 1
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 description 1
- 241000223193 Fusarium acuminatum Species 0.000 description 1
- 241000122692 Fusarium avenaceum Species 0.000 description 1
- 241000577846 Fusarium dimerum Species 0.000 description 1
- 241000879295 Fusarium equiseti Species 0.000 description 1
- 241000221778 Fusarium fujikuroi Species 0.000 description 1
- 241000223195 Fusarium graminearum Species 0.000 description 1
- 241001208371 Fusarium incarnatum Species 0.000 description 1
- 241000223197 Fusarium lateritium Species 0.000 description 1
- 241000577840 Fusarium merismoides Species 0.000 description 1
- 241000879841 Fusarium oxysporum f. cubense Species 0.000 description 1
- 241001251196 Fusarium oxysporum f. sp. albedinis Species 0.000 description 1
- 241000509436 Fusarium oxysporum f. sp. asparagi Species 0.000 description 1
- 241000879839 Fusarium oxysporum f. sp. batatas Species 0.000 description 1
- 241000210517 Fusarium oxysporum f. sp. betae Species 0.000 description 1
- 241000210509 Fusarium oxysporum f. sp. cannabis Species 0.000 description 1
- 244000309593 Fusarium oxysporum f. sp. citri Species 0.000 description 1
- 244000309615 Fusarium oxysporum f. sp. coffea Species 0.000 description 1
- 241000778220 Fusarium oxysporum f. sp. cyclaminis Species 0.000 description 1
- 241000144767 Fusarium oxysporum f. sp. dianthi Species 0.000 description 1
- 241000464527 Fusarium oxysporum f. sp. lentis Species 0.000 description 1
- 241000509501 Fusarium oxysporum f. sp. lini Species 0.000 description 1
- 241000611205 Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici Species 0.000 description 1
- 241000912951 Fusarium oxysporum f. sp. medicaginis Species 0.000 description 1
- 241000790913 Fusarium oxysporum f. sp. pisi Species 0.000 description 1
- 241000879804 Fusarium oxysporum f. sp. radicis-lycopersici Species 0.000 description 1
- 241000690372 Fusarium proliferatum Species 0.000 description 1
- 241000232939 Fusarium redolens Species 0.000 description 1
- 241000145511 Fusarium sacchari Species 0.000 description 1
- 241000223192 Fusarium sporotrichioides Species 0.000 description 1
- 241000577837 Fusarium stilboides Species 0.000 description 1
- 241000242854 Fusarium xylarioides Species 0.000 description 1
- 241000414123 Fuscoporia torulosa Species 0.000 description 1
- 241001674040 Fusicladium caryigenum Species 0.000 description 1
- 244000309628 Fusicladium pisicola Species 0.000 description 1
- 241000453701 Galactomyces candidum Species 0.000 description 1
- 241001548405 Galeatus Species 0.000 description 1
- 244000309594 Ganoderma brownii Species 0.000 description 1
- 241001480604 Ganoderma lobatum Species 0.000 description 1
- 241000401653 Ganoderma orbiforme Species 0.000 description 1
- 241001389734 Ganoderma philippii Species 0.000 description 1
- 241001460418 Ganoderma tornatum Species 0.000 description 1
- 241001460420 Ganoderma zonatum Species 0.000 description 1
- 241000823645 Geastrumia polystigmatis Species 0.000 description 1
- 241000897346 Georgefischeriales Species 0.000 description 1
- 241000973882 Geosmithia Species 0.000 description 1
- 241000178293 Geotrichum klebahnii Species 0.000 description 1
- 239000005980 Gibberellic acid Substances 0.000 description 1
- 241000090234 Gibellina cerealis Species 0.000 description 1
- 241001451056 Gilbertella persicaria Species 0.000 description 1
- 241000432485 Gjaerumiaceae Species 0.000 description 1
- 241001489135 Globodera pallida Species 0.000 description 1
- 241001442497 Globodera rostochiensis Species 0.000 description 1
- 241000223247 Gloeocercospora Species 0.000 description 1
- 241001672252 Gloeocystidiellum porosum Species 0.000 description 1
- 241000599851 Gloeophyllum mexicanum Species 0.000 description 1
- 241001492300 Gloeophyllum trabeum Species 0.000 description 1
- 241000035902 Gloeoporus dichrous Species 0.000 description 1
- 241000461774 Gloeosporium Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 244000309658 Gnomonia iliau Species 0.000 description 1
- 241000896246 Golovinomyces cichoracearum Species 0.000 description 1
- 241001149292 Granulobasidium vellereum Species 0.000 description 1
- 241000221477 Graphiola phoenicis Species 0.000 description 1
- 241000190550 Graphium <Microascales incertae sedis> Species 0.000 description 1
- 241000947781 Graphium rubrum Species 0.000 description 1
- 244000309501 Graphyllium pentamerum Species 0.000 description 1
- 241000532524 Grovesinia pyramidalis Species 0.000 description 1
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 description 1
- 241001572348 Guignardia camelliae Species 0.000 description 1
- 241001212208 Gymnopus dryophilus Species 0.000 description 1
- 241000190714 Gymnosporangium clavipes Species 0.000 description 1
- 241001152591 Gymnosporangium globosum Species 0.000 description 1
- 241001516047 Gymnosporangium juniperi-virginianae Species 0.000 description 1
- 241000428751 Gymnosporangium kernianum Species 0.000 description 1
- 241000878902 Gymnosporangium nelsonii Species 0.000 description 1
- 241001409809 Gymnosporangium sabinae Species 0.000 description 1
- 241001540851 Gymnosporangium yamadae Species 0.000 description 1
- 244000309571 Haplobasidion musae Species 0.000 description 1
- 241000223642 Helicobasidium purpureum Species 0.000 description 1
- 241001148481 Helicotylenchus Species 0.000 description 1
- 241000710418 Helicotylenchus dihystera Species 0.000 description 1
- 241001445511 Helicotylenchus multicinctus Species 0.000 description 1
- 244000309554 Helminthosporium papulosum Species 0.000 description 1
- 241000592938 Helminthosporium solani Species 0.000 description 1
- 241000221661 Helotiales Species 0.000 description 1
- 241001019752 Hemicriconemoides kanayaensis Species 0.000 description 1
- 241001268452 Hemicriconemoides strictathecatus Species 0.000 description 1
- 244000309598 Hemicycliophora arenaria Species 0.000 description 1
- 241001667713 Hendersonia Species 0.000 description 1
- 244000309676 Hendersonia theicola Species 0.000 description 1
- 244000126211 Hericium coralloides Species 0.000 description 1
- 235000000035 Hericium coralloides Nutrition 0.000 description 1
- 241000735439 Heterobasidion annosum Species 0.000 description 1
- 241000916512 Heterodera arenaria Species 0.000 description 1
- 241001481225 Heterodera avenae Species 0.000 description 1
- 241000040386 Heterodera bifenestra Species 0.000 description 1
- 241000040385 Heterodera cajani Species 0.000 description 1
- 241000057394 Heterodera cardiolata Species 0.000 description 1
- 241000040388 Heterodera carotae Species 0.000 description 1
- 241000040387 Heterodera ciceri Species 0.000 description 1
- 241000040390 Heterodera cruciferae Species 0.000 description 1
- 241001186915 Heterodera elachista Species 0.000 description 1
- 241000040426 Heterodera filipjevi Species 0.000 description 1
- 241000580319 Heterodera goettingiana Species 0.000 description 1
- 241000916533 Heterodera hordecalis Species 0.000 description 1
- 241000040429 Heterodera humuli Species 0.000 description 1
- 241000040431 Heterodera latipons Species 0.000 description 1
- 241000040434 Heterodera medicaginis Species 0.000 description 1
- 241000040432 Heterodera oryzicola Species 0.000 description 1
- 244000309541 Heterodera rosii Species 0.000 description 1
- 241000040484 Heterodera sacchari Species 0.000 description 1
- 241000379510 Heterodera schachtii Species 0.000 description 1
- 241000040487 Heterodera trifolii Species 0.000 description 1
- 241000243783 Heteroderidae Species 0.000 description 1
- 241000197070 Hexagonia hydnoides Species 0.000 description 1
- 241001415148 Hirschmanniella oryzae Species 0.000 description 1
- 241001540512 Hoplolaimidae Species 0.000 description 1
- 241001254664 Hoplolaimus columbus Species 0.000 description 1
- 241001575670 Hoplolaimus indicus Species 0.000 description 1
- 241001032366 Hoplolaimus magnistylus Species 0.000 description 1
- 241001445519 Hoplolaimus seinhorsti Species 0.000 description 1
- 241001318249 Huntiella moniliformis Species 0.000 description 1
- 241000433137 Hyaloperonospora arabidopsidis Species 0.000 description 1
- 241000342321 Hyaloperonospora brassicae Species 0.000 description 1
- 244000267823 Hydrangea macrophylla Species 0.000 description 1
- 235000014486 Hydrangea macrophylla Nutrition 0.000 description 1
- 241000142479 Hydropisphaera peziza Species 0.000 description 1
- 101150005343 INHA gene Proteins 0.000 description 1
- 241000908271 Ilyonectria destructans Species 0.000 description 1
- 241000366966 Juglanconis juglandina Species 0.000 description 1
- FAIXYKHYOGVFKA-UHFFFAOYSA-N Kinetin Natural products N=1C=NC=2N=CNC=2C=1N(C)C1=CC=CO1 FAIXYKHYOGVFKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- QJPWUUJVYOJNMH-VKHMYHEASA-N L-homoserine lactone Chemical compound N[C@H]1CCOC1=O QJPWUUJVYOJNMH-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 241000060886 Lasiodiplodia laeliocattleyae Species 0.000 description 1
- 241000190144 Lasiodiplodia theobromae Species 0.000 description 1
- 241000893206 Lepteutypa cupressi Species 0.000 description 1
- 241001201047 Leptodontidium elatius var. elatius Species 0.000 description 1
- 241000382751 Leptographium Species 0.000 description 1
- 241000009859 Leptographium wageneri Species 0.000 description 1
- 241001330696 Leptosphaeria coniothyrium Species 0.000 description 1
- 241000228457 Leptosphaeria maculans Species 0.000 description 1
- 244000309569 Leptosphaeria musarum Species 0.000 description 1
- 244000309549 Leptosphaeria pratensis Species 0.000 description 1
- 241000557201 Leptosphaeria sacchari Species 0.000 description 1
- 241000555725 Leptosphaerulina crassiasca Species 0.000 description 1
- 241001198950 Leptosphaerulina trifolii Species 0.000 description 1
- 244000309490 Leptothyrium Species 0.000 description 1
- 244000309551 Leptotrochila medicaginis Species 0.000 description 1
- 241001116371 Leucostoma auerswaldii Species 0.000 description 1
- 241000986453 Leucostoma kunzei Species 0.000 description 1
- 241000896235 Leveillula Species 0.000 description 1
- 244000309534 Leveillula leguminosarum f. lentis Species 0.000 description 1
- 241001478324 Liberibacter Species 0.000 description 1
- 241001344131 Magnaporthe grisea Species 0.000 description 1
- 241000600815 Mamianiella coryli Species 0.000 description 1
- 244000309609 Marasmiellus cocophilus Species 0.000 description 1
- 244000309572 Marasmiellus inoderma Species 0.000 description 1
- 244000309582 Marasmiellus scandens Species 0.000 description 1
- 241001480581 Marasmius Species 0.000 description 1
- 241001618139 Marasmius crinis-equi Species 0.000 description 1
- 244000309664 Marasmius sacchari Species 0.000 description 1
- 244000309626 Marasmius sarmentosus Species 0.000 description 1
- 241001618106 Marasmius tenuissimus Species 0.000 description 1
- 241000330845 Marssonina coronariae Species 0.000 description 1
- 241001615890 Mauginiella scaettae Species 0.000 description 1
- 241000221573 Melampsora Species 0.000 description 1
- 241000091973 Melampsora albertensis Species 0.000 description 1
- 241000221574 Melampsora lini Species 0.000 description 1
- 241001633129 Melampsora occidentalis Species 0.000 description 1
- 241000565728 Melanconis carthusiana Species 0.000 description 1
- 241000932774 Meliolaceae Species 0.000 description 1
- 241000243784 Meloidogyne arenaria Species 0.000 description 1
- 241000144336 Meloidogyne artiellia Species 0.000 description 1
- 244000309689 Meloidogyne brevicauda Species 0.000 description 1
- 241000611260 Meloidogyne chitwoodi Species 0.000 description 1
- 241000831628 Meloidogyne enterolobii Species 0.000 description 1
- 241000243786 Meloidogyne incognita Species 0.000 description 1
- 241000243785 Meloidogyne javanica Species 0.000 description 1
- 241001013479 Meloidogyne naasi Species 0.000 description 1
- 241000821263 Meloidogyne partityla Species 0.000 description 1
- 244000309690 Meloidogyne thamesi Species 0.000 description 1
- 241000123318 Meripilus giganteus Species 0.000 description 1
- 241001148509 Merlinius brevidens Species 0.000 description 1
- 241000035895 Meruliopsis Species 0.000 description 1
- 241001540472 Mesocriconema xenoplax Species 0.000 description 1
- 108010006035 Metalloproteases Proteins 0.000 description 1
- 102000005741 Metalloproteases Human genes 0.000 description 1
- 241000221495 Microbotryum violaceum Species 0.000 description 1
- 241001486950 Microdochium bolleyi Species 0.000 description 1
- 241000171756 Microdochium phragmitis Species 0.000 description 1
- 241001022799 Microdochium sorghi Species 0.000 description 1
- 241001480037 Microsporum Species 0.000 description 1
- 241001459558 Monographella nivalis Species 0.000 description 1
- 241000308702 Monographella nivalis var. nivalis Species 0.000 description 1
- 241000711513 Mononegavirales Species 0.000 description 1
- 241000012612 Monosporascus cannonballus Species 0.000 description 1
- 241001533011 Monosporascus eutypoides Species 0.000 description 1
- 241000306281 Mucor ambiguus Species 0.000 description 1
- 241000907556 Mucor hiemalis Species 0.000 description 1
- 241000010214 Mucor hiemalis f. silvaticus Species 0.000 description 1
- 241001149951 Mucor mucedo Species 0.000 description 1
- 244000309698 Mucor paronychius Species 0.000 description 1
- 241001506781 Mucor piriformis Species 0.000 description 1
- 241000235526 Mucor racemosus Species 0.000 description 1
- 241000131430 Mycena Species 0.000 description 1
- 241001296613 Mycena citricolor Species 0.000 description 1
- 241000315058 Mycocentrospora acerina Species 0.000 description 1
- 241000865904 Mycoleptodiscus terrestris Species 0.000 description 1
- 241000285727 Mycosphaerella coffeicola Species 0.000 description 1
- 241001620021 Mycosphaerella eumusae Species 0.000 description 1
- 244000309595 Mycosphaerella horii Species 0.000 description 1
- 244000309596 Mycosphaerella lageniformis Species 0.000 description 1
- 241000319049 Mycosphaerella musae Species 0.000 description 1
- 244000309605 Mycosphaerella palmicola Species 0.000 description 1
- 241000633856 Mycosphaerella pomi Species 0.000 description 1
- 241001597095 Mycosphaerella pyri Species 0.000 description 1
- 241000791801 Mycosphaerella recutita Species 0.000 description 1
- 244000309657 Mycosphaerella striatiformans Species 0.000 description 1
- 244000309660 Myriogenospora aciculispora Species 0.000 description 1
- 241000201432 Nacobbus aberrans Species 0.000 description 1
- 244000309479 Nacobbus dorsalis Species 0.000 description 1
- 241001331011 Naevala Species 0.000 description 1
- 241000379990 Nakataea oryzae Species 0.000 description 1
- 241001409805 Naohidemyces vaccinii Species 0.000 description 1
- 241001226034 Nectria <echinoderm> Species 0.000 description 1
- 241001149471 Nectria cinnabarina Species 0.000 description 1
- 241000124229 Nectria pseudotrichia Species 0.000 description 1
- 241001308575 Neglecta Species 0.000 description 1
- 241000568801 Nemania diffusa Species 0.000 description 1
- 241001558797 Nemania serpens Species 0.000 description 1
- 244000309565 Neocordana johnstonii Species 0.000 description 1
- 241001365887 Neocordana musae Species 0.000 description 1
- 241000087425 Neofusicoccum pistaciae Species 0.000 description 1
- 241000190142 Neofusicoccum ribis Species 0.000 description 1
- 241000556984 Neonectria galligena Species 0.000 description 1
- 241000083076 Neopseudocercosporella brassicae Species 0.000 description 1
- 102000035092 Neutral proteases Human genes 0.000 description 1
- 108091005507 Neutral proteases Proteins 0.000 description 1
- CHIFTAQVXHNVRW-UHFFFAOYSA-N Nitrile-1H-Indole-3-carboxylic acid Natural products C1=CC=C2C(C#N)=CNC2=C1 CHIFTAQVXHNVRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001329956 Nothopassalora personata Species 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 244000309597 Oidium tingitaninum Species 0.000 description 1
- 241001219478 Olpidium brassicae Species 0.000 description 1
- 241000414098 Onnia tomentosa Species 0.000 description 1
- 241001515915 Ophiostoma piliferum Species 0.000 description 1
- 241000304763 Ophiostoma pluriannulatum Species 0.000 description 1
- 241000221671 Ophiostoma ulmi Species 0.000 description 1
- 241001314532 Orthoceras Species 0.000 description 1
- 241000932831 Pantoea stewartii Species 0.000 description 1
- 241001135514 Paraburkholderia caryophylli Species 0.000 description 1
- 241001099903 Paramyrothecium roridum Species 0.000 description 1
- 241000572009 Paraphaeosphaeria michotii Species 0.000 description 1
- 244000309519 Passalora concors Species 0.000 description 1
- 241000222291 Passalora fulva Species 0.000 description 1
- 244000309667 Passalora koepkei Species 0.000 description 1
- 241001347945 Passalora vaginae Species 0.000 description 1
- 241000588701 Pectobacterium carotovorum Species 0.000 description 1
- 241000012062 Phacidium lauri Species 0.000 description 1
- 241001341778 Phaeomycocentrospora cantuariensis Species 0.000 description 1
- 241000210649 Phyllosticta ampelicida Species 0.000 description 1
- 241000519851 Phyllosticta capitalensis Species 0.000 description 1
- 241000555714 Phyllosticta citricarpa Species 0.000 description 1
- 241001270527 Phyllosticta citrullina Species 0.000 description 1
- 241000770398 Phyllosticta maculata Species 0.000 description 1
- 241000519897 Phyllosticta philoprina Species 0.000 description 1
- 241000759396 Plenodomus libanotidis Species 0.000 description 1
- 241000886313 Plenodomus lindquistii Species 0.000 description 1
- 101710150593 Protein beta Proteins 0.000 description 1
- 241001341772 Pseudocercospora circumscissa Species 0.000 description 1
- 241000791831 Pseudocercospora cruenta Species 0.000 description 1
- 241000184297 Pseudocercospora musae Species 0.000 description 1
- 244000309672 Pseudocercospora ocellata Species 0.000 description 1
- 241000298924 Pseudocercospora pistacina Species 0.000 description 1
- 241000791825 Pseudocercospora rubi Species 0.000 description 1
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 1
- 241000589615 Pseudomonas syringae Species 0.000 description 1
- 244000309500 Pyrenophora wirreganensis Species 0.000 description 1
- 244000184734 Pyrus japonica Species 0.000 description 1
- 241001064040 Ragnhildiana diffusa Species 0.000 description 1
- 241000589771 Ralstonia solanacearum Species 0.000 description 1
- 241000167716 Ramularia endophylla Species 0.000 description 1
- 241001421802 Ramularia grevilleana Species 0.000 description 1
- 241000196686 Ramulariopsis gossypii Species 0.000 description 1
- 102100030262 Regucalcin Human genes 0.000 description 1
- 108050007056 Regucalcin Proteins 0.000 description 1
- 241001135520 Robbsia andropogonis Species 0.000 description 1
- 241001064001 Rosisphaerella rosicola Species 0.000 description 1
- 241000071675 Rotylenchus uniformis Species 0.000 description 1
- 101710137510 Saimiri transformation-associated protein Proteins 0.000 description 1
- 241000496898 Sclerotinia spermophila Species 0.000 description 1
- 241000223248 Sclerotium hydrophilum Species 0.000 description 1
- 241001341543 Scolecostigmina mangiferae Species 0.000 description 1
- 241000825258 Scopulariopsis brevicaulis Species 0.000 description 1
- 241001643517 Seimatosporium lichenicola Species 0.000 description 1
- 241001597103 Septoria linicola Species 0.000 description 1
- 241000299267 Septoria pistaciarum Species 0.000 description 1
- 102100038803 Somatotropin Human genes 0.000 description 1
- 241000529949 Sphaerodothis acrocomiae Species 0.000 description 1
- 241001597097 Sphaerulina westendorpii Species 0.000 description 1
- 101000981565 Sphingobium sp. (strain NBRC 103272 / SYK-6) 2-pyrone-4,6-dicarboxylate hydrolase Proteins 0.000 description 1
- 241001272907 Stagonosporopsis trachelii Species 0.000 description 1
- 241000899384 Stigmina platani Species 0.000 description 1
- 244000223014 Syzygium aromaticum Species 0.000 description 1
- 241000906418 Thelonectria mammoidea Species 0.000 description 1
- 241000721159 Thielaviopsis paradoxa Species 0.000 description 1
- 102000035100 Threonine proteases Human genes 0.000 description 1
- 108091005501 Threonine proteases Proteins 0.000 description 1
- 241001082316 Trametes elegans Species 0.000 description 1
- 241001331438 Tubeufia pezizula Species 0.000 description 1
- 102100023345 Tyrosine-protein kinase ITK/TSK Human genes 0.000 description 1
- 241000347388 Umbrina Species 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 241001193070 Wickerhamomyces subpelliculosus Species 0.000 description 1
- 241000589636 Xanthomonas campestris Species 0.000 description 1
- 241000587986 Zasmidium citri-griseum Species 0.000 description 1
- 241001360088 Zymoseptoria tritici Species 0.000 description 1
- 241001231403 [Nectria] haematococca Species 0.000 description 1
- 241001223092 [Nectria] haematococca mpVI Species 0.000 description 1
- 150000003529 abscisic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 108010075015 actinomycin lactonase Proteins 0.000 description 1
- 229950006790 adenosine phosphate Drugs 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 239000000688 bacterial toxin Substances 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- FCRACOPGPMPSHN-UHFFFAOYSA-N desoxyabscisic acid Natural products OC(=O)C=C(C)C=CC1C(C)=CC(=O)CC1(C)C FCRACOPGPMPSHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 1
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000034287 fluorescent proteins Human genes 0.000 description 1
- IXORZMNAPKEEDV-UHFFFAOYSA-N gibberellic acid GA3 Natural products OC(=O)C1C2(C3)CC(=C)C3(O)CCC2C2(C=CC3O)C1C3(C)C(=O)O2 IXORZMNAPKEEDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- QANMHLXAZMSUEX-UHFFFAOYSA-N kinetin Chemical compound N=1C=NC=2N=CNC=2C=1NCC1=CC=CO1 QANMHLXAZMSUEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001669 kinetin Drugs 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- OAIJSZIZWZSQBC-GYZMGTAESA-N lycopene Chemical compound CC(C)=CCC\C(C)=C\C=C\C(\C)=C\C=C\C(\C)=C\C=C\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)CCC=C(C)C OAIJSZIZWZSQBC-GYZMGTAESA-N 0.000 description 1
- 240000004308 marijuana Species 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 108010009719 mutanolysin Proteins 0.000 description 1
- 239000003284 nod factor Substances 0.000 description 1
- 101150080443 nodB gene Proteins 0.000 description 1
- TVMXDCGIABBOFY-UHFFFAOYSA-N octane Chemical compound CCCCCCCC TVMXDCGIABBOFY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003375 plant hormone Substances 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 229920002704 polyhistidine Polymers 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 150000008223 ribosides Chemical class 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 244000000000 soil microbiome Species 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000000021 stimulant Substances 0.000 description 1
- 230000008093 supporting effect Effects 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- UZKQTCBAMSWPJD-FARCUNLSSA-N trans-zeatin Chemical compound OCC(/C)=C/CNC1=NC=NC2=C1N=CN2 UZKQTCBAMSWPJD-FARCUNLSSA-N 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 125000002987 valine group Chemical group [H]N([H])C([H])(C(*)=O)C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N37/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids
- A01N37/44—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids containing at least one carboxylic group or a thio analogue, or a derivative thereof, and a nitrogen atom attached to the same carbon skeleton by a single or double bond, this nitrogen atom not being a member of a derivative or of a thio analogue of a carboxylic group, e.g. amino-carboxylic acids
- A01N37/46—N-acyl derivatives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N37/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids
- A01N37/44—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids containing at least one carboxylic group or a thio analogue, or a derivative thereof, and a nitrogen atom attached to the same carbon skeleton by a single or double bond, this nitrogen atom not being a member of a derivative or of a thio analogue of a carboxylic group, e.g. amino-carboxylic acids
- A01N37/48—Nitro-carboxylic acids; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
- A01N63/10—Animals; Substances produced thereby or obtained therefrom
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
- A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
- A01N63/22—Bacillus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
- A01N63/50—Isolated enzymes; Isolated proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/164—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/32—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Bacillus (G)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0095—Oxidoreductases (1.) acting on iron-sulfur proteins as donor (1.18)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
- C12N9/18—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
- C12N9/20—Triglyceride splitting, e.g. by means of lipase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2405—Glucanases
- C12N9/2434—Glucanases acting on beta-1,4-glucosidic bonds
- C12N9/2437—Cellulases (3.2.1.4; 3.2.1.74; 3.2.1.91; 3.2.1.150)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y118/00—Oxidoreductases acting on iron-sulfur proteins as donors (1.18)
- C12Y118/06—Oxidoreductases acting on iron-sulfur proteins as donors (1.18) with dinitrogen as acceptor (1.18.6)
- C12Y118/06001—Nitrogenase (1.18.6.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
- C12Y301/01—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
- C12Y301/01003—Triacylglycerol lipase (3.1.1.3)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01004—Cellulase (3.2.1.4), i.e. endo-1,4-beta-glucanase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/07—Bacillus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/035—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal for targeting to the external surface of a cell, e.g. to the outer membrane of Gram negative bacteria, GPI- anchored eukaryote proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
- C12Y301/03—Phosphoric monoester hydrolases (3.1.3)
- C12Y301/03008—3-Phytase (3.1.3.8)
Abstract
Изобретение относится к области биохимии, в частности к способу стимулирования роста растений, включающему введение рекомбинантной бактерии группы, экспрессирующей гибридный белок в среде для роста растений, или применение рекомбинантной бактерии группы, экспрессирующей гибридный белок, к растению, семени растения или области, окружающей растение или семя растения, причем гибридный белок включает белок или пептид, стимулирующий рост растения, а также сигнальную последовательность,белок экзоспория или фрагмент белка экзоспория. Также раскрыты семя растения и рекомбинантная бактерия группыдля стимулирования роста растения, содержащие гибридный белок, включающий сигнальную последовательность,белок экзоспория или фрагмент белка экзоспория. Изобретение также относится к гибридному белку для стимуляции роста растения. Изобретение позволяет эффективно стимулировать рост растений. 8 н. и 36 з.п. ф-лы, 2 ил., 31 табл., 39 пр.
Description
ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ
[0001] Данная заявка заявляет приоритет по предварительной заявке США с серийным номером 61/799262, поданной 15 марта 2013 года, которая включена в данный документ в полном объеме посредством ссылки.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
[0002] Данное изобретение, в целом, относится к гибридным белкам, содержащим сигнальную последовательность, белок экзоспория или фрагмент белка экзоспория, который транспортирует гибридный белок в экзоспорий представителя семейства Bacillus cereus. Данное изобретение также относится к рекомбинантным представителям семейства Bacillus cereus, которые экспрессируют такие гибридные белки, и препаратам, содержащим рекомбинантных представителей семейства Bacillus cereus, экспрессирующие гибридные белки. Дополнительно, изобретение относится к способам стимуляции роста растений, защиты растений от патогенов, а также повышения устойчивости к стрессу в растениях путем применения рекомбинантных представителей семейства Bacillus cereus или препаратов к растениям или средам для роста растений. Данное изобретение также относится к способам иммобилизации спор рекомбинантных представителей семейства Bacillus cereus, экспрессирующих гибридный белок, на растениях или на растительных веществах.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
[0003] В области, окружающей корни растения, присутствует область, которая называется ризосферой. В ризосфере бактерии, грибы и другие организмы конкурируют за питательные вещества и за связывание с корневыми структурами растения. В ризосфере могут присутствовать как вредные, так и полезные бактерии и грибы. Все, включая бактерии, грибы и корневую систему растения, могут подвергаться влиянию активности пептидов, ферментов и других белков в ризосфере. Внесение в почву или обработка растений теми или иными из этих пептидов, ферментов или других белков оказывали бы положительные эффекты на целые популяции полезных почвенных бактерий и грибов, создали бы более здоровую общую почвенную среду для роста растений, улучшили бы рост растений, и обеспечили бы защиту растений от определенных бактериальных и грибковых патогенов. Однако предыдущие попытки внесения пептидов, ферментов и других белков в почву с целью вызвать такие положительные эффекты у растений были затруднены низкой выживаемостью ферментов, белков и пептидов в почве. Кроме того, широкое распространение протеаз, естественно присутствующих в почве, вызывает деградацию белков в почве. Среда вокруг корней растения (ризосфера) представляет собой уникальную смесь бактерий, грибов, питательных веществ, и корней, свойства которых отличаются от свойств чистой почвы. Симбиотические взаимоотношения между этими организмами представляют собой уникальные и могут быть улучшены с помощью экзогенных белков. Высокая концентрация грибов и бактерий в ризосфере вызывает еще большую деградацию белков в связи с аномально высоким уровнем протеаз и других элементов, вредных для белков, в почве. Кроме того, ферменты и другие белки, внесенные в почву, могут быстро рассеиваться от корней растения.
[0004] Таким образом, существует необходимость в данной области техники в способе эффективной доставки пептидов, ферментов и других белков в растения (например, в корневые системы растений) и продления периода времени, в течение которого такие молекулы остаются активными. Кроме того, существует необходимость в данной области техники в способе селективной транспортировки таких пептидов, ферментов и белков в ризосферу и в листья растений, и в особенности корни растений.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0005] Данное изобретение относится к гибридным белкам, содержащим по меньшей мере один белок или пептид, стимулирующий рост растения, по меньшей мере один белок или пептид, который повышает устойчивость к стрессу в растении, или по меньшей мере одно растение, связывающее белок или пептид. Белок или пептид, стимулирующий рост растения, включает пептидный гормон, пептид, не являющийся гормоном или фермент, участвующий в образовании или активации соединения, стимулирующего рост растения, гибридный белок также содержит сигнальную последовательность, белок экзоспория, или фрагмент белка экзоспория. Сигнальная последовательность, белок экзоспория или фрагмент белка экзоспория может представлять собой: (а) сигнальную последовательность, включающую аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере около 43% идентичности с аминокислотами 20-35 из SEQ ID №: 1, причем идентичность с аминокислотами 25-35 составляет по меньшей мере около 54%; (б) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-35 из SEQ ID №: 1; (в) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 20-35 из SEQ ID №: 1; (г) сигнальную последовательность, включающую SEQ ID №: 1; (д) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 2; (е) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-27 из SEQ ID №: 3; (ж) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 12-27 из SEQ ID №: 3; (з) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 3; (и) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 4; (к) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-38 из SEQ ID №: 5; (л) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 23-38 из SEQ ID №: 5; (м) сигнальную последовательность, включающую SEQ ID №: 5; (н) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 6; (о) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-28 из SEQ ID №: 7; (п) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 13-28 из SEQ ID №: 7; (р) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 7; (с) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 8; (т) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-24 из SEQ ID №: 9; (у) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 9-24 из SEQ ID №: 9; (ф) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 9; (х) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 10; (ц) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-33 из SEQ ID №: 11; (ч) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 18-33 из SEQ ID №: 11; (ш) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 11; (щ) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 12; (э) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-33 из SEQ ID №: 13; (ю) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 18-33 из SEQ ID №: 13; (я) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 13; (аа) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 14; (аб) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-43 из SEQ ID №: 15; (ав) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 28-43 из SEQ ID №: 15; (аг) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 15; (ад) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 16; (ае) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-27 из SEQ ID №: 17; (аж) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 12-27 из SEQ ID №: 17; (аз) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 17; (аи) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 18; (ак) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-33 SEQ ID №: 19; (ал) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 18-33 из SEQ ID №: 19; (ам) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 19; (ан) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 20; (ао) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-33 SEQ ID №: 21; (aп) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 18-33 из SEQ ID №: 21; (ар) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 21; (ас) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 22; (ат) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-24 из SEQ ID №: 23; (ay) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 9-24 из SEQ ID №: 23; (аф) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 23; (ах) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 24; (ац) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-24 из SEQ ID №: 25; (ач) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 9-24 из SEQ ID №: 25; (аш) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 25; (ащ) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 26; (аэ) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-30 из SEQ ID №: 27; (аю) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 15-30 из SEQ ID №: 27; (ая) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 27; (ба) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 28; (бб) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-33 SEQ ID №: 29; (бв) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 18-33 из SEQ ID №: 29; (бг) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 29; (бд) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 30; (бе) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-24 из SEQ ID №: 31; (бж) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 9-24 из SEQ ID №: 31; (бз) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 31; (би) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 32; (бк) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-15 из SEQ ID №: 33; (бл) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 33; (бм) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 34; (бн) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-16 из SEQ ID №: 35; (бо) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 35; (бп) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 36; (бр) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-29 из SEQ ID №: 43; (бс) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 14-29 из SEQ ID №: 43; (бт) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 43; (бу) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 44; (бф) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-35 из SEQ ID №: 45; (бх) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 20-35 из SEQ ID №: 45; (бц) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 45; (бч) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 46; (бш) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-43 из SEQ ID №: 47; (бщ) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 28-43 из SEQ ID №: 47; (бэ) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 47; (бю) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 48; (бя) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-32 из SEQ ID №: 49; (ва) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 17-32 из SEQ ID №: 49; (вб) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 49; (вв) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 50; (вг) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-33 SEQ ID №: 51; (вд) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 18-33 из SEQ ID №: 51; (ве) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 51; (вж) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 52; (вз) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-33 SEQ ID №: 53; (ви) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 18-33 из SEQ ID №: 53; (вк) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 53; (вл) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 54; (вм) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-30 из SEQ ID №: 55; (вн) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 15-30 из SEQ ID №: 55; (во) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 55; (вп) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 56; (вр) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-130 из SEQ ID №: 57; (вс) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 115-130 из SEQ ID №: 57; (вт) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 57; (ву) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 58; (вф) фрагмент белка экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 59; (вх) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 60; (вц) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 61; (вч) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 62; (вш) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 63; (вщ) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 64; (вэ) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 65; (вю) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 66; (вя) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 67; (га) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 68; (гб) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 69; (гв) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 70; (гг) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 71; (гд) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 72; (ге) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 73; (гж) в белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 74; (гз) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 75; (ги) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 76; (гк) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 77; (гл) в белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 78; (гм) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 79; (гн) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 80; (го) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 81; (гп) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 82; (гр) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 83; (гс) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 84; (гт) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 22-31 из SEQ ID №: 1; (гу) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 22-33 из SEQ ID №: 1; (гф) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 20-31 из SEQ ID №: 1; (гх) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 14-23 из SEQ ID №: 3; (гц) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 14-25 из SEQ ID №: 3; или (гч) сигнальную последовательность, включающую аминокислоты 12-23 из SEQ ID №: 3.
[0006] Данное изобретение также относится к гибридным белкам, содержащим сигнальную последовательность, белок экзоспория или фрагмент белка экзоспория и по меньшей мере один белок или пептид, защищающий растение от патогена. Сигнальная последовательность, белок экзоспория или фрагмент белка экзоспория может представлять собой: (а) сигнальную последовательность, состоящую из аминокислотной последовательности, состоящей из 16 аминокислот и имеющую по меньшей мере около 43% идентичности с аминокислотами 20-35 из SEQ ID №: 1, причем идентичность с аминокислотами 25-35 составляет по меньшей мере около 54%; (б) сигнальную последовательность, состоящую из аминокислот 1-35 из SEQ ID №: 1; (в) сигнальную последовательность, состоящую из аминокислот 20-35 в SEQ ID №: 1; (г) сигнальную последовательность, состоящую из SEQ ID №: 1; (д) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 60; (е) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-27 из SEQ ID №: 3; (ж) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 12-27 из SEQ ID №: 3; (з) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 3; (и) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 4; (к) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-38 из SEQ ID №: 5; (л) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 23-38 из SEQ ID №: 5; (м) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 5; (н) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 6; (о) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-28 из SEQ ID №: 7; (п) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 13-28 из SEQ ID №: 7; (р) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 7; (с) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 8; (т) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-24 из SEQ ID №: 9; (у) в сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 9-24 из SEQ ID №: 9; (ф) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 9; (х) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 10; (ц) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-33 из SEQ ID №: 11; (ч) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 18-33 из SEQ ID №: 11; (ш) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 11; (щ) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 12; (э) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-33 из SEQ ID №: 13; (ю) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 18-33 из SEQ ID №: 13; (я) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 13; (аа) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 14; (аб) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-43 из SEQ ID №: 15; (ав) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 28-43 из SEQ ID №: 15; (аг) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 15; (ад) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 16; (ае) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-27 из SEQ ID №: 17; (аж) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 12-27 из SEQ ID №: 17; (аз) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 17; (аи) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 18; (ак) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-33 SEQ ID №: 19; (ал) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 18-33 из SEQ ID №: 19; (ам) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 19; (ан) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 20; (ао) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-33 SEQ ID №: 21; (aп) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 18-33 из SEQ ID №: 21; (ар) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 21; (ас) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 22; (ат) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-24 из SEQ ID №: 23; (ay) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 9-24 из SEQ ID №: 23; (аф) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 23; (ах) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 24; (ац) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-24 из SEQ ID №: 25; (ач) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 9-24 из SEQ ID №: 25; (аш) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 25; (ащ) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 26; (аэ) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-30 из SEQ ID №: 27; (аю) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 15-30 из SEQ ID №: 27; (ая) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 27; (ба) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 28; (бб) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-33 SEQ ID №: 29; (бв) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 18-33 из SEQ ID №: 29; (бг) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 29; (бд) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 30; (бе) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-24 из SEQ ID №: 31; (бж) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 9-24 из SEQ ID №: 31; (бз) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 31; (би) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 32; (бк) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-15 из SEQ ID №: 33; (бл) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 33; (бм) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 34; (бн) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-16 из SEQ ID №: 35; (бо) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 35; (бп) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 36; (бр) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-29 из SEQ ID №: 43; (бс) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 14-29 из SEQ ID №: 43; (бт) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 43; (бу) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 44; (бф) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-35 из SEQ ID №: 45; (бх) к мишени последовательности, содержащей аминокислоты 20-35 из SEQ ID №: 45; (бц) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 45; (бч) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 46; (бш) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-43 из SEQ ID №: 47; (бщ) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 28-43 из SEQ ID №: 47; (бэ) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 47; (бю) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 48; (бя) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-32 из SEQ ID №: 49; (ва) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 17-32 из SEQ ID №: 49; (вб) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 49; (вв) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 50; (вг) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-33 SEQ ID №: 51; (вд) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 18-33 из SEQ ID №: 51; (ве) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 51; (вж) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 52; (вз) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-33 SEQ ID №: 53; (ви) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 18-33 из SEQ ID №: 53; (вк) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 53; (вл) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 54; (вм) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-30 из SEQ ID №: 55; (вн) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 15-30 из SEQ ID №: 55; (во) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 55; (вп) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 56; (вр) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 1-130 из SEQ ID №: 57; (вс) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 115-130 из SEQ ID №: 57; (вт) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 57; (ву) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 58; (вф) фрагмент белка экзоспория, состоящий из аминокислотной последовательности, имеющей по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 59; (вх) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 61; (вц) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 62; (вч) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №; 63; (вш) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 64; (вщ) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 65; (вэ) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 66; (вю) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 67; (вя) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 68; (га) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 69; (гб) сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID №: 70; (гв) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 71; (ге) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 72; (гж) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 73; (гз) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 74; (ги) в белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 75; (гк) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 76; (гл) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 77; (гм) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 78; (гн) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 79; (го) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 80; (гп) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 81; (гр) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №; 82; (гс) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 83; (гт) белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 84; (гу) сигнальную последовательность, состоящую из аминокислот 22-31 в SEQ ID №: 1; (гф) сигнальную последовательность, состоящую из аминокислот 22-33 в SEQ ID №: 1; (гх) сигнальную последовательность, состоящую из аминокислот 20-31 в SEQ ID №: 1; (гц) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 14-23 из SEQ ID №: 3; (гч) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 14-25 из SEQ ID №: 3; или (гш) сигнальную последовательность, содержащую аминокислоты 12-23 из SEQ ID №: 3.
[0007] Данное изобретение дополнительно относится к гибридным белкам, содержащим сигнальную последовательность, белок экзоспория или фрагмент белка экзоспория и по меньшей мере один белок или пептид, защищающий растение от патогена. Белок или пептид, защищающий растение от патогена, может включать гарпин, α-эластин, β-эластин, системин, фенилаланин аммиак-лиазу, элиситин, дефензин, криптогеин, белок флагеллин, пептид флагеллина, бактериоцин, лизоцим, пептид лизоцима, сидерофор, нерибосомальный активный пептид, кональбумин, альбумин, лактоферрин, пептид лактоферрина или TasA. В альтернативном варианте белок или пептид, защищающий растение от патогена, обладает инсектицидной активностью, антигельминтной активностью, подавляет хищничество насекомых или червей, или их комбинацию. В альтернативном варианте белок, защищающий растение от патогена, включает фермент. Сигнальная последовательность, белок экзоспория или фрагмент белка экзоспория может представлять собой любую из сигнальных последовательностей, белков экзоспория или фрагментов белка экзоспория, перечисленных ранее в параграфе [0005].
[0008] Данное изобретение также относится к гибридным белкам, содержащим по меньшей мере один целевой белок или пептид и белок экзоспория. Белок экзоспория может представлять собой белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с любой из SEQ ID №: 71,75, 80,81,82, 83 и 84.
[0009] Данное изобретение дополнительно относится к рекомбинантному представителю семейства Bacillus cereus, который экспрессирует любой из гибридных белков.
[0010] Данное изобретение также относится к препаратам, включающим любого из рекомбинантных представителей семейства Bacillus cereus и сельскохозяйственно приемлемый носитель.
[0011] Данное изобретение также относится к способу стимуляции роста растений. Данный способ включает введение в среду для роста растений любого из рекомбинантных представителей семейства Bacillus cereus, экспрессирующих гибридный белок, содержащий по меньшей мере один белок или пептид, стимулирующий рост растения, или любого препарата, содержащего рекомбинантных представителей семейства Bacillus cereus, экспрессирующих гибридный белок, содержащий по меньшей мере один белок или пептид, стимулирующий рост растения. В альтернативном варианте данный способ включает применение к растению, семени растения или области, окружающей растение или семя растения, любого из рекомбинантных представителей семейства Bacillus cereus, экспрессирующих гибридный белок, содержащий по меньшей мере один белок или пептид, стимулирующий рост растения, или любого препарата, содержащего рекомбинантных представителей семейства Bacillus cereus, экспрессирующих гибридный белок, содержащий по меньшей мере один белок или пептид, стимулирующий рост растения. Белок или пептид, стимулирующий рост растения, физически прикреплен к экзоспорию рекомбинантного представителя семейства Bacillus.
[0012] Данное изобретение также относится к способу стимуляции роста растений. Этот способ включает введение рекомбинантного представителя семейства Bacillus cereus, экспрессирующего гибридный белок, в среду для роста растений или применение рекомбинантного представителя семейства Bacillus cereus, экспрессирующего гибридный белок, к растению, семени растений или области, окружающей растение или семя растения. Гибридный белок содержит по меньшей мере один белок или пептид, стимулирующий рост растения, сигнальную последовательность, белок экзоспория или фрагмент белка экзоспория. Сигнальная последовательность, белок экзоспория или фрагмент белка экзоспория может представлять собой любой из перечисленных ранее в параграфе [0005]. Белок или пептид, стимулирующий рост растения, физически прикреплен к экзоспорию рекомбинантного представителя семейства Bacillus.
[0013] Данное изобретение дополнительно относится к способу защиты растений от патогена или усиления устойчивости к стрессу в растении. Данный способ включает введение в среду для роста растений любого из рекомбинантных представителей семейства Bacillus cereus, экспрессирующих гибридный белок, содержащий по меньшей мере один белок или пептид, защищающий растение от патогена, или по меньшей мере один белок или пептид, усиливающий устойчивость к стрессу в растении, или любой из препаратов, содержащих любого из рекомбинантных представителей семейства Bacillus cereus, экспрессирующих гибридный белок, содержащий по меньшей мере один белок или пептид, защищающий растение от патогена, или по меньшей мере один белок или пептид, усиливающий устойчивость к стрессу в растении. В альтернативном варианте данный способ включает применение к растению, семени растения или области, окружающей растение, любого из рекомбинантных представителей семейства Bacillus cereus, экспрессирующих гибридный белок, содержащий по меньшей мере один белок или пептид, защищающий растение от патогена, или по меньшей мере один белок или пептид, который повышает устойчивость к стрессу в растении, или любого препарата, содержащего любого из рекомбинантных представителей семейства Bacillus cereus, экспрессирующих гибридный белок, содержащий по меньшей мере один белок или пептид, защищающий растение от патогена, или по меньшей мере один белок или пептид повышающий устойчивость к стрессам в растении. Белок или пептид, защищающий растения из патогена, или белок или пептид, усиливающий устойчивость к стрессу в растении, физически прикреплен к экзоспорию рекомбинантного представителя семейства Bacillus cereus.
[0014] Данное изобретение также относится к способу иммобилизации спор рекомбинантного представителя семейства Bacillus cereus на растении. Данный способ включает введение в среду для роста растений любого из рекомбинантных представителей семейства Bacillus cereus, экспрессирующих по меньшей мере один белок или пептид, связывающийся с растением, или любого препарата, содержащего любого из рекомбинантных представителей семейства Bacillus cereus, экспрессирующих по меньшей мере один белок или пептид, связывающийся с растением. В альтернативном варианте данный способ включает применение к растению, семени растения или области, окружающей растение или семя растений, любого из рекомбинантных представителей семейства Bacillus cereus, экспрессирующих по меньшей мере один белок или пептид, связывающийся с растением, или любого из препаратов, содержащих любого из рекомбинантных представителей семейства Bacillus cereus, экспрессирующих по меньшей мере один белок или пептид, связывающийся с растением. Белок или пептид, связывающийся с растением, физически прикреплен к экзоспорию рекомбинантного представителя семейства Bacillus cereus.
[0015] Другие объекты и признаки будут отчасти очевидны и отчасти указаны в дальнейшем.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
[0016] ФИГ. 1 иллюстрирует выравнивание аминокислотной последовательности амино-концевого участка штамма BclA Bacillus anthracis Sterne с соответствующей областью различных белков экзоспория представителей семейства Bacillus cereus.
[0017] ФИГ. 2 иллюстрирует типичные результаты флуоресцентной микроскопии экспрессии гибридных белков, содержащих различные белки экзоспория, связанные с репортером mCherry, на экзоспории.
ОПРЕДЕЛЕНИЯ
[0018] В данном документе единственное число, «один», «данный» и «указанный» означает «по меньшей мере один» или «один или более», если не указано иное.
[0019] Термины «содержащий», «включающий» и «имеющий» подразумевают включение и означают, что могут быть дополнительные элементы, отличающиеся от перечисленных.
[0020] Термин «биологически активный пептид» означает любой пептид, который проявляет биологическую активность. «Биологически активные пептиды» могут быть получены, например, с помощью расщепления белка, пептида, пробелка или препробелка протеазой или пептидазой.
[0021] «Фермент, участвующий в образовании или активации соединения, стимулирующего рост растения» включает любой фермент, который катализирует любой этап пути биосинтеза соединения, которое стимулирует рост растения или изменяет структуру растения, или любой фермент, который катализирует переход неактивного или менее активного производного соединения, которое стимулирует рост растения или изменяет структуру растения, в активную или более активную форму соединения. Такие соединения, например, включают, но не ограничиваются ими, низкомолекулярные растительные гормоны, такие как ауксины и цитокинины, биологически активные пептиды и низкомолекулярные стимуляторы роста растения, которые синтезируются бактериями или грибами в ризосфере (например, 2,3-бутандиол).
[0022] В данном документе термин «гибридный белок» означает белок, имеющей полипептидную последовательность, которая содержит последовательности, полученные из двух или более отдельных белков. Гибридный белок может быть получен путем соединения молекулы нуклеиновой кислоты, которая кодирует весь первый полипептид, или его часть, с молекулой нуклеиновой кислоты, которая кодирует весь второй полипептид, или его часть, с целью создать последовательность нуклеиновой кислоты, при экспрессии которой образуется один полипептид, имеющий функциональные свойства, полученные от каждого из исходных белков.
[0023] Термин «иммобилизация споры рекомбинантного представителя семейства Bacillus cereus на растении» означает связывание споры представителя семейства Bacillus cereus с растением, например, с корнем растения или с надземной частью растения, такой как лист, стебель, цветок или плод, таким образом, что спора остается на корневой структуре растения или на его надземной части и не проникает в среду роста растения или в среду, окружающую надземные части растения.
[0024] «Среда для роста растений» включает любой материал, который способен поддерживать рост растения.
[0025] В данном документе «белок или пептид, усиливающий иммунную систему растения» включает любой белок или пептид, который оказывает благоприятное воздействие на иммунную систему растения.
[0026] В данном документе термин «белок или пептид, стимулирующий рост растения», включает любой белок или пептид, который увеличивает рост растения, подверженного воздействию этого белка или пептида.
[0027] В данном документе термин «белок или пептид, защищающий растение от патогена», включает любой белок или пептид, который делает растение, подверженное действию этого белка или пептида, менее восприимчивым к инфицированию патогеном.
[0028] В данном документе термин «белок или пептид, который повышает устойчивость к стрессу в растении», включает любой белок или пептид, который делает растение, подверженное действию этого белка или пептида, более устойчивым к стрессу.
[0029] Термин «белок или пептид, связывающийся с растением» означает любой пептид или белок, способный специфически или неспецифически связываться с любой частью растения (например, с корнем или с надземными частями растения, такими как листья, стебли, цветки или плоды) или с растительным материалом.
[0030] В данном документе термин «сигнальная последовательность» означает полипептидную последовательность, которая, являясь частью более длинного полипептида или белка, приводит к локализации более длинного полипептида или белка в определенном месте внутри клетки. Сигнальные последовательности, описанные в данном документе, приводят к расположению белков в эксзоспории представителя семейства Bacillus cereus.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0031] Данное изобретение относится к гибридным белкам, содержащим сигнальную последовательность, белок экзоспория, или фрагмент белка экзоспория, который транспортирует гибридный белок в экзоспорий представителя семейства Bacillus cereus и: (а) по меньшей мере один белок или пептид, стимулирующий рост растения; (б) по меньшей мере один белок или пептид, защищающий растение от патогена; (в) по меньшей мере один белок или пептид, который повышает устойчивость растения к стрессу; или (г) по меньшей мере один белок или пептид, связывающийся с растением. При экспрессии в бактериях - представителях семейства Bacillus cereus, эти гибридные белки транспортируются в слой экзоспория в споре и физически ориентируются таким образом, что данный белок или пептид выводится на внешнюю сторону споры.
[0032] Эта система выведения на экзоспорий Bacillus (ВЭВ) может быть использована для внесения пептидов, ферментов и других белков в растения (например, в листья, фрукты, цветки, стебли или корни, или в среду для роста растений, такую как почва. Пептиды, ферменты, белки и внесенные таким способом в почву или другую среду для роста растений, сохраняют и проявляют активность в почве в течение длительных периодов времени. Внесение в почву или ризосферу растения бактерий - рекомбинантных представителей семейства Bacillus cereus, экспрессирующих гибридные белки, описанные в данном документе, приводит к повышению полезного роста растения во многих различных почвенных условиях. Использование ВЭВ с целью создания этих ферментов позволяет им продолжать проявление положительных результатов на растение и ризосферу в течение первых месяцев жизни растения.
Сигнальные последовательности, белки экзоспория и фрагменты белков экзоспория
[0033] Для простоты ссылки SEQ ID №№ для пептидных и белковых последовательностей, указанных в данном документе, приведены ниже в таблице 1.
[0034] Bacillus представляет собой род палочковидных бактерий. Семейство бактерий Bacillus cereus включает виды Bacillus anthracis, Bacillus cereus, Bacillus thuringiensis, Bacillus mycoides, Bacillus pseudomycoides, Bacillus samanii, Bacillus gaemokensis и Bacillus weihenstephensis. В стрессовых условиях окружающей среды бактерии семейства Bacillus cereus претерпевают споруляцию и образуют овальные эндоспоры, которые могут оставаться в состоянии покоя в течение длительных периодов времени. Наружный слой эндоспор известен как экзоспорий и содержит базальный слой, покрытый внешним ворсом из волоскоподобных выростов. Нити этого волоскоподобного ворса образованы преимущественно коллагеноподобным гликопротеином BclA, в то время как базальный слой состоит из нескольких различных белков. В экзоспорий также присутствует другой коллагеноподобный белок, BclB, который располагается на эндоспорах представителей семейства Bacillus cereus. Было показано, что BclA, основной компонент поверхностного ворса, прикреплен к экзоспорию с помощью амино-конца (N-конца), расположенного в базальном слое, и углеродного конца (С-конца), выходящего из споры наружу.
[0035] Ранее было обнаружено, что некоторые последовательности из N-концевых участков BclA и BclB могут быть использованы для транспортировки пептида или белка в экзоспорий эндоспор Bacillus cereus (см заявки на патент США №№2010/0233124 и 2011/0281316, и Thompson et al., Targeting of the BclA and BclB proteins to the Bacillus anthracis spore surface, Molecular Microbiology 70(2):421-34 (2008), каждая из которых включена в данное описание посредством ссылки). Было также установлено, что белок BetA/BAS3290 Bacillus anthracis локализируется в экзоспории.
[0036] В частности, было обнаружено, что аминокислот 20-35 BclA из штамма Bacillus anthracis Sterne достаточно для транспортировки в экзоспорий. На Фигуре 1 проиллюстрировано выравнивание последовательности аминокислот 1-41 из BclA (SEQ ID №: 1) с соответствующими N-концевыми участками нескольких других белков экзоспория из семейства Bacillus cereus и белков из семейства Bacillus cereus, имеющих сходные последовательности. Как видно из Фигуры 1, есть область высокой гомологии между всеми белками в области, соответствующей аминокислотам 20-41 из BclA. Тем не менее, в этих последовательностях аминокислоты, соответствующие аминокислотам 36-41 из BclA, содержит вторичную структуру и не представляют собой необходимыми для транспортировки гибридного белка в экзоспорий. Область консервативной сигнальной последовательности в BclA (аминокислоты 20-35 из SEQ ID №: 1) выделена жирным на Фигуре 1 и соответствует минимальной сигнальной последовательности, необходимой для транспортировки в экзоспорий. Более высоко консервативная область, охватывающая аминокислоты 25-35 из BclA в пределах сигнальной последовательности, подчеркнута в последовательностях на Фигуре 1 и представляет собой последовательность распознавания для ExsFA/BxpB/ExsFB и гомологов, которые направляют и прикрепляют описанные белки на поверхности экзоспория. Аминокислотные последовательности SEQ ID №№. 3, 5 и 7 на Фигуре 1 представляют собой аминокислоты 1-33 из штамма BetA/BAS3290 Bacillus anihracis Sterne, за метионином следуют аминокислоты 2-43 из штамма BAS4623 Bacillus anihracis Sterne, и аминокислоты 1-34 из штамма BclB Bacillus anihracis Sterne, соответственно. (Для BAS4623 было обнаружено, что замена присутствующего валина в положении 1 в нативном белке на метионин приводит к лучшей экспрессии.) Как можно увидеть из Фигуры 1, каждая из этих последовательностей содержит консервативную область, соответствующую аминокислотам 20-35 из BclA (SEQ ID №: 1; выделена жирным) и более высоко консервативную область, соответствующую аминокислотам 20-35 из BclA (подчеркнуто).
[0037] Дополнительные белки из представителей семейства Bacillus cereus также содержат консервативную сигнальную область. В частности, на Фигуре 1 SEQ ID №: 9 представляет собой аминокислоты 1-30 штамма BAS1882 Bacillus anihracis Sterne, SEQ ID №: 11 представляет собой аминокислоты 1-39 генетического продукта 2280 Bacillus weihenstephensis КВАВ4, SEQ ID №: 13 представляет собой аминокислоты 1-39 из генетического продукта 3572 Bacillus weihenstephensis КВАВ4, SEQ ID №: 15 представляет собой аминокислоты 1-49 из лидерного пептида экзоспория Bacillus cereus VD200, SEQ ID №: 17 представляет собой аминокислоты 1-33 из лидерного пептида экзоспория Bacillus cereus VD166, SEQ ID №: 19 представляет собой аминокислоты 1-39 из гипотетического белка IKG 04663 Bacillus cereus VD200, SEQ ID №: 21 представляет собой аминокислоты 1-39 из β-пропеллерного белка Bacillus weihenstephensis КВАВ4 YVTN, SEQ ID №; 23 представляет собой аминокислоты 1-30 из гипотетического белка bcerkbab4_2363 Bacillus weihenstephensis КВАВ4, SEQ ID №: 25 представляет собой аминокислоты 1-30 из гипотетического белка bcerkbab4_2131 Bacillus weihenstephensis КВАВ4, SEQ ID №: 27 представляет собой аминокислоты 1-36 из тройной коллагеновой спирали Bacillus weihenstephensis КВАВ4, SEQ ID №: 29 представляет собой аминокислоты 1-39 из гипотетического белка bmyco0001_21660 Bacillus mycoides 2048, SEQ ID №: 31 представляет собой аминокислоты 1-30 из гипотетического белка bmyc0001_22540 Bacillus mycoides 2048, SEQ ID №: 33 представляет собой аминокислоты 1-21 из гипотетического белка bmyc0001_21510 Bacillus mycoides 2048, SEQ ID №: 35 представляет собой аминокислоты 1-22 из белка тройной коллагеновой спирали Bacillus Thuringiensis 35646, SEQ ID №: 43 представляет собой аминокислоты 1-35 из гипотетического белка WP_69652 Bacillus cereus, SEQ ID №: 45 представляет собой аминокислоты 1-41 из лидера экзоспория WP016117717 Bacillus cereus, SEQ ID №: 47 представляет собой аминокислоты 1-49 из пептида WP002105192 экзоспория Bacillus cereus, SEQ ID №: 49 представляет собой аминокислоты 1-38 из гипотетического белка WP87353 Bacillus cereus, SEQ ID №: 51 представляет собой аминокислоты 1-39 из пептида 02112369 экзоспория Bacillus cereus, SEQ ID №: 53 представляет собой аминокислоты 1-39 из белка WP016099770 экзоспория Bacillus cereus, SEQ ID №: 55 представляет собой аминокислоты 1-36 из гипотетического белка YP006612525 Bacillus Thuringiensis и SEQ ID №: 57 представляет собой аминокислоты 1-136 из гипотетического белка TIGR03720 Bacillus mycoides. Как проиллюстировано на Фигуре 1, каждый из N-концевых областей этих белков содержит область, которая является консервативной с аминокислотами 20-35 из BclA (SEQ ID №: 1), и более высоко консервативную область, соответствующую аминокислотам 25-35 из BclA.
[0038] В гибридных белках по данному изобретению любая часть BclA которая включает аминокислоты 20-35, может быть использована в качестве сигнальной последовательности в данном изобретении. Кроме того, полноразмерные белки экзоспория или фрагменты белка экзоспория могут быть использованы для транспортировки гибридных белков в экзоспорий. Таким образом, полноразмерный BclA или фрагмент BclA, включающий аминокислоты 20-35, может быть использован для транспортировки в экзоспорий. Например, полноразмерный BclA (SEQ ID №: 2),или фрагмент BclA среднего размера, в котором отсутствует углеродный конец, такой как SEQ ID №: 59 (аминокислоты 1-196 из BclA), может быть использован для транспортировки гибридных белков в экзоспорий. Фрагменты среднего размера, такие как фрагмент SEQ ID №: 59, имеют меньшую вторичную структуру, чем полноразмерный BclA, и было установлено, что они пригодны для использования в качестве сигнальной последовательности. Сигнальная последовательность может также содержать намного более короткие части BclA, включающие аминокислоты 20-35, такие как SEQ ID №: 1 (аминокислоты 1-41 из BclA), аминокислоты 1-35 из SEQ ID №: 1, аминокислоты кислоты 20-35 из SEQ ID №: 1 или SEQ ID №: 60 (метиониновый остаток связан с аминокислотами 20-35 из BclA). Даже более короткие фрагменты BclA, включающие лишь некоторые из аминокислот 20-35, также обладают способностью к направлять гибридные белки в экзоспорий. Например, целевая последовательность может включать аминокислоты 22-31 из SEQ ID №: 1, аминокислоты 22-33 из SEQ ID №: 1 или аминокислоты 20-31 из SEQ ID №: 1.
[0039] В альтернативном варианте любая часть BetA/BAS3290, BAS4623, BclB, BAS1882, генетического продукта КВАВ4 2280, генетического продукта КВАВ4 3572, лидерного пептида экзоспория В. cereus VD200, лидерного пептида экзоспория В. cereus VD166, гипотетического белка IKG_04663 В. cereus VD200, β-пропеллерного белка YVTN В. weihenstephensis КВАВ4, гипотетического белка bcerkbab4_2363 В. weihenstephensis КВАВ4, гипотетического белка bcerkbab4_2131 В. weihenstephensis КВАВ4, тройной коллагеновой спирали В. weihenstephensis КВАВ4, гипотетического белка bmyco0001_21660 В. mycoides 2048, гипотетического белка bmyc0001_22540 В. mycoides 2048, гипотетического белка bmyc0001_21510В. mycoides 2048, белка тройной коллагеновой спирали В. thuringiensis 35646, гипотетического белка WP_69652 В. cereus, лидера WP016117717 экзоспория В. cereus, пептида WP002105192 экзоспория В. cereus, гипотетического белка WP87353 В. cereus, пептида 02112369 экзоспория В. cereus, белка WP016099770 экзоспория В. cereus, гипотетического белка YP006612525 В. thuringiensis или гипотетического белка TIGR03720 В. mycoides, который включает аминокислоты, соответствующие аминокислотам 20-35 из BclA, может служить сигнальной последовательностью. Как видно из рисунка 1, аминокислоты 12-27 из BetA/BAS3290, аминокислоты 23-38 из BAS4623, аминокислоты 13-28 из BclB, аминокислоты 9-24 из BAS1882, аминокислоты 18-33 генетического продукта КВАВ4 2280, аминокислоты 18-33 генетического продукта КВАВ4 3572, аминокислоты 28-43 лидерного пептида экзоспория В. cereus VD200, аминокислоты 12-27 лидерного пептида экзоспория В. cereus VD166, аминокислоты 18-33 гипотетического белка IKG_04663 В. cereus VD200, аминокислоты 18-33 β-пропеллерного белка В. weihenstephensis КВАВ4 YVTN, аминокислоты 9-24 гипотетического белка bcerkbab4_2363 В. weihenstephensis КВАВ4, аминокислоты 9-24 гипотетического белка bcerkbab4_2131 В. weihenstephensis КВАВ4, аминокислоты 15-30 тройной коллагеновой спирали В. weihenstephensis КВАВ4, аминокислоты 18-33 гипотетического белка bmyco0001_21660 В. mycoides 2048, аминокислоты 9-24 гипотетического белка bmyc0001_22540 В. mycoides 2048, аминокислоты 1-15 гипотетического белка bmyc0001_21510 В. mycoides 2048, аминокислоты 1-16 белка тройной коллагеновой спирали В. thuringiensis 35646, аминокислоты 14-29 гипотетического белка WP_69652 В. cereus, аминокислоты 20-35 лидера WP016117717 экзоспория В. cereus, аминокислоты 28-43 пептида WP002105192 экзоспория В. cereus, аминокислоты 17-32 гипотетического белка WP87353 В. cereus, аминокислоты 18-33 пептида 02112369 экзоспория В. cereus, аминокислоты 18-33 белка WP016099770 экзоспория В. cereus, аминокислоты 15-30 гипотетического белка YP006612525 В. thuringiensis и аминокислоты 115-130 гипотетического белка TIGR03720 В. mycoides соответствуют аминокислотам 20-35 из BclA. Таким образом, любая часть этих белков, которые включают вышеперечисленные соответствующие аминокислоты, может служить сигнальной последовательностью.
[0040] Кроме того, любая аминокислотная последовательность, содержащая аминокислоты 20-35 из BclA или любые из вышеперечисленных соответствующих аминокислот, может служить сигнальной последовательностью.
[0041] Таким образом, сигнальная последовательность может включать аминокислоты 1-35 из SEQ ID №: 1, аминокислоты 20-35 из SEQ ID №: 1, SEQ ID №: 1, SEQ ID №: 60, аминокислоты 22-31 из SEQ ID №: 1, аминокислоты 22-33 из SEQ ID №: 1, или аминокислоты 20-31 из SEQ ID №: 1. В альтернативном варианте сигнальная последовательность состоит из аминокислот 1-35 из SEQ ID №: 1, аминокислот 20-35 из SEQ ID №: 1, SEQ ID №: 1, или SEQ ID №: 60. В альтернативном варианте сигнальная последовательность может состоять из аминокислот 22-31 в SEQ ID №: 1, аминокислот 22-33 из SEQ ID №: 1, или аминокислот 20-31 из SEQ ID №: 1. В альтернативном варианте белок экзоспория может включать полноразмерный BclA (SEQ ID №: 2), или фрагмент белка экзоспория может включать фрагмент BclA среднего размера, в котором отсутствует углеродный конец, например, SEQ ID №: 59 (аминокислоты 1-196 из BclA). В альтернативном варианте фрагмент белка экзоспория может состоять из SEQ ID №: 59.
[0042] Сигнальная последовательность может также содержать аминокислоты 1-27 из SEQ ID №: 3, аминокислоты 12-27 из SEQ ID №: 3, или SEQ ID №: 3, или белок экзоспория может включать полноразмерный BetA/BAS3290 (SEQ ID №: 4). Кроме того, было обнаружено, что остаток метиониновый остаток, связанный с аминокислотами 12-27 из BetA/BAS3290, может быть использован в качестве сигнальной последовательности. Таким образом, сигнальная последовательность может включать SEQ ID №: 61. Сигнальная последовательность может также содержать аминокислоты 14-23 из SEQ ID №: 3, аминокислоты 14-25 из SEQ ID №: 3, или аминокислоты 12-23 из SEQ ID №: 3.
[0043] Сигнальная последовательность может также содержать аминокислоты 1-38 из SEQ ID №: 5, аминокислоты 23-38 из SEQ ID №: 5, или SEQ ID №: 5, или белок экзоспория может включать полноразмерный BAS4623 (SEQ ID №: 6).
[0044] В альтернативном варианте сигнальная последовательность может включать аминокислоты 1-28 из SEQ ID №: 7, аминокислоты 13-28 из SEQ ID №: 7 или SEQ ID №: 7, или белок экзоспория может включать полноразмерный BclB (SEQ ID №: 8).
[0045] Сигнальная последовательность может также содержать аминокислоты 1-24 из SEQ ID №: 9, аминокислоты 9-24 из SEQ ID №: 9 или SEQ ID №: 9 или белок экзоспория может включать полноразмерный BAS1882 (SEQ ID №: 10). Метиониновый остаток, связанный с аминокислотами 9-24 из BAS1882, также может быть использован в качестве сигнальной последовательности. Таким образом, сигнальная последовательность может включать SEQ ID №: 69.
[0046] Сигнальная последовательность может также содержать аминокислоты 1-33 из SEQ ID №: 11, аминокислоты 18-33 из SEQ ID №: 11, или SEQ ID №: 11, или белок экзоспория может включать полноразмерный генетический продукт В. weihenstephensis КВАВ4 2280 (SEQ ID №: 12). Метиониновый остаток, связанный с аминокислотами 18-33 генетического продукта В. weihenstephensis КВАВ4 2280, также может быть использован в качестве сигнальной последовательности. Таким образом, сигнальная последовательность может включать последовательность SEQ ID №: 62.
[0047] Сигнальная последовательность может также содержать аминокислоты 1-33 из SEQ ID №: 13, аминокислоты 18-33 из SEQ ID №: 13, или SEQ ID №: 13, или белок экзоспория может включать полноразмерный генетический продукт В. weihenstephensis КВАВ4 3572 (SEQ ID №: 14). Метиониновый остаток, связанный с аминокислотами 18-33 генетического продукта В. weihenstephensis КВАВ4 3572, также может быть использован в качестве сигнальной последовательности. Таким образом, сигнальная последовательность может включать SEQ ID №: 63.
[0048] В альтернативном варианте сигнальная последовательность может включать аминокислоты 1-43 из SEQ ID №: 15, аминокислоты 28-43 из SEQ ID №: 15, или SEQ ID №: 15, или белок экзоспория может включать полноразмерный лидерный пептид экзоспория В. cereus VD200 (SEQ ID №: 16).
[0049] Сигнальная последовательность может также содержать аминокислоты 1-27 из SEQ ID №: 17, аминокислоты 12-27 из SEQ ID №: 17, или SEQ ID №: 17, или белок экзоспория может включать полноразмерный лидерный пептид экзоспория В. cereus VD166 (SEQ ID №: 18). Метиониновый остаток, связанный с аминокислотами 12-27 лидерного пептида экзоспория В. cereus VD166, может быть также использован в качестве сигнальной последовательности. Таким образом, сигнальная последовательность может включать SEQ ID №: 64.
[0050] Сигнальная последовательность может также содержать аминокислоты 1-33 из SEQ ID №: 19, аминокислоты 18-33 из SEQ ID №: 19, или SEQ ID №: 19, или белок экзоспория может включать полноразмерный гипотетический белок IKG_04663 из В. cereus VD200 (SEQ ID №: 20).
[0051] В альтернативном варианте сигнальная последовательность содержит аминокислоты 1-33 из SEQ ID №: 21, аминокислоты 18-33 из SEQ ID №: 21, или SEQ ID №: 21, или белок экзоспория может включать полноразмерный β-пропеллерный белок из В. weihenstephensis КВАВ4 YVTN (SEQ ID №: 22). Метиониновый остаток, связанный с аминокислотами 18-33 β-пропеллерного белка из В. weihenstephensis КВАВ4 YVTN, также может быть использован в качестве сигнальной последовательности. Таким образом, сигнальная последовательность может включать SEQ ID №: 65.
[0052] Сигнальная последовательность может также содержать аминокислоты 1-24 из SEQ ID №: 23, аминокислоты 9-24 из SEQ ID №: 23, или SEQ ID №: 23, или белок экзоспория может включать полноразмерный гипотетический белок bcerkbab4_2363 из В. weihenstephensis КВАВ4 (SEQ ID №: 24). Метиониновый остаток, связанный с аминокислотами 9-24 гипотетического белка bcerkbab4_236 из В. weihenstephensis КВАВ4, также может быть использован в качестве сигнальной последовательности. Таким образом, сигнальная последовательность может включать SEQ ID №: 66.
[0053] Сигнальная последовательность содержит аминокислоты 1-24 из SEQ ID №: 25, аминокислоты 9-24 из SEQ ID №: 25, или SEQ ID №: 25, или белок экзоспория может включать полноразмерный гипотетический белок bcerkbab4_2131 из В. weihenstephensis КВАВ4 (SEQ ID №: 26). Метиониновый остаток, связанный с аминокислотами 9-24 гипотетического белка bcerkbab4_2131 из В. weihenstephensis КВАВ4, также может быть использован в качестве сигнальной последовательности. Таким образом, сигнальная последовательность может включать SEQ ID №: 67.
[0054] В альтернативном варианте сигнальная последовательность содержит аминокислоты 1-30 из SEQ ID №: 27, аминокислоты 15-30 из SEQ ID №: 27, или SEQ ID №: 27, или белок экзоспория может включать полноразмерную тройную коллагеновую спираль из В. weihenstephensis КВАВ4 (SEQ ID №: 28).
[0055] Сигнальная последовательность может также содержать аминокислоты 1-33 из SEQ ID №: 29, аминокислоты 18-33 из SEQ ID №: 29, или SEQ ID №: 29, или белок экзоспория может включать полноразмерный гипотетический белок bmyco0001_21660 из В. mycoides 2048 (SEQ ID №: 30).
[0056] Сигнальная последовательность может также содержать аминокислоты 1-24 из SEQ ID №: 31, аминокислоты 9-24 из SEQ ID №: 31, или SEQ ID №: 31, или белок экзоспория может включать полноразмерный гипотетический белок bmyc0001_22540 из В. mycoides 2048 (SEQ ID №: 32). Метиониновый остаток, связанный с аминокислотами 9-24 гипотетического белка bmyc0001_22540 из В. mycoides 2048, также может быть использован в качестве сигнальной последовательности. Таким образом, сигнальная последовательность может включать SEQ ID №: 68.
[0057] В альтернативном варианте сигнальная последовательность содержит аминокислоты 1-15 из SEQ ID №: 33, SEQ ID №: 33, или белок экзоспория содержит полноразмерный гипотетический белок bmyc0001_21510 из В. mycoides 2048 (SEQ ID №: 34).
[0058] Сигнальная последовательность может также содержать аминокислоты 1-16 из SEQ ID №: 35, SEQ ID №: 35, или белок экзоспория может включать полноразмерный белок тройной коллагеновой спирали из В. thuringiensis 35646 (SEQ ID №: 36).
[0059] Сигнальная последовательность может включать аминокислоты 1-29 из SEQ ID №: 43, аминокислоты 14-29 из SEQ ID №: 43, или SEQ ID №: 43, или белок экзоспория может включать полноразмерный гипотетический белок WP_69652 из В. cereus (SEQ ID №: 44).
[0060] В альтернативном варианте сигнальная последовательность может включать аминокислоты 1-35 из SEQ ID №: 45, аминокислоты 20-35 из SEQ ID №: 45, или SEQ ID №: 45, или белок экзоспория может включать полноразмерный лидер WP016117717 из В. cereus (SEQ ID №: 46). Метиониновый остаток, связанный с аминокислотами 20-35 лидера WP016117717 из экзоспория В. cereus, также может быть использован в качестве сигнальной последовательности. Таким образом, сигнальная последовательность может включать SEQ ID №: 70.
[0061] Сигнальная последовательность может включать аминокислоты 1-43 из SEQ ID №: 47, аминокислоты 28-43 из SEQ ID №: 47, или SEQ ID №: 47, или белок экзоспория может включать полноразмерный пептид WP002105192 из экзоспория В. cereus (SEQ ID №: 48).
[0062] Сигнальная последовательность может включать аминокислоты 1-32 из SEQ ID №: 49, аминокислоты 17-32 из SEQ ID №: 49, или SEQ ID №: 49, или белок экзоспория может включать полноразмерный гипотетический белок WP87353 из В. cereus (SEQ ID №: 50).
[0063] В альтернативном варианте сигнальная последовательность может включать аминокислоты 1-33 из SEQ ID №: 51, аминокислоты 18-33 из SEQ ID №: 51, или SEQ ID №: 51, или белок экзоспория может включать полноразмерный пептид 02112369 из экзоспория В. cereus (SEQ ID №: 52).
[0064] Сигнальная последовательность может включать аминокислоты 1-33 из SEQ ID №: 53, аминокислоты 18-33 из SEQ ID №: 53, или SEQ ID №: 53, или белок экзоспория может включать полноразмерный белок WP016099770 из экзоспория В. cereus (SEQ ID №: 54).
[0065] В альтернативном варианте сигнальная последовательность может включать аминокислоты 1-30 из SEQ ID №: 55, аминокислоты 15-30 из SEQ ID №: 55, или SEQ ID №: 55, или белок экзоспория может включать полноразмерный гипотетический белок YP006612525 из В. thuringiensis (SEQ ID №: 56).
[0066] Сигнальная последовательность может также содержать аминокислоты 1-130 из SEQ ID №: 57, аминокислоты 115-130 из SEQ ID №: 57, или SEQ ID №: 57, или белок экзоспория может включать полноразмерный гипотетический белок TIGR03720 из В. mycoides (SEQ ID №: 58).
[0067] Кроме того, как легко можно понять из выравнивания последовательностей на Фигуре 1, в то время как аминокислоты 20-35 из BclA являются консервативными, и аминокислоты 25-35 являются более консервативными, в этой области может возникать некоторый уровень вариации, не влияя на способность сигнальной последовательности транспортировать белок в экзоспорий. В Фигуре 1 перечислены проценты идентичности каждой из соответствующих аминокислот каждой последовательности с аминокислотами 20-35 из BclA («20-35% идентичности») и с аминокислотами 25-35 на BclA («25-35% идентичности»). Так, например, по сравнению с аминокислотами 20-35 из BclA, соответствующие аминокислоты из BetA/BAS3290 идентичны на около 81,3%, соответствующие аминокислоты из BAS4623 идентичны на около 50,0%, соответствующие аминокислоты из BclB идентичны на около 43,8%, соответствующие аминокислоты из BAS1882 идентичны на около 62,5%, соответствующие аминокислоты генетического продукта КВАВ4 2280 идентичны на около 81,3% и соответствующие аминокислоты генетического продукта КВАВ4 3572 идентичны на около 81,3%. Идентичности для остальных последовательностей этой области перечислены на Фигуре 1.
[0068] В отношении аминокислот 25-35 из BclA, соответствующие аминокислоты из BetA/BAS3290 идентичны на около 90,9%, соответствующие аминокислоты из BAS4623 идентичны на около 72,7%, соответствующие аминокислоты из BclB идентичны на около 54,5%, соответствующие аминокислоты из BAS1882 идентичны на около 72,7%, соответствующие аминокислоты генетического продукта КВАВ4 2280 идентичны на около 90,9% и соответствующие аминокислоты генетического продукта КВАВ4 3572 идентичны на около 81,8%. Идентичности для остальных последовательностей этой области перечислены на Фигуре 1.
[0069] Таким образом, сигнальная последовательность может включать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере около 43% идентичности с аминокислотами 20-35 из SEQ ID №: 1, причем идентичность с аминокислотами 25-35 составляет по меньшей мере около 54%. В альтернативном варианте сигнальная последовательность состоит из аминокислотной последовательности, состоящей из 16 аминокислот и имеющей по меньшей мере около 43% идентичности с аминокислотами 20-35 из SEQ ID №: 1, причем идентичность с аминокислотами 25-35 составляет по меньшей мере около 54%.
[0070] Сигнальная последовательность может также содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере около 50% идентичности с аминокислотами 20-35 из SEQ ID №: 1, причем идентичность с аминокислотами 25-35 составляет по меньшей мере около 63%. В альтернативном варианте сигнальная последовательность состоит из аминокислотной последовательности, состоящей из 16 аминокислот и имеющей по меньшей мере около 50% идентичности с аминокислотами 20-35 из SEQ ID №: 1, причем идентичность с аминокислотами 25-35 составляет по меньшей мере около 63%.
[0071] Сигнальная последовательность может также содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере около 50% идентичности с аминокислотами 20-35 из SEQ ID №: 1, причем идентичность с аминокислотами 25-35 составляет по меньшей мере около 72%. В альтернативном варианте сигнальная последовательность состоит из аминокислотной последовательности, состоящей из 16 аминокислот и имеющей по меньшей мере около 50% идентичности с аминокислотами 20-35 из SEQ ID №: 1, причем идентичность с аминокислотами 25-35 составляет по меньшей мере около 72%.
[0072] Сигнальная последовательность может также содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере около 56% идентичности с аминокислотами 20-35 из SEQ ID №: 1, причем идентичность с аминокислотами 25-35 составляет по меньшей мере около 63%. В альтернативном варианте сигнальная последовательность состоит из аминокислотной последовательности, состоящей из 16 аминокислот и имеющей по меньшей мере около 56% идентичности с аминокислотами 20-35 из SEQ ID №: 1, причем идентичность с аминокислотами 25-35 составляет по меньшей мере около 63%.
[0073] В альтернативном варианте сигнальная последовательность может включать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере около 62% идентичности с аминокислотами 20-35 из SEQ ID №: 1, причем идентичность с аминокислотами 25-35 составляет по меньшей мере около 72%. Сигнальная последовательность может также состоять из аминокислотной последовательности, состоящей из 16 аминокислот и имеющей по меньшей мере около 62% идентичности с аминокислотами 20-35 из SEQ ID №: 1, причем идентичность с аминокислотами 25-35 из SEQ ID №: 1 составляет по меньшей мере около 72%.
[0074] Сигнальная последовательность может включать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 68% идентичности с аминокислотами 20-35 из SEQ ID №: 1, причем идентичность с аминокислотами 25-35 составляет по меньшей мере около 81%. В альтернативном варианте сигнальная последовательность состоит из аминокислотной последовательности, состоящей из 16 аминокислот и имеющей по меньшей мере 68% идентичности с аминокислотами 20-35 из SEQ ID №: 1, причем идентичность с аминокислотами 25-35 составляет по меньшей мере около 81%.
[0075] Сигнальная последовательность может также содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере около 75% идентичности с аминокислотами 20-35 из SEQ ID №: 1, причем идентичность с аминокислотами 25-35 составляет по меньшей мере около 72%. В альтернативном варианте сигнальная последовательность состоит из аминокислотной последовательности, состоящей из 16 аминокислот и имеющей по меньшей мере около 75% идентичности с аминокислотами 20-35 из SEQ ID №: 1, причем идентичность с аминокислотами 25-35 из SEQ ID №: 1 составляет по меньшей мере около 72%.
[0076] Сигнальная последовательность может также содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере около 75% идентичности с аминокислотами 20-35 из SEQ ID №: 1, причем идентичность с аминокислотами 25-35 составляет по меньшей мере около 81%. В альтернативном варианте сигнальная последовательность состоит из аминокислотной последовательности, состоящей из 16 аминокислот и имеющей по меньшей мере около 75% идентичности с аминокислотами 20-35 из SEQ ID №: 1, причем идентичность с аминокислотами 25-35 из SEQ ID №: 1 составляет по меньшей мере около 81%.
[0077] Сигнальная последовательность может также содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере около 81% идентичности с аминокислотами 20-35 из SEQ ID №: 1, причем идентичность с аминокислотами 25-35 составляет по меньшей мере около 81%. В альтернативном варианте сигнальная последовательность состоит из аминокислотной последовательности, состоящей из 16 аминокислот и имеющей по меньшей мере около 81% идентичности с аминокислотами 20-35 из SEQ ID №: 1, причем идентичность с аминокислотами 25-35 составляет по меньшей мере около 81%.
[0078] Сигнальная последовательность может включать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере около 81% идентичности с аминокислотами 20-35 из SEQ ID №: 1, причем идентичность с аминокислотами 25-35 составляет по меньшей мере около 90%. В альтернативном варианте сигнальная последовательность состоит из аминокислотной последовательности, состоящей из 16 аминокислот и имеющей по меньшей мере около 81% идентичности с аминокислотами 20-35 из SEQ ID №: 1, причем идентичность с аминокислотами 25-35 составляет по меньшей мере около 90%.
[0079] Специалисту в данной области техники будет понятно, что варианты указанных последовательностей могут быть также использованы в качестве сигнальных последовательностей при условии, что данная сигнальная последовательность содержит аминокислоты 20-35 из BclA, соответствующие аминокислоты из BetA/BAS3290, BAS4263, BclB, BAS1882, генетического продукта КВАВ4 2280 или генетического продукта КВАВ 3572, или имеется последовательность, содержащая любую из вышеуказанных идентичностей с аминокислотами 20-35 и 25-35 из BclA.
[0080] Дополнительно было обнаружено, что некоторые белки представителей семейства Bacillus cereus, которые не имеют области, гомологичной к аминокислотам 25-35 из BclA, также могут быть использованы для транспортировки пептида или белка в экзоспорий представителя семейства Bacillus cereus. В частности, гибридные белки могут содержать белок экзоспория, содержащий SEQ ID №: 71 (В. mycoides InhA), белок экзоспория, содержащий SEQ ID №: 72 (В. anthracis Sterne BAS1141 (ExsY)), белок экзоспория, содержащий SEQ ID №: 73 (В. anthracis Sterne BAS1144 (BxpB/ExsFA)), белок экзоспория, содержащий SEQ ID №: 74 (В. anthracis Sterne BAS1145 (Coty)), белок экзоспория, содержащий SEQ ID №: 75 (В. anthracis Sterne BAS1140), белок экзоспория, содержащий SEQ ID №: 76 (В. anthracis H9401 ExsFB), белок экзоспория, содержащий SEQ ID №: 77 (В. thuringiensis HD74 InhAl), белок экзоспория, содержащий SEQ ID №: 78 (В. cereus ATCC 10876 ExsJ), белок экзоспория, содержащий SEQ ID №: 79 (В. cereus ExsH), белок экзоспория, содержащий SEQ ID №: 80 (В. anthracis Ames YjcA), белок экзоспория, содержащий SEQ ID №: 81 (В. anthracis YjcB), белок экзоспория, содержащий SEQ ID №: 82 (В. anihracis Sterne BclC), белок экзоспория, содержащий SEQ ID №: 83 (Bacillus thuringiensis к. т.п.97-27 кислой фосфатазы) или белок экзоспория, содержащий SEQ ID №: 84. (В. thuringiensis HD74 InhA2). Включение белка экзоспория, содержащего SEQ ID №: 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83 или 84, в гибридные белки, описанные в данном документе, приведет к направлению в экзоспорий представителя семейства В. cereus.
[0081] Кроме того, белки экзоспория, имеющие высокую степень идентичности последовательности с любым из полноразмерных белков экзоспория, или фрагментов белка экзоспория, описанных выше, также могут быть использованы для транспортировки пептида или белка в экзоспорий представителя семейства Bacillus cereus. Таким образом, гибридный белок может включать белок экзоспория, включающий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности с любой из SEQ ID №: 2, 4, 6, 8,10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 59, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83 и 84. В альтернативном варианте гибридный белок может включать белок экзоспория, имеющий по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или 100% идентичности с любой из SEQ ID №: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 59, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83 и 84.
[0082] В альтернативном варианте гибридный белок может включать фрагмент белка экзоспория, состоящий из аминокислотной последовательности, имеющей по меньшей мере 85% идентичности с SEQ ID №: 59. В альтернативном варианте гибридный белок может включать фрагмент белка экзоспория, состоящий из аминокислотной последовательности, имеющей по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или 100% идентичности с SEQ ID №: 59.
[0083] В любой из сигнальных последовательностей, белках экзоспория или фрагментах белка экзоспория, описанных в данном документе, сигнальная последовательность, белок экзоспория или фрагмент белка экзоспория может включать аминокислотную последовательность GXT на его углеродном конце, причем X представляет собой любую аминокислоту.
[0084] В любой из сигнальных последовательностей, белках экзоспория или фрагментах белка экзоспория, описанных в данном документе, сигнальная последовательность, белок экзоспория или фрагмент белка экзоспория может содержать аланиновый остаток в положении сигнальной последовательности, соответствующем аминокислоте 20 из SEQ ID №: 1.
Гибридные белки
[0085] Данное изобретение относится к гибридным белкам, содержащим сигнальную последовательность, белок экзоспория, или фрагмент белка экзоспория, и по меньшей мере один белок или пептид, стимулирующий рост растения, причем белок или пептид, стимулирующий рост растения, включает пептидный гормон, негормональный пептид или фермент, участвующий в продуцировании или активации соединения, стимулирующего рост растения. Сигнальная последовательность, белок экзоспория или фрагмент белка экзоспория может представлять собой любую из сигнальных последовательностей, белков экзоспория или фрагментов белка экзоспория, описанных ранее в параграфе [0005].
[0086] Данное изобретение дополнительно относится к гибридным белкам, содержащим сигнальную последовательность, белок экзоспория, или фрагмент белка экзоспория и по меньшей мере один белок или пептид, который повышает устойчивость к стрессу в растении. Сигнальная последовательность, белок экзоспория или фрагмент белка экзоспория может представлять собой любую из сигнальных последовательностей, белков экзоспория или фрагментов белка экзоспория, описанных ранее в параграфе [0005].
[0087] Кроме того, данное изобретение относится к гибридным белкам, содержащим сигнальную последовательность, белок экзоспория или фрагмент белка экзоспория и по меньшей мере один белок или пептид, связывающийся с растением. Сигнальная последовательность, белок экзоспория или фрагмент белка экзоспория может представлять собой любую из сигнальных последовательностей, белков экзоспория или фрагментов белка экзоспория, описанных ранее в параграфе [0005].
[0088] Данное изобретение также относится к гибридным белкам, содержащим сигнальную последовательность, белок экзоспория, или фрагмент белка экзоспория и по меньшей мере один белок или пептид, защищающий растение от патогена. Сигнальная последовательность, белок экзоспория или фрагмент белка экзоспория может представлять собой любую из сигнальных последовательностей, белков экзоспория или фрагментов белка экзоспория, описанных ранее в параграфе [0006].
[0089] Данное изобретение дополнительно относится к гибридным белкам, содержащим сигнальную последовательность, белок экзоспория, или фрагмент белка экзоспория и по меньшей мере один белок или пептид, защищающий растение от патогена. Белок или пептид, защищающий растение от патогена, включает гарпин, α-эластин, β-эластин, системин, фенилаланин аммиак-лиазу, элиситин, дефензин, криптогеин, белок флагеллин, пептид флагеллина, бактериоцин, лизоцим, пептид лизоцима, сидерофор, нерибосомальный активный пептид, кональбумин, альбумин, лактоферрин, пептид лактоферрина или TasA. В альтернативном варианте белок или пептид, защищающий растение от патогена, обладает инсектицидной активностью, антигельминтной активностью, подавляет хищничество насекомых или червей, или их комбинацию. В альтернативном варианте белок, защищающий растение от патогена, включает фермент.Сигнальная последовательность, белок экзоспория или фрагмент белка экзоспория может представлять собой любую из сигнальных последовательностей, белков экзоспория или фрагментов белка экзоспория, описанных ранее в параграфе [0005].
[0090] Гибридный белок может быть получен с использованием стандартных способов клонирования и молекулярной биологии, известных в данной области техники. Например, ген, кодирующий белок или пептид (например, ген, кодирующий белок или пептид, стимулирующий рост растения) может быть амплифицирован с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) и лигирован с кодирующей ДНК для любой из сигнальных последовательностей, описанных выше, с целью сформировать молекулу ДНК, которая кодирует гибридный белок. Молекула ДНК кодирующая гибридный белок, может быть клонирована в виде любого подходящего вектора, например, плазмидного вектора. В подходящем варианте вектор содержит сайт множественного клонирования, в который может быть легко вставлена молекула ДНК, кодирующая гибридный белок. В подходящем варианте вектор также содержит селективный маркер, например, ген резистентности к антибиотику, таким образом, что трансформированные, трансфицированные или соединенные с вектором бактерии могут быть легко идентифицированы и выделены. В случае, когда вектор представляет собой плазмиду, в подходящем варианте плазмида также содержит точку начала репликации. В подходящем варианте ДНК, кодирующая гибридный белок, находится под контролем промотора споруляции, который будет вызывать экспрессию гибридного белка на экзоспорий эндоспоры представителя семейства В. cereus (например, нативный промотор BclA представителя семейства В. cereus). В альтернативном варианте ДНК, кодирующая гибридный белок, может быть интегрирована в хромосомную ДНК представителя семейства В. cereus.
[0091] Гибридный белок может также содержать дополнительные последовательности полипептидов, которые не являются частью сигнальной последовательности, белка экзоспория, фрагмента белка экзоспория или белка или пептида, стимулирующего рост растений, белка или пептида, защищающего растение от патогенов, белка или пептида который повышает устойчивость к стрессу в растении, или белка или пептида, который связывается с растением. Например, гибридный белок может включать метки или маркеры с целью облегчить очистку или визуализацию гибридного белка (например, полигистидиновую метку или флуоресцентный белок, такой как GFP или YFP) или визуализации спор рекомбинантных представителей семейства Bacillus cereus, экспрессирующих гибридный белок.
[0092] Экспрессия гибридных белков на экзоспорий с использованием сигнальных последовательностей, белков экзоспория и фрагментов белка экзоспория, описанных в данном документе, усиливается из-за отсутствия вторичной структуры в амино-конце этих последовательностей, что позволяет сохранить нативную структуру и активность гибридных белков. Правильность формы может быть дополнительно усилена включением короткого аминокислотного линкера между сигнальной последовательностью, белком экзоспория, фрагментом белка экзоспория и белком-партнером слияния.
[0093] Таким образом, любой из гибридных белков, описанных в данном документе, может включать аминокислотный линкер между сигнальной последовательностью, белком экзоспория или фрагментом белка экзоспория и белком или пептидом, стимулирующим рост растения, белком или пептидом, защищающим растение от патогена, белком или пептидом, повышающим устойчивость к стрессу в растении, или белком или пептидом, связывающимся с растением.
[0094] Линкер может включать полиаланиновый линкер или полиглициновый линкер. Также может быть использован линкер, содержащий смесь обоих - аланинового и глицинового остатков. Например, если сигнальная последовательность содержит SEQ ID №: 1, гибридный белок может иметь одну из следующих структур:
Линкер отсутствует: SEQ ID №: 1 - белок-партнер слияния
Аланиновый линкер: SEQ ID №: 1-An-белок-партнер слияния
Глициновый линкер: SEQ ID №: 1-Gn-белок-партнер слияния
Смесь аланинового и глицинового линкеров: SEQ ID №: 1-(А/G)n-белок-партнер слияния
где An, Gn, и (A/G) представляют собой аланины в любом количестве, глицины в любом количестве или смесь аланинов и глицинов в любом количестве, соответственно. Например, n может составлять от 1 до 25, и предпочтительно от 6 до 10. Если линкер содержит смесь аланиновых и глициновых остатков, может быть использована любая комбинация глицина и аланина. В приведенных выше структурах «белок-партнер слияния» представляет собой белок или пептид, стимулирующий рост растения, белок или пептид, защищающий растение от патогена, белок или пептид, повышающий устойчивость к стрессу в растении, или белок или пептид, связывающийся с растением.
[0095] В альтернативном варианте или в дополнение, линкер может включать сайт распознавания протеазой. Включение сайта распознавания протеазой позволяет целевое удаление под воздействием протеазы, которая распознает сайт распознавания протеазой, в белке или пептиде, стимулирующем рост растения, белке или пептиде, защищающем растение от патогена, белке или пептиде, повышающем устойчивость к стрессу в растении, или белке или пептиде, связывающемся с растением.
Белки и пептиды, стимулирующие рост растения
[0096] Как отмечено выше, данное изобретение относится к гибридным белкам, содержащим сигнальную последовательность, белок экзоспория или фрагмент белка экзоспория и по меньшей мере один белок или пептид, стимулирующий рост растения, причем белок или пептид, стимулирующий рост растения, включает пептидный гормон, негормональный пептид или фермент, участвующий в продуцировании или активации соединения, стимулирующего рост растения.
[0097] Например, если белок или пептид, стимулирующий рост растения, содержит пептидный гормон, этот пептидный гормон может включать фитосульфокин (например, фитосульфокин-α), clavata 3 (CLV3), системин, ZmlGF или SCR/SP11.
[0098] Если белок или пептид, стимулирующий рост растения, содержит негормональный пептид, этот негормональный пептид может включать RKN 16D10, Hg-Syv46, eNOD40 пептид, мелиттин, мастопаран, Mas7, RHPP, POLARIS или ингибитор трипсина Кунитца (ИТК).
[0099] Белок или пептид, стимулирующий рост растения, может включать фермент, участвующий в образовании или активации соединения, стимулирующего рост растения. Фермент, участвующий в образовании или активации соединения, стимулирующего рост растения, может представлять собой любой фермент, который катализирует любой этап пути биосинтеза соединения, которое стимулирует рост растения или изменяет структуру растения, или любой фермент, который катализирует переход неактивного или менее активного производного соединения, которое стимулирует рост растения или изменяет структуру растения, в активную или более активную форму соединения.
[00100] Соединение, которое стимулирует рост растения, может включать соединение, производимое бактериями или грибами в ризосфере, например, 2,3-бутандиол.
[00101] В альтернативном варианте соединение, которое стимулирует рост растения, может включать гормон роста растений, например, цитокинин или производное цитокинина, этилен, ауксин или производное ауксина, гибберелловую кислоту или ее производное гибберелловой кислоты, абсцизовую кислоту или производное абсцизовой кислоты, жасминовую кислоту или производное жасминовой кислоты.
[00102] Если соединение, стимулирующее рост растений, включает цитокинин или производную цитокинина, цитокинин или производное цитокинина может включать кинетин, цис-зеатин, транс-зеатин, 6-бензиламинопурин, дигидроксизеатин, N6-(D2-изопентенил) аденин, рибозилзеатин, N6-(D2-изопентенил) аденозин, 2-метилтио-цис-рибозилзеатин, цис-рибозилзеатин, транс-рибозилзеатин, 2-метилтио-транс-рибозилзеатин, рибозилзеатин-5-монофосфат, N6-метиламинопурин, N6-диметиламинопурин, 2'-дезоксизеатин рибозид, 4-гидрокси-3-метил-транс-2-бутениламинопурин, орто-тополин, мета-тополин, бензиладенин, орто-метилтополин, мета-метилтополин или их комбинацию.
[00103] Если соединение, стимулирующие рост растения, содержит ауксин или производное ауксина, ауксин или производное ауксина может включать активный ауксин, неактивный ауксин, конъюгированный ауксин, природный ауксин, синтетический ауксин или их комбинацию. Например, ауксин или производное ауксина может включать индол-3-ацетальдоксим, индол-3-ацетамид, индол-3-ацетонитрил, индол-3-этанол, индол-3-пируват, индол-3-ацетальдоксим, индол-3-масляную кислоту, фенилуксусную кислоту, 4-хлориндол-3-уксусную кислоту, ауксин, конъюгированный с глюкозой, или их комбинацию.
[00104] Фермент, участвующий в образовании или активации соединения, которое стимулирует рост растения, может включать ацетоинредуктазу, индол-3-ацетамидгидролазу, триптофанмонооксигеназу, ацетолактатсинтетазу, α-ацетолактатдекарбоксилазу, пируватдекарбоксилазу, диацетилредуктазу, бутандиолдегидрогеназу, аминотрансферазу, триптофандекарбоксилазу, аминоксидазу, индол-3-пируватдекарбоксилазу, индол-3-ацетальдегид-дегидрогеназу, триптофан боковой цепи-оксидазу, нитрилгидролазу, нитрилазу, пептидазу, протеазу, аденозинфосфат-изопентилтрансферазу, фосфатазу, аденозинкиназу, аденин-фосфорибозилтрансферазу, CYP735A, 5'-рибонуклеотид-фосфогидролазу, аденозин-нуклеозидазу, зеатин-цис-транс-изомеразу, зеатин-О-глюкозилтрансферазу, β-глюкозидазу, цис-гидроксилазу, ЦК-цис-гидроксилазу, ЦК-N-глюкозилтрансферазу, 2,5-рибонуклеотид-фосфогидролазу, аденозин-нуклеозидазу, пурин-нуклеозидфосфорилазу, зеатинредуктазу, гидроксиламинредуктазу, 2-оксоглутаратдиоксигеназу, гибберелловую-2В/3В-гидролазу, гиббереллин-3-оксидазу, гиббереллин-20-оксидазу, хитозиназу, хитиназу, β-1,3-глюканазу, β-1,4-глюканазу, β-1,6-глюканазу, аминоциклопропан-1-карбоновой кислоты-деаминазу или фермент, участвующий в продуцировании nod-факторов (например, NodA, nodB или NodI).
[00105] Если фермент включает протеазу или пептидазу, эта протеаза или пептидаза может представлять собой протеазу или пептидазу, которая расщепляет белки, пептиды, пробелки или препробелки для получения биологически активного пептида. Биологически активный пептид может представлять собой любой пептид, который проявляет биологическую активность.
[00106] Примеры биологически активных пептидов включают RKN 16D10 и RHPP.
[00107] Протеаза или пептидаза, которая расщепляет белки, пептиды, пробелки или препробелки для получения биологически активного пептида, может включать субтилизин, кислую протеазу, щелочную протеазу, протеиназу, эндопептидазу, экзопептидазу, термолизин, папаин, пепсин, трипсин, проназу, карбоксилазу, сериновую протеазу, глутаминовую протеазу, аспартатную протеазу, цистеиновую протеазу, треониновую протеазу или металлопротеазу.
[00108] Протеазы или пептидазы могут расщеплять белки в пище, богатой белком (например, соевый шрот или дрожжевой экстракт).
Белки и пептиды, которые защищают растения от патогенов
[00109] Данное изобретение относится к гибридным белкам, содержащим сигнальную последовательность, белок экзоспория или фрагмент белка экзоспория и по меньшей мере один белок или пептид, защищающий растение от патогена.
[00110] Белок или пептид, защищающий растение от патогена, может включать белок или пептид, который стимулирует иммунный ответ растения. Например, белок или пептид, который стимулирует иммунную реакцию растения, может включать белок или пептид, усиливающий иммунную систему растения. Белок или пептид, который усиливает иммунную систему растения, может представлять собой любой белок или пептид, который оказывает благоприятное воздействие на иммунную систему растения. Подходящие белки или пептиды, которые усиливают иммунную систему растения, включают гарпины, α-эластины, β-эластины, системины, фенилаланин аммиак-лиазу, элиситины, дефензины, криптогеины, белки флагеллины и пептиды флагеллина (например, flg22).
[00111] В альтернативном варианте белок или пептид, защищающий растение от патогена, может представлять собой белок или пептид, который обладает антибактериальной активностью, противогрибковой активностью, или обеими - антибактериальной и противогрибковой активностью. Примеры таких белков и пептидов включают бактериоцины, лизоцимы, пептиды лизоцима (например, LysM), сидерофоры, нерибосомальные активные пептиды, кональбумины, альбумины, лактоферрины, пептиды лактоферрина (например, LfcinB) и TasA.
[00112] Белок или пептид, защищающий растение от патогена, может также представлять собой белок или пептид, который обладает инсектицидной активностью, антигельминтной активностью, подавляет хищничество насекомых или червей, или обладает их комбинацией. Например, белок или пептид, защищающий растение от патогена, может включать инсектицидный бактериальный токсин (например, инсектицидный белок VIP), эндотоксин, Cry токсин (например, Cry токсин из Bacillus thuringiensis), белок или пептид ингибитор протеазы (например, ингибитор трипсина или стреловидный ингибитор протеазы), цистеиновую протеазу или хитиназу. Если Cry токсин представляет собой Cry токсин из Bacillus thuringiensis, Cry токсин может представлять собой белок Cry5В или белок Cry21A. Оба Cry5В и Cry21A обладают инсектицидной и нематоцидной активностью.
[00113] Белок, защищающий растение от патогена, может включать фермент. Подходящие ферменты включают протеазы и лактоназы. В протеазы и лактоназы могут быть специфичным для бактериальной сигнальной молекулы (например, бактериальную сигнальную молекулу гомосеринового лактона).
[00114] Если фермент представляет собой лактоназу, такая лактоназа может включать 1,4-лактоназу, 2-пирон-4,6-дикарбоксилат-лактоназу, 3-оксоадипат-енол-лактоназу, актиномицин-лактоназу, дезоксилимонат-А-кольцевую-лактоназу, глюконолактоназу, L-рамноно-1,4-лактоназу, лимонин-D-кольцевую-лактоназу, стероид-лактоназу, триацетат-лактоназу или ксилоно- 1,4-лактоназу.
[00115] Фермент также может представлять собой фермент, который является специфичным для клеточного компонента бактерий или грибов. Например, фермент может включать β-1,3-глюканазу, β-1,4-глюканазу, β-1,6-глюканазу, хитозиназу, хитиназу, хитозиназоподобный фермент, литиказу, пептидазу, протеиназу, протеазу (например, щелочную протеазу, кислую протеазу или нейтральную протеазу), мутанолизин, стафолисин или лизоцим.
[00116] Для любого из вышеуказанных гибридных белков, содержащих белок или пептид, защищающий растение от патогена, патоген может представлять собой бактериальный патоген или грибковый патоген. Например, патоген может включать протеобактерию α-класса, протеобактерию β-класса, протеобактерию γ-класса или их комбинацию. Конкретные бактериальные патогены включают Agrobacterium tumefaciens, Pantoea stewartii, Erwinia carotovora, Ralstonia solanacearum, Pseudomonas syringae, Pseudomonas aeruginosa, Xanthomonas campestris и их комбинации.
[00117] Другие бактериальные и грибковые патогены включают Acarosporina microspora, Aceria guerreronis, Achlya conspicua, Achlya klebsiana, Achlysiella williamsi, Acholeplasmataceae, Acidovorax avenae, Acremonium strictum, Acrocalymma medicaginis, Acrodontium simplex, Acrophialophora fusispora, Acrosporium tingitaninum, Aecidium, Aecidium aechmantherae, Aecidium amaryllidis, Aecidium breyniae, Aecidium campanulastri, Aecidium cannabis, Aecidium cantensis, Aecidium caspicum, Aecidium foeniculi, Agrobacterium tumefaciens, Albonectria rigidiuscula, Albugo bliti, Albugo candida, Albugo ipomoeae-panduratae, Albugo laibachii, Albugo occidentalis, Albugo tragopogonis, Alternaria, Alternaria alternata, Alternaria brassicae, Alternaria brassicicola, Alternaria carthami, Alternaria cinerariae, Alternaria citri, Alternaria dauci, Alternaria dianthi, Alternaria dianthicola, Alternaria euphorbiicola, Alternaria helianthi, Alternaria helianthicola, Alternaria japonica, Alternaria leucanthemi, Alternaria limicola, Alternaria linicola, Alternaria mali, Alternaria padwickii, Alternaria panax, Alternaria radicina, Alternaria raphani, Alternaria saponariae, Alternaria senecionis, Alternaria solani, Alternaria tenuissima, Alternaria triticina, Alternaria zinniae, Amazonia, Amphobotrys ricini, Anguillosporella vermiformis, Anguina (род), Anguina agrostis, Anguina amsinckiae, Anguina australis, Anguina balsamophila, Anguina funesta, Anguina graminis, Anguina spermophaga, Anguina tritici, Anisogramma anomala, Anthostomella pullulans, Antrodia albida, Antrodia serialiformis, Antrodia serialis, Aphanomyces cladogamus, Aphanomyces cochlioides, Aphanomyces euteiches, Aphanomyces euteiches f. sp.pisi, Aphanomyces raphani, Aphelenchoides, Aphelenchoides arachidis, Aphelenchoides besseyi, Aphelenchoides fragariae, Aphelenchoides parietinus, Aphelenchoides ritzemabosi, Aphelenchus avenae, Apiognomonia errabunda, Apiognomonia veneta, Apiospora montagnei, Appendiculella, Armillaria, Armillaria affinis, Armillaria apalosclera, Armillaria camerunensis, Armillaria duplicate, Armillaria fellea, Armillaria fumosa, Armillaria fuscipes, Armillaria griseomellea, Armillaria heimii, Armillaria mellea, Armillaria melleorubens, Armillaria montagnei, Armillaria omnituens, Armillaria pallidula, Armillaria paulensis, Armillaria pelliculata, Armillaria procera, Armillaria puiggarii, Armillaria singular, Armillaria socialis, Armillaria solidipes, Armillaria tabescens, Armillaria tigrensis, Armillaria umbrinobrunnea, Armillaria viridiflava, Armillaria yungensis, Arthrocladiella, Arthuriomyces peckianus, Ascochyta asparagine, Ascochyta bohemica, Ascochyta caricae, Ascochyta doronici, Ascochyta fabae f. sp.lentis, Ascochyta graminea, Ascochyta hordei, Ascochyta humuli, Ascochyta pisi, Ascochyta prasadii, Ascochyta sorghi, Ascochyta spinaciae, Ascochyta tarda, Ascochyta tritici, Ascospora ruborum, Ashbya gossypii, Aspergillus aculeatus, Aspergillus fischerianus, Aspergillus niger, Asperisporium caricae, Asperisporium minutulum, Asteridiella, Asteridiella perseae, Asteroma caryae, Asteroma coryli, Asteroma inconspicuum, Athelia arachnoidea, Athelia rolfsii, Aurantiporus fissilis, Belonolaimus, Belonolaimus gracilis, Belonolaimus longicaudatus, Beniowskia sphaeroidea, Bionectria ochroleuca, Bipolaris, Bipolaris cactivora, Bipolaris cookie, Bipolaris incurvata, Bipolaris sacchari, Biscogniauxia capnodes var. capnodes, Biscogniauxia marginata, Biscogniauxia nummularia, Bjerkandera adusta, Blakeslea trispora, Blumeria graminis, Botryodiplodia oncidii, Botryodiplodia ulmicola, Botryosphaeria cocogena, Botryosphaeria corticola, Botryosphaeria disrupta, Botryosphaeria dothidea, Botryosphaeria marconii, Botryosphaeria obtuse, Botryosphaeria quercuum, Botryosphaeria rhodina, Botryosphaeria ribis, Botryosphaeria stevensii, Botryosporium pulchrum, Botryotinia, Botryotinia fuckeliana, Botrytis anthophila, Botrytis cinerea, Botrytis fabae, Bremia lactucae, Brenneria salicis, Briosia ampelophaga, Bulbomicrosphaera, Burkholderia andropogonis, Burkholderia caryophylli, Burkholderia glumae, Cadophora malorum, Caespitotheca, Calonectria indusiata, Calonectria kyotensis, Calonectria quinqueseptata, Calvatia versispora, Camarosporium pistaciae, Camarotella acrocomiae, Camarotella costaricensis, Candidatus Liberibacter, Capitorostrum cocoes, Capnodium footii, Capnodium mangiferum, Capnodium ramosum, Capnodium theae, Caulimoviridae, Cephaleuros virescens, Cephalosporium gramineum, Ceratobasidium cereal, Ceratobasidium cornigerum, Ceratobasidium noxium, Ceratobasidium ramicola, Ceratobasidium setariae, Ceratobasidium stevensii, Ceratocystis adiposa, Ceratocystis coerulescens, Ceratocystis fimbriata, Ceratocystis moniliformis, Ceratocystis paradoxa, Ceratocystis pilifera, Ceratocystis pluriannulata, Ceratorhiza hydrophila, Ceratospermopsis, Cercoseptoria ocellata, Cercospora, Cercospora angreci, Cercospora apii, Cercospora apii f. sp. clerodendri, Cercospora apiicola, Cercospora arachidicola, Cercospora asparagi, Cercospora atrofiliformis, Cercospora beticola, Cercospora brachypus, Cercospora brassicicola, Cercospora brunkii, Cercospora cannabis, Cercospora cantuariensis, Cercospora capsici, Cercospora carotae, Cercospora corylina, Cercospora fragariae, Cercospora fuchsiae, Cercospora fusca, Cercospora fusimaculans, Cercospora gerberae, Cercospora halstedii, Cercospora handelii, Cercospora hayi, Cercospora hydrangea, Cercospora kikuchii, Cercospora lentis, Cercospora liquidambaris, Cercospora longipes, Cercospora longissima, Cercospora mamaonis, Cercospora mangiferae, Cercospora medicaginis, Cercospora melongenae, Cercospora minima, Cercospora minuta, Cercospora nicotianae, Cercospora odontoglossi, Cercospora papaya, Cercospora penniseti, Cercospora pisa-sativae, Cercospora platanicola, Cercospora puderii, Cercospora pulcherrima, Cercospora rhapidicola, Cercospora rosicola, Cercospora rubrotincta, Cercospora sojina, Cercospora solani, Cercospora solani-tuberosi, Cercospora sorghi, Cercospora theae, Cercospora tuberculans, Cercospora vexans, Cercospora vicosae, Cercospora zeae-maydis, Cercospora zebrina, Cercospora zonata, Cercosporella rubi, Cereal cyst nematode, Ceriporia spissa, Ceriporia xylostromatoides, Cerrena unicolor, Ceuthospora lauri, Choanephora, Choanephora cucurbitarum, Choanephora infundibulifera, Chondrostereum purpureum, Chrysomyxa ledi var. rhododendri, Chrysomyxa ledicola, Chrysomyxa piperiana, Chrysomyxa roanensis, Cladosporium, Cladosporium arthropodii, Cladosporium caryigenum, Cladosporium cladosporioides, Cladosporium cladosporioides f. sp.pisicola, Cladosporium cucumerinum, Cladosporium herbarum, Cladosporium musae, Cladosporium oncobae, Clavibacter michiganensis, Claviceps fusiformis, Claviceps purpurea, Claviceps sorghi, Claviceps zizaniae, Climacodon pulcherrimus, Climacodon septentrionalis, Clitocybe parasitica, Clonostachys rosea f. rosea, Clypeoporthe iliau, Cochliobolus, Cochliobolus carbonum, Cochliobolus cymbopogonis, Cochliobolus hawaiiensis, Cochliobolus heterostrophus, Cochliobolus lunatus, Cochliobolus miyabeanus, Cochliobolus ravenelii, Cochliobolus sativus, Cochliobolus setariae, Cochliobolus spicifer, Cochliobolus stenospilus, Cochliobolus tuberculatus, Cochliobolus victoriae, Coleosporium helianthi, Coleosporium ipomoeae, Coleosporium madiae, Coleosporium pacificum, Coleosporium tussilaginis, Colletotrichum acutatum, Colletotrichum arachidis, Colletotrichum capsici, Colletotrichum cereale, Colletotrichum crassipes, Colletotrichum dematium, Colletotrichum dematium f. spinaciae, Colletotrichum derridis, Colletotrichum destructivum, Colletotrichum fragariae, Colletotrichum gossypii, Colletotrichum higginsianum, Colletotrichum kahawae, Colletotrichum lindemuthianum, Colletotrichum lini, Colletotrichum mangenotii, Colletotrichum musae, Colletotrichum nigrum, Colletotrichum orbiculare, Colletotrichum pisi, Colletotrichum sublineolum, Colletotrichum trichellum, Colletotrichum trifolii, Colletotrichum truncatum, Coniella castaneicola, Coniella diplodiella, Coniella fragariae, Coniothecium chomatosporum, Coniothyrium celtidis-australis, Coniothyrium henriquesii, Coniothyrium rosarum, Coniothyrium wernsdorffiae, Coprinopsis psychromorbida, Cordana johnstonii, Cordana musae, Coriolopsis floccose, Coriolopsis gallica, Corticium invisum, Corticium penicillatum, Corticium theae, Coryneopsis rubi, Corynespora cassiicola, Coryneum rhododendri, Crinipellis sarmentosa, Cronartium ribicola, Cryphonectriaceae, Cryptocline cyclaminis, Cryptomeliola, Cryptoporus volvatus, Cryptosporella umbrina, Cryptosporiopsis tarraconensis, Cryptosporium minimum, Curvularia caricae-papayae, Curvularia penniseti, Curvularia senegalensis, Curvularia trifolii, Cylindrocarpon candidum, Cylindrocarpon ianthothele var. ianthothele, Cylindrocarpon magnusianum, Cylindrocarpon musae, Cylindrocladiella camelliae, Cylindrocladiella parva, Cylindrocladium clavatum, Cylindrocladium lanceolatum, Cylindrocladium peruvianum, Cylindrocladium pteridis, Cylindrosporium cannabinum, Cylindrosporium juglandis, Cylindrosporium rubi, Cymadothea trifolii, Cytospora, Cytospora palmarum, Cytospora personata, Cytospora platani, Cytospora sacchari, Cytospora sacculus, Cytospora terebinthi, Cytosporina ludibunda, Dactuliophora elongata, Daedaleopsis confragosa, Dasineura urticae, Datronia scutellata, Davidiella carinthiaca, Davidiella dianthi, Davidiella tassiana, Deightoniella papuana, Deightoniella torulosa, Dendrophoma marconii, Dendrophora erumpens, Denticularia mangiferae, Dermea pseudotsugae, Diaporthaceae, Diaporthe, Diaporthe arctii, Diaporthe citri, Diaporthe dulcamarae, Diaporthe eres, Diaporthe helianthi, Diaporthe lagunensis, Diaporthe lokoyae, Diaporthe melonis, Diaporthe orthoceras, Diaporthe perniciosa, Diaporthe phaseolorum, Diaporthe phaseolorum var. caulivora, Diaporthe phaseolorum var. phaseolorum, Diaporthe phaseolorum var. sojae, Diaporthe rudis, Diaporthe tanakae, Diaporthe toxica, Dibotryon morbosum, Dicarpella dryina, Didymella bryoniae, Didymella fabae, Didymella lycopersici, Didymosphaeria arachidicola, Didymosphaeria taiwanensis, Dilophospora alopecuri, Dimeriella sacchari, Diplocarpon earlianum, Diplocarpon mali, Diplocarpon mespili, Diplocarpon rosae, Diplodia laelio-cattleyae, Diplodia manihoti, Diplodia paraphysaria, Diplodia theae-sinensis, Discosia artocreas, Guignardia fulvida, Discostroma corticola, Distocercospora, Distocercospora livistonae, Ditylenchus, Ditylenchus africanus, Ditylenchus angustus, Ditylenchus destructor, Ditylenchus dipsaci, Dolichodorus heterocephalus, Dothideomycetes, Dothiorella aromatic, Dothiorella dominicana, Dothiorella gregaria, Dothiorella ulmi, Drechslera avenacea, Drechslera campanulata, Drechslera dematioidea, Drechslera gigantea, Drechslera glycines, Drechslera musae-sapientium, Drechslera teres f. maculate, Drechslera wirreganensis, Durandiella pseudotsugae, Eballistra lineata, Eballistra oryzae, Eballistraceae, Echinodontium tinctorium, Ectendomeliola, ampelina, australis, batatas, brasiliensis, fawcettii, leucospila, mangiferae, piri, randii, rosarum, sacchari, theae, veneta, Endomeliola, Endothia radicalis, Endothiella gyrosa, Entoleuca mammata, Entorrhizomycetes, Entyloma ageratinae, Entyloma dahlia, Entyloma ellisii, Epicoccum nigrum, Ergot, Erwinia, Erwinia chrysanthemi, Erwinia psidii, Erysiphaceae, Erysiphales, Erysiphe, Erysiphe alphitoides, Erysiphe betae, Erysiphe brunneopunctata, Erysiphe cichoracearum, Erysiphe cruciferarum, Erysiphe flexuosa, Erysiphe graminis f. sp. avenae, Erysiphe graminis f. sp.tritici, Erysiphe heraclei, Erysiphe pisi, Eutypella parasitica, Eutypella scoparia, Exobasidium burtii, Exobasidium reticulatum, Exobasidium vaccina var. japonicum, Exobasidium vaccinii-uliginosi, Exobasidium vexans, Exophiala,Flavescence , Fomes fasciatus, Fomes , Fomes meliae, Fomitopsis cajanderi, Fomitopsis palustris, Fomitopsis rosea, Fomitopsis spraguei, Fomitopsis supina, Forma specialis, Frommeella tormentillae, Fusarium, Fusarium affine, Fusarium arthrosporioides, Fusarium circinatum, Fusarium crookwellense, Fusarium culmorum, Fusarium graminearum, Fusarium incarnatum, Fusarium solani, Fusarium merismoides, Fusarium oxysporum f. sp.albedinis, Fusarium oxysporum f. sp.asparagi, Fusarium oxysporum f. sp.batatas, Fusarium oxysporum f. sp.betae, Fusarium oxysporum f. sp.cannabis, Fusarium oxysporum f. sp.citri, Fusarium oxysporum f. sp. coffea, Fusarium oxysporum f. sp.cubense, Fusarium oxysporum f. sp.cyclaminis, Fusarium oxysporum f. sp.dianthi, Fusarium oxysporum f. sp.lentis, Fusarium oxysporum f. sp.lini, Fusarium oxysporum f. sp.lycopersici, Fusarium oxysporum f. sp.medicaginis, Fusarium oxysporum f. sp.pisi, Fusarium oxysporum f. sp.radicis-lycopersici, Fusarium pallidoroseum, Fusarium proliferatum, Fusarium redolens, Fusarium sacchari, Fusarium solani f. sp.pisi, Fusarium sporotrichioides, Fusarium subglutinans, Fusarium sulphureum, Fuscoporia torulosa, Fusicladium pisicola, Fusicoccum aesculi, Fusicoccum amygdali, Gaeumannomyces graminis var tritici, Gaeumannomyces graminis var. avenae, Gaeumannomyces graminis var. graminis, Galactomyces candidum, Ganoderma brownii, Ganoderma lobatum, Ganoderma orbiforme, Ganoderma philippii, Ganoderma tornatum, Ganoderma zonatum, Geastrumia polystigmatis, Georgefischeriaceae, Georgefischeriales, Geosmithia morbida, Geotrichum, Geotrichum candidum, Geotrichum candidum var. citri-aurantii, Geotrichum klebahnii, Gibberella, Gibberella acuminata, Gibberella avenacea, Gibberella baccata, Gibberella cyanogena, Gibberella fujikuroi, Gibberella fujikuroi var. subglutinans, Gibberella intricans, Gibberella pulicaris, Gibberella stilboides, Gibberella xylarioides, Gibberella zeae, Gibellina cerealis, Gilbertella persicaria, Gjaerumiaceae, Gliocladium vermoeseni, Globodera pallida, Globodera rostochiensis, Globodera tabacum, Gloeocercospora sorghi, Gloeocystidiellum porosum, Gloeophyllum mexicanum, Gloeophyllum trabeum, Gloeoporus dichrous, Gloeosporium cattleyae, Gloeosporium theae-sinensis, Glomerella cingulate, Glomerella glycines, Glomerella graminicola, Glomerella tucumanensis, Gnomonia caryae, Gnomonia comari, Gnomonia dispora, Gnomonia iliau, Gnomonia leptostyla, Gnomonia nerviseda, Gnomonia rubi, Golovinomyces cichoracearum var. latisporus, Granulobasidium vellereum, Graphiola phoenicis, Graphium rigidum, Graphium rubrum, Graphyllium pentamerum, Grovesinia pyramidalis, Guignardia bidwellii f. muscadinii, Guignardia camelliae, Guignardia citricarpa, Guignardia mangiferae, Guignardia musae, Guignardia philoprina, Gummosis, Gymnoconia nitens, Gymnopus dryophilus, Gymnosporangium clavipes, Gymnosporangium sabinae, Gymnosporangium globosum, Gymnosporangium juniperi-virginianae, Gymnosporangium kernianum, Gymnosporangium nelsonii, Gymnosporangium yamadae, Haematonectria haematococca, Hansenula subpelliculosa, Hapalosphaeria deformans, Haplobasidion musae, Haustorium, Helicobasidium compactum, Helicobasidium longisporum, Helicobasidium purpureum, Helicoma muelleri, Helicotylenchus, Helicotylenchus dihystera, Helicotylenchus multicinctus, Helminthosporium cookei, Helminthosporium papulosum, Helminthosporium solani, Helotiales, Hemicriconemoides kanayaensis, Hemicriconemoides mangiferae, Hemicycliophora arenaria, Hemlock woolly adelgid, Hendersonia creberrima, Hendersonia theicola, Hericium coralloides, Heterobasidion annosum, Heterodera, Heterodera amygdali, Heterodera arenaria, Heterodera aucklandica, Heterodera avenae, Heterodera bergeniae, Heterodera bifenestra, Heterodera cacti, Heterodera cajani, Heterodera canadensis, Heterodera cardiolata, Heterodera carotae, Heterodera ciceri, Heterodera cruciferae, Heterodera delvii, Heterodera elachista, Heterodera filipjevi, Heterodera gambiensis, Heterodera goettingiana, Heterodera hordecalis, Heterodera humuli, Heterodera latipons, Heterodera medicaginis, Heterodera oryzae, Heterodera oryzicola, Heterodera rosii, Heterodera sacchari, Heterodera schachtii, Heterodera tabacum, Heterodera trifolii, Heteroderidae, Hexagonia hydnoides, Hirschmanniella oryzae, Hoplalaimus galeatus, Hoplolaimidae, Hoplolaimus columbus, Hoplolaimus indicus, Hoplolaimus magnistylus, Hoplolaimus pararobustus, Hoplolaimus seinhorsti, Hoplolaimus uniformis, Huanglongbing, Hyaloperonospora, Hyaloperonospora arabidopsidis, Hyaloperonospora brassicae, Hyaloperonospora parasitica, Hymenula afftnis, Hyphodermella corrugata, Hyphodontia aspera, Hyphodontia sambuci, Hypochnus, Hypoxylon tinctor, Idriella lunata, Inonotus arizonicus, Inonotus cuticularis, Inonotus dryophilus, Inonotus hispidus, Inonotus ludovicianus, Inonotus munzii, Inonotus tamaricis, Irenopsis, Irpex destruens, Irpex lacteus, Isariopsis clavispora, Johncouchia mangiferae, Kabatiella caulivora, Kabatiella lini, Karnal bunt, Khuskia oryzae, Kretzschmaria deusta, Kretzschmaria zonata, Kuehneola uredinis, Kutilakesa pironii, Labrella coryli, Laeticorticium roseum, Laetiporus baudonii, Lagenocystis radicicola, Laricifomes officinalis, Lasiodiplodia theobromae, Leandria momordicae, Leifsonia xyli xyli, Lentinus tigrinus, Lenzites betulina, Lenzites elegans, Lepteutypa cupressi, Leptodontidium elatius var. elatius, Leptographium microsporum, Leptosphaeria acuta, Leptosphaeria cannabina, Leptosphaeria coniothyrium, Leptosphaeria libanotis, Leptosphaeria lindquistii, Leptosphaeria maculans, Leptosphaeria musarum, Leptosphaeria pratensis, Leptosphaeria sacchari, Leptosphaeria woroninii, Leptosphaerulina crassiasca, Leptosphaerulina trifolii, Leptothyrium nervisedum, Leptotrochila medicaginis, Leucocytospora leucostoma, Leucostoma auerswaldii, Leucostoma kunzei, Leucostoma persoonii, Leveillula compositarum f. helianthi, Leveillula leguminosarum f. lentis, Leveillula taurica, Ligniera pilorum, Limacinula tenuis, Linochora graminis, Longidorus africanus, Longidorus maximus, Longidorus sylphus, Lopharia crassa, Lophodermium, Lophodermium aucupariae, Lophodermium schweinitzii, Lophodermium seditiosum, Macrophoma mangiferae, Macrophoma theicola, Macrophomina phaseolina, Macrosporium cocos, Magnaporthe, Magnaporthe grisea, Magnaporthe salvinii, Mamianiella coryli, Marasmiellus cocophilus, Marasmiellus inoderma, Marasmiellus scandens, Marasmiellus stenophyllus, Marasmius crinisequi, Marasmius sacchari, Marasmius semiustus, Marasmius stenophyllus, Marasmius tenuissimus, Massarina walkeri, Mauginiella scaettae, Melampsora, Melampsora lini var. lini, Melampsora medusae, Melampsora occidentalis, Melanconis carthusiana, Melanconium juglandinum, Meliola, Meliola mangiferae, Meliolaceae, Meloidogyne acronea, Meloidogyne arenaria, Meloidogyne artiellia, Meloidogyne brevicauda, Meloidogyne chitwoodi, Meloidogyne enterolobii, Meloidogyne fruglia, Meloidogyne gajuscus, Meloidogyne incognita, Meloidogyne javanica, Meloidogyne naasi, Meloidogyne partityla, Meloidogyne thamesi, Meripilus giganteus, Merlinius brevidens, Meruliopsis ambigua, Mesocriconema xenoplax, Microascus brevicaulis, Microbotryum violaceum, Microdochium bolleyi, Microdochium dimerum, Microdochium panattonianum, Microdochium phragmitis, Microsphaera, Microsphaera coryli, Microsphaera diffusa, Microsphaera ellisii, Microsphaera euphorbiae, Microsphaera hommae, Microsphaera penicillata, Microsphaera penicillata var. vaccinii, Microsphaera vaccinii, Microsphaera verruculosa, Microstroma juglandis, Moesziomyces bullatus, Monilinia azaleae, Monilinia fructicola, Monilinia fructigena, Monilinia laxa, Monilinia mali, Moniliophthora perniciosa, Moniliophthora roreri, Monilochaetes infuscans, Monochaetia coryli, Monochaetia mali, Monographella albescens, Monographella cucumerina, Monographella nivalis var. neglecta, Monographella nivalis var. nivalis, Mononegavirales, Monosporascus cannonballus, Monosporascus eutypoides, Monostichella coryli, Mucor circinelloides, Mucor hiemalis, Mucor hiemalis f. silvaticus, Mucor mucedo, Mucor paronychius, Mucor piriformis, Mucor racemosus, Mycena citricolor, Mycena maculate, Mycocentrospora acerina, Mycoleptodiscus terrestris, Mycosphaerella angulata, Mycosphaerella arachidis, Mycosphaerella areola, Mycosphaerella berkeleyi, Mycosphaerella bolleana, Mycosphaerella brassicicola, Mycosphaerella caricae, Mycosphaerella caryigena, Mycosphaerella cerasella, Mycosphaerella citri, Mycosphaerella coffeicola, Mycosphaerella confusa, Mycosphaerella cruenta, Mycosphaerella dendroides, Mycosphaerella eumusae, Mycosphaerella fragariae, Mycosphaerella gossypina, Mycosphaerella graminicola, Mycosphaerella henningsii, Mycosphaerella horii, Mycosphaerella juglandis, Mycosphaerella lageniformis, Mycosphaerella linicola, Mycosphaerella louisianae, Mycosphaerella musae, Mycosphaerella musicola, Mycosphaerella palmicola, Mycosphaerella pinodes, Mycosphaerella pistaciarum, Mycosphaerella pistacina, Mycosphaerella platanifolia, Mycosphaerella polymorpha, Mycosphaerella pomi, Mycosphaerella punctiformis, Mycosphaerella pyri, Didymella rabiei, Mycosphaerella recutita, Mycosphaerella rosicola, Mycosphaerella rubi, Mycosphaerella stigmina-platani, Mycosphaerella striatiformans, Mycovellosiella concors, Mycovellosiella fulva, Mycovellosiella koepkei, Mycovellosiella vaginae, Myriogenospora aciculispora, Myrothecium roridum, Myrothecium verrucaria, Nacobbus aberrans, Nacobbus dorsalis, Naevala perexigua, Naohidemyces vaccinii, Nectria, Nectria cinnabarina, Nectria coccinea, Nectria ditissima, ectria foliicola, Nectria mammoidea var. rubi, Nectria mauritiicola, Nectria peziza, Nectria pseudotrichia, Nectria radicicola, Nectria ramulariae, Nectriella pironii, Nemania diffusa, Nemania serpens var. serpens, Nematospora coryli, Neocosmospora vasinfecta, Neodeightonia phoenicum, Neoerysiphe, Neofabraea malicorticis, Neofabraea perennans, Neofusicoccum mangiferae, Neonectria galligena, Oidiopsis gossypii, Oidium (род), Oidium arachidis, Oidium caricae-papayae, Oidium indicum, Oidium mangiferae, Oidium manihotis, Oidium tingitaninum, Olpidium brassicae, Omphalia tralucida, Oncobasidium theobromae, Onnia tomentosa, Ophiobolus anguillides, Ophiobolus cannabinus, Ophioirenina, Ophiostoma ulmi, Ophiostoma wageneri, Ovulariopsis papayae, Ovulinia azaleae, Ovulitis azaleae, Oxyporus corticola, Oxyporus latemarginatus, Oxyporus populinus, Oxyporus similis, Ozonium texanum var. parasiticum, Paecilomyces fulvus, Paralongidorus maximus, Paratrichodorus christiei, Paratrichodorus minor, Paratylenchus curvitatus, Paratylenchus elachistus, Paratylenchus hamatus, Paratylenchus macrophallus, Paratylenchus microdorus, Paratylenchus projectus, Paratylenchus tenuicaudatus, Pathovar, Pauahia, Peach latent mosaic viroid, Pectobacterium carotovorum, Peltaster fructicola, Penicillium aurantiogriseum, Penicillium digitatum, Penicillium expansum, Penicillium funiculosum, Penicillium glabrum, Penicillium italicum, Penicillium purpurogenum, Penicillium ulaiense, Peniophora, Peniophora albobadia, Peniophora cinerea, Peniophora quercina, Peniophora sacrata, Perenniporia fraxinea, Perenniporia fraxinophila, Perenniporia medulla-panis, Perenniporia subacida, Periconia circinata, Periconiella cocoes, Peridermium californicum, Peronosclerospora miscanthi, Peronosclerospora sacchari, Peronosclerospora sorghi, Peronospora, Peronospora anemones, Peronospora antirrhini, Peronospora arborescens, Peronospora conglomerata, Peronospora destructor, Peronospora dianthi, Peronospora dianthicola, Peronospora farinosa, Peronospora farinosa f. sp. betae, Peronospora hyoscyami f. sp. tabacina, Peronospora manshurica, Peronospora potentillae, Peronospora sparsa, Peronospora trifoliorum, Peronospora valerianellae, Peronospora viciae, Pestalosphaeriaconcentrica, Pestalotia longiseta, Pestalotia longisetula, Pestalotia rhododendri, Pestalotiopsis, Pestalotiopsis adusta, Pestalotiopsis arachidis, Pestalotiopsis disseminata, Pestalotiopsis guepini, Pestalotiopsis leprogena, Pestalotiopsis longiseta, Pestalotiopsis mangiferae, Pestalotiopsis palmarum, Pestalotiopsis sydowiana, Pestalotiopsis theae, Pestalotiopsis versicolor, Phacidiopycnis padwickii, Phacidium infestans, Phaeochoropsis mucosa, Phaeocytostroma iliau, Phaeocytostroma sacchari, Phaeoisariopsis bataticola, Phaeolus schweinitzii, Phaeoramularia angolensis, Phaeoramularia dissiliens, Phaeoramularia heterospora, Phaeoramularia manihotis, Phaeoseptoria musae, Phaeosphaerella mangiferae, Phaeosphaerella theae, Phaeosphaeria avenaria f. sp.avenaria, Phaeosphaeria avenaria f. sp.triticae, Phaeosphaeria herpotrichoides, Phaeosphaeria microscopica, Phaeosphaeria nodorum, Phaeosphaeriopsis obtusispora, Phaeotrichoconis crotalariae, Phakopsora gossypii, Phakopsora pachyrhizi, Phanerochaete allantospora, Phanerochaete arizonica, Phanerochaete avellanea, Phanerochaete burtii, Phanerochaete carnosa, Phanerochaete chrysorhizon, Phanerochaete radicata, Phanerochaete salmonicolor, Phanerochaete tuberculata, Phanerochaete velutina, Phellinus ferreus, Phellinus gilvus, Phellinus igniarius, Phellinus pini, Phellinus pomaceus, Phellinus weirii, Phialophora asteris, Phialophora cinerescens, Phialophora gregata, Phialophora tracheiphila, Phloeospora multimaculans, Pholiota variicystis, Phoma, Phoma caricae-papayae, Phoma clematidina, Phoma costaricensis, Phoma cucurbitacearum, Phoma destructiva, Phoma draconis, Phoma eupyrena, Phoma exigua, Phoma exigua var. exigua, Phoma exigua var. foveata, Phoma exigua var. linicola, Phoma glomerata, Phoma glycinicola, Phoma herbarum, Phoma insidiosa, Phoma medicaginis, Phoma microspora, Phoma nebulosa, Phoma oncidii-sphacelati, Phoma pinodella, Phoma scabra, Phoma sclerotioides, Phoma strasseri, Phoma tracheiphila, Phomopsis arnoldiae, Phomopsis asparagi, Phomopsis asparagicola, Phomopsis azadirachtae, Phomopsis cannabina, Phomopsis caricae-papayae, Phomopsis coffeae, Phomopsis elaeagni, Phomopsis ganjae, Phomopsis javanica, Phomopsis lokoyae, Phomopsis mangiferae, Phomopsis obscurans, Phomopsis perseae, Phomopsis prunorum, Phomopsis scabra, Phomopsis sclerotioides, Phomopsis tanakae, Phomopsis theae, Photoassimilate, Phragmidium, Phragmidium mucronatum, Phragmidium rosae-pimpinellifoliae, Phragmidium rubi-idaei, Phragmidium violaceum, Phyllachora cannabis, Phyllachora graminis var. graminis, Phyllachora gratissima, Phyllachora musicola, Phyllachora pomigena, Phyllachora sacchari, Phyllactinia, Phyllactinia angulata, Phyllactinia guttata, Phyllody, Phyllosticta, Phyllosticta alliariaefoliae, Phyllosticta anacardiacearum, Phyllosticta arachidis-hypogaeae, Phyllosticta batatas, Phyllosticta capitalensis, Phyllosticta caricae-papayae, Phyllosticta carpogena, Phyllosticta circumscissa, Phyllosticta coffeicola, Phyllosticta concentrica, Phyllosticta coryli, Phyllosticta cucurbitacearum, Phyllosticta cyclaminella, Phyllosticta erratica, Phyllosticta hawaiiensis, Phyllosticta lentisci, Phyllosticta manihotis, Phyllosticta micropuncta, Phyllosticta mortonii, Phyllosticta nicotianae, Phyllosticta palmetto, Phyllosticta penicillariae, Phyllosticta perseae, Phyllosticta platani, Phyllosticta pseudocapsici, Phyllosticta sojaecola, Phyllosticta solitaria, Phyllosticta theae, Phyllosticta theicola, Phymatotrichopsis omnivora, Physalospora abdita, Physalospora disrupta, Physalospora perseae, Physarum cinereum, Physoderma alfalfae, Physoderma leproides, Physoderma trifolii, Physopella ampelopsidis, Phytophthora, Phytophthora alni, Phytophthora boehmeriae, Phytophthora cactorum, Phytophthora cajani, Phytophthora cambivora, Phytophthora capsici, Phytophthora cinnamomi, Phytophthora citricola, Phytophthora citrophthora, Phytophthora cryptogea, Phytophthora drechsleri, Phytophthora erythroseptica, Phytophthora fragariae, Phytophthora fragariae var. rubi, Phytophthora gallica, Phytophthora hibernalis, Phytophthora infestans, Phytophthora inflata, Phytophthora iranica, Phytophthora katsurae, Phytophthora kernoviae, Phytophthora lateralis, Phytophthora medicaginis, Phytophthora megakarya, Phytophthora megasperma, Phytophthora nicotianae, Phytophthora palmivora, Phytophthora phaseoli, Phytophthora plurivora, Phytophthora ramorum, Phytophthora sojae, Phytophthora syringae, Phytophthora tentaculata, Phytoplasma, Pichia membranifaciens, Pichia subpelliculosa, Pileolaria terebinthi, Pilidiella quercicola, Plasmodiophora brassicae, Plasmopara, Plasmopara halstedii, Plasmopara helianthi f. helianthi, Plasmopara lactucae-radicis, Plasmopara nivea, Plasmopara obducens, Plasmopara penniseti, Plasmopara pygmaea, Plasmopara viticola, Platychora ulmi, Plenodomus destruens, Plenodomus meliloti, Pleochaeta, Pleosphaerulina sojicola, Pleospora alfalfae, Pleospora betae, Pleospora herbarum, Pleospora lycopersici, Pleospora tarda, Pleospora theae, Pleurotus dryinus, Podosphaera, Podosphaera clandestina var. clandestine, Podosphaera fusca, Podosphaera leucotricha, Podosphaera macularis, Podosphaera pannosa, Podosphaera tridactyla, Podosphaera tridactyla var. tridactyla, Podosphaera xanthii, Polymyxa graminis, Polyscytalum pustulans, Polystigma fulvum, Poria hypobrunnea, Postia tephroleuca, Potato cyst nematode, Pratylenchus alleni, Pratylenchus brachyurus, Pratylenchus coffeae, Pratylenchus crenatus, Pratylenchus dulscus, Pratylenchus fallax, Pratylenchus flakkensis, Pratylenchus goodeyi, Pratylenchus hexincisus, Pratylenchus loosi, Pratylenchus minutus, Pratylenchus mulchandi, Pratylenchus musicola, Pratylenchus neglectus, Pratylenchus penetrans, Pratylenchus pratensis, Pratylenchus reniformia, Pratylenchus scribneri, Pratylenchus thornei, Pratylenchus vulnus, Pratylenchus zeae, Pseudocercospora, Pseudocercospora arecacearum, Pseudocercospora cannabina, Pseudocercospora fuligena, Pseudocercospora gunnerae, Pseudocercospora kaki, Pseudocercospora mali, Pseudocercospora pandoreae, Pseudocercospora puderi, Pseudocercospora purpurea, Pseudocercospora rhapisicola, Pseudocercospora subsessilis, Pseudocercospora theae, Pseudocercospora vitis, Pseudocercosporella capsellae, Pseudocochliobolus eragrostidis, Pseudoepicoccum cocos, Pseudomonas amygdali, Pseudomonas asplenii, Pseudomonas avellanae, Pseudomonas caricapapayae, Pseudomonas cichorii, Pseudomonas coronafaciens, Pseudomonas corrugate, Pseudomonas ficuserectae, Pseudomonas flavescens, Pseudomonas fuscovaginae, Pseudomonas helianthi, Pseudomonas marginalis, Pseudomonas meliae, Pseudomonas oryzihabitans, Pseudomonas palleroniana, Pseudomonas papaveris, Pseudomonas salomonii, Pseudomonas savastanoi, Pseudomonas syringae, Pseudomonas tomato, Pseudomonas tremae, Pseudomonas turbinellae, Pseudomonas viridiflava, Pseudoperonospora cannabina, Pseudoperonospora cubensis, Pseudoperonospora humuli, Pseudopezicula tetraspora, Pseudopezicula tracheiphila, Pseudopeziza jonesii, Pseudopeziza medicaginis, Pseudopeziza trifolii, Pseudoseptoria donacis, Puccinia, Puccinia angustata, Puccinia arachidis, Puccinia aristidae, Puccinia asparagi, Puccinia cacabata, Puccinia campanulae, Puccinia carthami, Puccinia coronate, Puccinia coronata var. hordei, Puccinia dioicae, Puccinia erianthi, Puccinia extensicola var. hieraciata, Puccinia helianthi, Puccinia hordei, Puccinia jaceae var. solstitialis, Puccinia kuehnii, Puccinia mariae-wilsoniae, Puccinia melanocephala, Puccinia menthae, Puccinia pelargonii-zonalis, Puccinia pittieriana, Puccinia poarum, Puccinia psidii, Puccinia purpurea, Puccinia recondita, Puccinia schedonnardii, Puccinia sessilis, Puccinia striiformis f. sp.hordei, Puccinia striiformis var. striiformis, Puccinia subnitens, Puccinia substriata var. indica, Puccinia verruca, Puccinia xanthii, Pucciniaceae, Pucciniastrum, Pucciniastrum americanum, Pucciniastrum arcticum, Pucciniastrum coryli, Pucciniastrum epilobii, Pucciniastrum hydrangeae, Punctodera chalcoensis, Pycnoporus cinnabarinus, Pycnoporus sanguineus, Pycnostysanus azaleae, Pyrenochaeta lycopersici, Pyrenochaeta terrestris, Pyrenopeziza brassicae, Pyrenophora, Pyrenophora avenae, Pyrenophora chaetomioides, Pyrenophora graminea, Pyrenophora seminiperda, Pyrenophora teres, Pyrenophora teres f. maculata, Pyrenophora teres f. teres, Pyrenophora tritici-repentis, Pythiaceae, Pythiales, Pythium, Pythium acanthicum, Pythium aphanidermatum, Pythium aristosporum, Pythium arrhenomanes, Pythium buismaniae, Pythium debaryanum, Pythium deliense, Pythium dissotocum, Pythium graminicola, Pythium heterothallicum, Pythium hypogynum, Pythium irregulare, Pythium iwayamae, Pythium mastophorum, Pythium middletonii, Pythium myriotylum, Pythium okanoganense, Pythium paddicum, Pythium paroecandrum, Pythium perniciosum, Pythium rostratum, Pythium scleroteichum, Pythium spinosum, Pythium splendens, Pythium sulcatum, Pythium sylvaticum, Pythium tardicrescens, Pythium tracheiphilum, Pythium ultimum, Pythium ultimum var. ultimum, Pythium vexans, Pythium violae, Pythium volutum, Quinisulcius acutus, Quinisulcius capitatus, Radopholous similis, Radopholus similis, Ralstonia solanacearum, Ramichloridium musae, Ramularia, Ramularia beticola, Ramularia brunnea, Ramularia coryli, Ramularia cyclaminicola, Ramularia macrospora, Ramularia menthicola, Ramularia necator, Ramularia primulae, Ramularia spinaciae, Ramularia subtilis, Ramularia tenella, Ramulispora sorghi, Ramulispora sorghicola, Resinicium bicolor, Rhabdocline pseudotsugae, Rhabdocline weirii Rhabdoviridae, Rhinocladium corticola, Rhizoctonia, Rhizoctonia leguminicola, Rhizoctonia rubi, Rhizoctonia solani, Rhizomorpha subcorticalis, Rhizophydium graminis, Rhizopus arrhizus, Rhizopus circinans, Rhizopus microsporus var. microspores, Rhizopus oryzae, Rhodococcus fascians, Rhynchosporium, Rhynchosporium secalis, Rhytidhysteron rufulum, Rhytisma acerinum, Rhytisma vitis, Rigidoporus lineatus, Rigidoporus microporus, Rigidoporus ulmarius, Rigidoporus vinctus, Rosellinia arcuata, Rosellinia bunodes, Rosellinia necatrix, Rosellinia pepo, Rosellinia subiculata, Rotylenchulus, Rotylenchulus parvus, Rotylenchulus reniformis, Rotylenchus brachyurus, Rotylenchus robustus, Saccharicola taiwanensis, Saccharomyces florentinus, Saccharomyces kluyveri, Sarocladium oryzae, Sawadaea, Sawadaea tulasnei, Schiffnerula cannabis, Schizoparme straminea, Schizophyllum commune, Schizopora flavipora, Schizothyrium pomi, Scleroderris canker, Sclerophthora macrospora, Sclerophthora rayssiae, Sclerospora graminicola, Sclerospora mischanthi, Sclerotinia borealis, Sclerotinia minor, Sclerotinia ricini, Sclerotinia sclerotiorum, Sclerotinia spermophila, Sclerotinia trifoliorum, Sclerotium, Sclerotium cinnamomi, Sclerotium delphinii, Scutellonema brachyurum, Scutellonema cavenessi, Scytinostroma galactinum, Seimatosporium mariae, Seimatosporium rhododendri, Selenophoma linicola, Septobasidium, Septobasidium bogoriense, Septobasidium pilosum, Septobasidium pseudopedicellatum, Septobasidium theae, Septocyta ruborum, Septogloeum potentillae, Septoria, Septoria aciculosa, Septoria ampelina, Septoria azalea, Septoria bataticola, Septoria campanulae, Septoria cannabis, Septoria caryae, Septoria citri, Septoria cucurbitacearum, Septoria darrowii, Septoria dianthi, Septoria eumusae, Septoria fragariae, Septoria fragariaecola, Septoria glycines, Septoria helianthi, Septoria humuli, Septoria hydrangeae, Septoria lactucae, Septoria liquidambaris, Septoria lycopersici, Septoria lycopersici var. malagutii, Septoria menthae, Septoria ostryae, Septoria passerinii, Septoria pisi, Septoria pistaciae, Septoria platanifolia, Septoria rhododendri, Septoria secalis, Septoria selenophomoides, Setosphaeria rostrata, Setosphaeria turcica, Sirosporium diffusum, Sparassis, Sphaceloma, Sphaceloma arachidis, Sphaceloma coryli, Sphaceloma menthae, Sphaceloma perseae, Sphaceloma poinsettiae, Sphaceloma pyrinum, Sphaceloma randii, Sphaceloma sacchari, Sphaceloma theae, Sphacelotheca reiliana, Sphaerella platanifolia, Sphaeropsis tumefaciens, Sphaerotheca, Sphaerotheca castagnei, Sphaerotheca fuliginea, Sphaerulina oryzina, Sphaerulina rehmiana, Sphaerulina rubi, Sphenospora kevorkianii, Spiniger meineckellus, Spiroplasma, Spongipellis unicolor, Sporisorium cruentum, Sporisorium ehrenbergi, Sporisorium scitamineum, Sporisorium sorghi, Sporonema phacidioides, Stagonospora avenae f. sp.triticae, Stagonospora meliloti, Stagonospora recedens, Stagonospora sacchari, Stagonospora tainanensis, Steccherinum ochraceum, Stegocintractia junci, Stegophora ulmea, Stemphylium alfalfa, Stemphylium bolickii, Stemphylium cannabinum, Stemphylium globuliferum, Stemphylium lycopersici, Stemphylium sarciniforme, Stemphylium solani, Stemphylium vesicarium, Stenella anthuriicola, Stereum, Stereum hirsutum, Stereum rameale, Stereum sanguinolentum, Stigmatomycosis, Stigmella platani-racemosae, Stigmina carpophila, Stigmina liquidambaris, Stigmina palmivora, Stigmina platani, Stigmina platani-racemosae, Subanguina radicicola, Subanguina wevelli, Sydowia polyspora, Sydowiella depressula, Sydowiellaceae, Synchytrium endobioticum, Synchytrium fragariae, Synchytrium liquidambaris, Taiwanofungus camphoratus, Tapesia acuformis, Tapesia yallundae, Taphrina aurea, Taphrina bullata, Taphrina caerulescens, Taphrina coryli, Taphrina deformans, Taphrina entomospora, Taphrina johansonii, Taphrina potentillae, Taphrina ulmi, Taphrina wiesneri, Thanatephorus cucumeris, Thielaviopsis, Thielaviopsis basicola, Thyrostroma compactum, Tilletia barclayana, Tilletia caries, Tilletia controversa, Tilletia laevis, Tilletia tritici, Tilletia walkeri, Tilletiariaceae, Tobacco necrosis virus, Togniniaceae, Trachysphaera fructigena, Trametes gibbosa, Trametes hirsute, Trametes nivosa, Trametes pubescens, Tranzschelia discolor f. sp.persica, Tranzschelia pruni-spinosae var. discolor, Trichaptum biforme, Trichoderma harzianum, Trichoderma koningii, Trichoderma viride, Trichothecium roseum, Tripospermum acerinum, Truncatella, Truncatella laurocerasi, Tubercularia lateritia, Tubercularia ulmea, Tubeufia pezizula, Tunstallia aculeata, Tylenchorhynchus, Tylenchorhynchus brevilineatus, Tylenchorhynchus claytoni, Tylenchorhynchus dubius, Tylenchorhynchus maximus, Tylenchorhynchus nudus, Tylenchorhynchus phaseoli, Tylenchorhynchus vulgaris, Tylenchorhynchus zeae, Tylenchulus semipenetrans, Typhula idahoensis, Typhula incarnate, Typhula ishikariensis, Typhula ishikariensis var. canadensis, Typhula variabilis, Typhulochaeta, Tyromyces calkinsii, Tyromyces chioneus, Tyromyces galactinus, Ulocladium atrum, Ulocladium consortiale, Uncinula, Uncinula macrospora, Uncinula necator, Uredo behnickiana, Uredo kriegeriana, Uredo musae, Uredo nigropuncta, Uredo rangelii, Urocystis, Urocystis agropyri, Urocystis brassicae, Urocystis occulta, Uromyces, Uromyces apiosporus, Uromyces beticola, Uromyces ciceris-arietini, Uromyces dianthi, Uromyces euphorbiae, Uromyces graminis, Uromyces inconspicuus, Uromyces lineolatus subsp.nearcticus, Uromyces medicaginis, Uromyces musae, Uromyces oblongus, Uromyces pisi-sativi, Uromyces proeminens var. poinsettiae, Uromyces trifolii-repentis var. fallens, Uromyces viciae-fabae var. viciae-fabae, Urophlyctis leproides, Urophlyctis trifolii, Urophora cardui, Ustilaginales, Ustilaginoidea virens, Ustilaginomycetes, Ustilago, Ustilago avenae, Ustilago hordei, Ustilago maydis, Ustilago nigra, Ustilago nuda, Ustilago scitaminea, Ustilago tritici, Valsa abietis, Valsa ambiens, Valsa auerswaldii, Valsa ceratosperma, Valsa kunzei, Valsa nivea, Valsa sordida, Valsaria insitiva, Venturia carpophila, Venturia inaequalis, Venturia pirina, Venturia pyrina, Veronaea musae, Verticillium, Verticillium albo-atrum, Verticillium albo-atrum var. menthae, Verticillium dahliae, Verticillium longisporum, Verticillium theobromae, Villosiclava virens, Virescence, Waitea circinata, Wuestneiopsis Georgiana, Xanthomonas ampelina, Xanthomonas axonopodis, Xanthomonas campestris, Xanthomonas campestris pv. campestris, Xanthomonas oryzae, Xeromphalina fraxinophila, Xiphinema americanum, Xiphinema bakeri, Xiphinema brevicolle, Xiphinema diversicaudatum, Xiphinema insigne, Xiphinema rivesi, Xiphinema vuittenezi, Xylaria mali, Xylaria polymorpha, Xylella fastidiosa, Xylophilus, Xylophilus ampelinus, Zopfia rhizophila, Zygosaccharomyces bailii и Zygosaccharomyces florentinus.
[00118] Патогенные насекомые и черви включают Acalymma, Acyrthosiphon pisum, Spodoptera exempta, африканизированную пчелу, Agromyzidae, Agrotis munda, Agrotis porphyricollis, Aleurocanthus woglumi, Aleyrodes proletella, Alphitobius diaperinus, Altica chalybea, Anasa tristis, Anguina tritici, Anisoplia austriaca, Anthonomus pomorum, Anthonomus signatus, Aonidiella aurantii, Apamea apamiformis, Apamea niveivenosa, Aphelenchoides spp., тлю, Aphis gossypii, яблонную пестрокрылку, аргентинского муравья, Euxoa auxiliaris, Arotrophora arcuatalis, Asterolecanium coffeae, Athous haemorrhoidalis, Aulacophora, Chortoicetes terminifera Bactericera cockerelli, Bactrocera, Bactrocera correcta, Bagrada hilaris, Knulliana cincta, карадрину, Belonolaimus spp., свекловичную тлю, Blepharidopterus chlorionis, Agrotis infusa, хлопкового долгоносика, Bradysia similigibbosa, стручкового капустного комарика, Brevicoryne brassicae, коричневую саранчу, клопа мраморного щитника, бурую рисовую цикадку, Bursephelenchus spp., капустную совку, купустную гусеницу, Callosobruchus maculatus, Dermolepida albohirtum, морковную муху, овсяную нематоду, Cecidomyiidae, Ceratitis capitata, Ceratitis rosa, пьявицу красногрудую, Chlorops pumilionis, Anoplophora chinensis, Coccus viridis, яблонную плодожорку, кофейного жука, коллорадского жука, хрущака малого мучного, Crambus, полосатого огуречного жука, Curculio писит, Curculio occidentis, личинок моли, Cyclocephala borealis, совку-ипсилон, пальмового короеда, Delia spp., Delia antiqua, Delia floralis, Delia radicum, пустынную саранчу, Diabrotica, Diabrotica balteata, Diabrotica speciosa, капустную моль, Diaphania indica, Diaphania nitidalis, Diaphorina citri, Diaprepes abbreviatus, Diatraea saccharalis, Melanoplus differentialis, Ditylenchus spp., Dociostaurus maroccanus, Drosophila suzukii, Dryocosmus kuriphilus, Earias perhuegeli, Epicauta vittata, Epilachna varivestis, Erionota thrax, Eriosomatinae, Euleia heraclei, Eumetopina flavipes, Eupoecilia ambiguella, огневку кукурузную, Eurydema oleracea, Eurygaster integriceps, щитника красноногого, Frankliniella tritici, Galleria mellonella, Euxoa nigricans, Homalodisca vitripennis, тепличную белокрылку, Gryllotalpa orientalis, Gryllus pennsylvanicus, непарного шелкопряда, Helicoverpa armigera, Helicoverpa gelotopoeon, Helicoverpa punctigera, Helicoverpa zea, Heliothis virescens, Henosepilachna vigintioctopunctata, гессенскую муху, Heterodera spp., Jacobiasca formosana, хруща японского, кожееда зернового, Lampides boeticus, листового минера, Lepidiota consobrina, Lepidosaphes beckii, Lepidosaphes ulmi, Leptoglossus zonatus, Leptopterna dolabrata, малую восковую моль, Leucoptera (моль), Leucoptera caffeina, бурую плодовую моль, Lissorhoptrus oryzophilus, длиннохвостого шкипера, Lygus, Lygus hesperus, Maconellicoccus hirsutus, Macrodactylus subspinosus, Macrosiphum euphorbiae, долгоносика амбарного кукурузного, Manduca sexta, Mayetiola hordei, Mealybug, Meloidogyne spp., Megacopta cribraria, Metcalfa pruinosa, молей, луковую моль, Myzus persicae, Naccobus spp., Nezara viridula, походного шелкопряда дубового, маслинную муху, Ophiomyia simplex, Opisina arenosella, Opomyza, Opomyza florum, Opomyzidae, Oscinella frit, Ostrinia furnacalis, Oxycarenus hyalinipennis, Paracoccus marginatus, Papilio demodocus, Paratachardina pseudolobata, Pentatomoidea, Phthorimaea operculella, Phyllophaga, Phylloxera, Phylloxeridae, Phylloxeroidea, Pieris brassicae, хлопковую моль, Planococcus citri, Platynota idaeusalis, Plum curculio, Pratylenchus spp., Prionus californicus, Pseudococcus viburni, Pyralis farinalis, красного огненного муравья, красную саранчу, корневых нематод Pratylenchus, корневых галлообразующих фитонематод, Radopholus spp., Rotylenchulus spp., Rhagoletis cerasi, Rhagoletis indifferens, Rhagoletis mendax, Rhopalosiphum maidis, Rhyacionia frustrana, Rhynchophorus ferrugineus, Rhynchophorus palmarum, Rhyzopertha, рисовую моль, рисового клопа щитника, ячменную тлю, калифорнийскую щитовку, щитовок, Schistocerca americana, Sciaridae, Scirtothrips dorsalis, Scutelleridae, Scutiphora pedicellata, пшеничную нематоду, змеевидного листового минера, табачную белокрылку, Sipha flava, малого ульевого жука, огневку кукурузную юго-западную, соевую тлю, Spodoptera cilium, Spodoptera litura, пятнистого огуречного жука, Melittia cucurbitae, стеблевых нематод, Stenotus binotatus, Strauzia longipennis, блошку полосатую, клопа вредную черепашку, Physomerus grossipes, клопа-слепняка, трипсы, Thrips angusticeps, Thrips palmi, Toxoptera citricida, Trichodorus spp., Trioza erytreae, совку озимую, Tuta absoluta, Tylenchulus spp., кожееда домового, Virachola isocrates, личинок восковых молей, западного кукурузного жука, западного цветочного трипса, пшеничного комарика, долгоносика амбарного обыкновенного, белокрылок, зимнюю пяденицу и Xiphenema spp.
[00119] Например, патогенное насекомое или червь может представлять собой совку, совку-ипсилон, кукурузного мотылька, совку травяную, гусеницу озимой совки, хрущика японского, огневку Elasmopalpus lignosellus, долгоносика кукурузного, личинку мухи ростковой, лугового мотылька, огневку кукурузную стеблевую, жука-блошку одиннадцатиточечную, южного картофельного проволочника, совку Papaipema nebris, жука-носорога сахарного тростника, личинку хруща, совку ни, хлопкового долгоносика, совку Spodoptera ornithogalli, пьявицу красногрудую, клопа-черепашку пшеничную североамериканскую, тлю, совку малую, коровку Epilachna varivestis, совку Chrysodeixis includens, Dectes texanus или их комбинацию.
Белки и пептиды, которые повышают устойчивость к стрессу в растениях
[00120] Данное изобретение также относится к гибридным белкам, содержащим сигнальную последовательность, белок экзоспория или фрагмент белка экзоспория и по меньшей мере один белок или пептид, усиливающий устойчивость к стрессу в растении.
[00121] Например, белок или пептид, который повышает устойчивость к стрессу в растении, включает фермент, вызывающий деградацию соединений, связанных со стрессом. Соединения, связанные со стрессом, включают, но не ограничиваются этим, аминоциклопропан-1-карбоновую кислоту (АЦК), активные формы кислорода, оксид азота, оксилипины, и фенольные соединения. Конкретные активные формы кислорода включают гидроксил, перекись водорода, кислород и супероксид. Фермент, вызывающий деградацию соединений, связанных со стрессом, может включать супероксиддисмутазы, оксидазу, каталазу, в деаминазу аминоциклопропан-1-карбоновой кислоты, пероксидазу, антиоксидантное фермент, или антиоксидантный пептид.
[00122] Белок или пептид, который повышает устойчивость к стрессу в растении, может также содержать белок или пептид, защищающий растение от воздействия окружающей среды. Экологический стресс может включать, например, засуху, наводнение, высокие температуры, заморозки, засаливание, тяжелые металлы, низкое значение рН, высокое значение рН или их комбинацию. Например, белок или пептид, защищающий растение от воздействия окружающей среды, могут содержит белок, индуцирующий формирование микрокристаллов льда, пролиназу, фенилаланин-аммиак-лиазу, изохоризмат-синтазу, изохоризмат-пируват-лиазу или холиндегидрогеназу.
Белки и пептиды, связывающиеся с растением
[00123] Изобретение также относится к гибридным белкам, содержащим сигнальную последовательность, белок экзоспория или фрагмент белка экзоспория и по меньшей один белок или пептид, связывающийся с растением. Белок или пептид, связывающийся с растением, может представлять собой любой белок или пептид, способный специфически или неспецифически связываться с любой частью растения (например, с корнем или с надземной частью растения, такой как лист, стебель, цветок или плод) или с растительным материалом. Так, например, белок или пептид, связывающийся с растением, может представлять собой белок или пептид, связывающийся с корнем, или белок, или пептид, связывающийся с листом.
[00124] Подходящие белки или пептиды, связывающиеся с растением, включают адгезины, флагеллины (например, рикфлагелин), омптины, лектины, экспансины, структурные белки биопленки (например, TasA или YuaB), белки пилуса, белки Curlus, интимины, инвазины, агглютинины и нефимбриальные белки.
Другие гибридные белки
[00125] Данное изобретение дополнительно относится к гибридным белкам, содержащим по меньшей мере один целевой белок или пептид, и белок экзоспория, содержащий белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую, по меньшей мере 85% идентичности с любой из SEQ ID №№: 71, 75, 80, 81, 82, 83, и 84. В альтернативном варианте белок экзоспория может включать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или по меньшей мере 100% идентичности с любой из SEQ ID №№: 71, 75, 80, 81, 82, 83, и 84.
[00126] Целевой белок или пептид, может включать любой белок или пептид. Например, целевой белок или пептид может включать любой из белков или пептидов, описанных в данном документе. Например, целевой белок или пептид может включать любой из описанных в данном документе белков или пептидов, стимулирующих рост растения, любой из описанных в данном документе белков или пептидов, которые защищают растение от патогена, любой из описанных в данном документе белков или пептидов, которые повышает устойчивость к стрессу в растении, или любой из описанных в данном документе белков или пептидов, связывающихся с растением.
[00127] Таким образом, когда целевой белок или пептид включает белок или пептид, стимулирующий рост растения, белок или пептид, стимулирующий рост растения, может включать пептидный гормон, негормональный пептид или фермент, участвующий в образовании или активации соединения, стимулирующего рост растения. В альтернативном варианте белок или пептид, стимулирующий рост растения, может включать любой из ферментов, разрушающих или модифицирующих бактериальный, грибковый или растительный источник питательных веществ, которые описаны ниже.
Рекомбинантные представители семейства Bacillus cereus, которые экспрессируют гибридные белки
[00128] Данное изобретение также относится к рекомбинантному представителю семейства Bacillus cereus, который экспрессирует гибридный белок. Гибридный белок может представлять собой любой из гибридных белков, описанных выше.
[00129] Рекомбинантный представитель семейства Bacillus cereus может дополнительно экспрессировать два или более любых из гибридных белков, описанных выше. Например, рекомбинантный представитель семейства Bacillus cereus может дополнительно экспрессировать по меньшей мере один гибридный белок, который содержит белок или пептид, связывающийся с растением, вместе с по меньшей мере одним гибридным белком, содержащим белок или пептид, стимулирующий рост растения, по меньшей мере одним гибридным белком, содержащим белок или пептид, защищающий растение от патогена, или по меньшей мере одним белком или пептидом, повышающим устойчивость к стрессу в растении.
[00130] Рекомбинантный представитель семейства Bacillus cereus может включать Bacillus anthracis, Bacillus cereus, Bacillus thuringiensis, Bacillus mycoides, Bacillus pseudomycoides, Bacillus samanii, Bacillus gaemokensis, Bacillus weihenstephensis или их комбинацию. Например, рекомбинантный представитель семейства Bacillus cereus может включать Bacillus cereus, Bacillus thuringiensis, Bacillus pseudomycoides или Bacillus mycoides. В частности, рекомбинантный представитель семейства Bacillus cereus может включать Bacillus thuringiensis или Bacillus mycoides.
[00131] С целью создать рекомбинантного представителя семейства Bacillus cereus, экспрессирующего гибридный белок, любой представитель семейства Bacillus cereus может быть конъюгирован, трансдуцирован или трансформирован вектором, кодирующим гибридный белок, с использованием стандартных способов, известных в данной области техники (например, путем электропорации). После этого бактерии могут быть подвергнуты скринингу для идентификации трансформантов любым способом, известным в данной области техники. Например, если вектор включает ген устойчивости к антибиотику, бактерии могут быть подвергнуты скринингу на устойчивость к антибиотикам. В альтернативном варианте ДНК, кодирующая гибридный белок, может быть интегрирована в хромосомную ДНК хозяина представителя семейства В. cereus. Рекомбинантный представитель семейства Bacillus cereus может быть подвержен условиям, которые вызывают споруляцию. Подходящие условия для индуцирования споруляции известны в данной области техники. Например, рекомбинантный представитель семейства Bacillus cereus может быть высеян на чашки с агаром и инкубирован при температуре около 30°С в течение нескольких дней (например, 3 суток).
[00132] Также соответствующим образом могут быть использованы инактивированные штаммы, нетоксичные штаммы, или генетически модифицированные штаммы любого из вышеперечисленных видов. Например, может быть использован Bacillus thuringiensis, в котором отсутствует токсин Cry. В альтернативном варианте или в дополнение, после получения спор рекомбинантного представителя В. cereus, экспрессирующих гибридный белок, они могут быть инактивированы, чтобы предотвратить дальнейшее прорастание во время использования. Может быть использован любой способ инактивации бактериальных спор, который известен в данной области техники. Подходящие способы включают, без ограничения, термообработку, гамма-облучение, рентгеновское облучение, УФ-А облучение, УФ-Б облучение, химическая обработка (например, обработка глютаровым альдегидом, формальдегидом, перекисью водорода, уксусной кислотой, отбеливателем или их комбинацией) или их комбинацией. В альтернативном варианте могут быть использованы споры, полученные из штаммов нетоксигенных штаммов или генетически или физически инактивированных штаммов.
Рекомбинантные представители семейства Bacillus cereus, обладающие эффектом стимуляции роста растений и/или другими полезными свойствами.
[00133] Многие штаммы представителей семейства Bacillus cereus обладают полезные свойствами. Например, некоторые штаммы обладают эффектом стимуляции роста растений. В таких штаммах может быть экспрессирован любой из гибридных белков, описанных в данном документе.
[00134] Например, рекомбинантный представитель семейства Bacillus cereus может включать штамм бактерий, стимулирующий рост растения.
[00135] Штамм бактерий, стимулирующий рост растения, может включать штамм бактерий, который продуцирует инсектицидный токсин (например, токсин Cry), продуцирует фунгицидное соединение (например, β-1,3-глуканазу, хитозиназу, лутиказу, или их комбинацию), продуцирует нематоцидное соединение (например, токсин Cry), продуцирует бактерицидное соединение, является устойчивым к одному или более антибиотикам, содержит одну или более самостоятельно реплицирующихся плазмид, прикрепляется к корням растений, колонизирует корни растений, формирует биопленки, растворяет питательные вещества, секретирует органические кислоты, или их комбинацию.
[00136] Например, если рекомбинантный представитель семейства Bacillus cereus включает штамм бактерий, стимулирующий рост растения, такой штамм бактерий, стимулирующий рост растения, может включать Bacillus mycoides ВТ 155 (NRRL №В-50921), Bacillus mycoides ЕЕ118 (NRRL № B-50918), Bacillus mycoides EE141 (NRRL № B-50916), Bacillus mycoides BT46-3 (NRRL № B-50922), представителя семейства Bacillus cereus EE 128 (NRRL № B-50917), Bacillus thuringiensis BT013A (NRRL № B-50924) или представителя семейства Bacillus cereus EE349 (NRRL № B-50928). Каждый из этих штаммов был помещен на хранение Службой сельскохозяйственных исследований (ССИ) Министерства сельского хозяйства США (МСХСША) по адресу 1815 North University Street, Peoria, Illinois 61604 U.S.A., 10 марта 2014 года, и идентифицируются по номеру NRRL (Northern Regional Research Laboratory), указанному в скобках.
[00137] Эти штаммы, стимулирующие рост растения, были выделены из ризосфер различных активно растущих растений и были идентифицированы по их последовательности 16S рРНК (указанной в данном документе как SEQ ID №№: 104-110) и с помощью биохимических анализов. Данные штаммы были идентифицированы по меньшей мере до рода с помощью общих биохимических методов и морфологических показателей. Биохимические тесты для подтверждения грам-положительных штаммов, таких как Bacillus, включали выращивание на среде PEA и питательном агаре, микроскопические исследования, выращивание на среде, содержащей 5% и 7,5% NaCl, выращивание при рН 5 и рН 9, выращивание при 42°С и 50°С, способность продуцировать кислоту при ферментации с целлобиозой, лактозой, глицерином, глюкозой, сахарозой, d-маннитом и крахмалом; продуцирование флуоресцентных пигментов; гидролиз желатина; восстановление нитратов; продуцирование каталазы, гидролиз крахмала; оксидативная реакция, продуцирование уреазы и подвижность. Идентификация этих штаммов и демонстрация их стимулирующих эффектов на рост растений описаны далее в примерах, приведенных ниже.
[00138] Например, рекомбинантный представитель семейства Bacillus cereus, включающий штамм бактерий, стимулирующий рост растения, может включать Bacillus mycoides ВТ155, Bacillus mycoides EE141 или Bacillus thuringiensis BT013A. Рекомбинантный представитель семейства Bacillus cereus может экспрессировать любой из гибридных белков, описанных в данном документе, например, гибридный белок, содержащий сигнальную последовательность из SEQ ID №: 60 и негормональный пептидный (например, ингибитор трипсина Кунитца (ИКТ)), фермент участвующий в образовании или активации соединения, индуцирующего рост растений (например, хитозиназа), белок или пептид, связывающийся с растением (например, TasA); белок или пептид, защищающий растение от патогенов (например, TasA), или фермент, который разрушает или изменяет бактериальные, грибковые или растительные источники питательных веществ (например, фосфатазы, такие как PhoA или фитазы, или эндоглюканазы).
Промоторы
[00139] В любом из рекомбинантных представителей семейства Bacillus cereus, описанных в данном документе, гибридный белок может экспрессироваться под контролем промотора, который является родным для сигнальной последовательности белка экзоспория или фрагмента белка экзоспория гибридного белка. Например, если гибридный белок содержит сигнальную последовательность, полученную из В. anthracis Sterne BclA (например, аминокислот 20-35 из SEQ ID №: 1, аминокислот 1-35 из SEQ ID №: 1, SEQ ID №: 1 или SEQ ID №: 60) или если гибридный белок содержит полноразмерный BclA (SEQ ID №: 2) или фрагмент полноразмерного BclA (например, SEQ ID №: 59), гибридный белок может экспрессироваться под контролем промотора, который, как правило, связан с геном BclA в геноме В. anthracis Sterne (например, промотор SEQ ID №: 85).
[00140] В альтернативном варианте гибридный белок может экспрессироваться под контролем сильного промотора споруляции. В некоторых случаях промотор, который является нативным для сигнальной последовательности, белок экзоспория или фрагмент белка экзоспория будет представлять собой сильный промотор споруляции. В других случаях промотор, который является нативным для сигнальной последовательности, белок экзоспория или фрагмент белка экзоспория не будет представлять собой сильный промотор споруляции. В последнем случае может быть предпочтительным заменить нативный промотор на сильный промотор споруляции. Экспрессия гибридного белка под контролем сильного промотора споруляции обеспечивает повышенную экспрессию гибридного белка на экзоспорий представителя семейства Bacillus cereus.
[00141] Сильный промотор споруляции может включать одну или более промоторную последовательность сигма-К, специфическую для полимеразы споруляции.
[00142] Подходящие сильные промоторы споруляции для применения в экспрессировании гибридных белков в представителе семейства Bacillus cereus, включают следующие, перечисленные в таблице 2 ниже:
[00143] В промоторных последовательностях, перечисленных в Таблице 2 выше, положения промоторных последовательностей сигма-К, специфических для полимеразы споруляции, обозначаются жирным шрифтом и подчеркнутым текстом. Промотор CrylA (В. thuringiensis HD-73; SEQ ID №: 90) имеет в общей сложности четыре последовательности сигма-К, две из которых перекрываются друг другом, как показано двойным подчеркиванием в таблице 2.
[00144] Предпочтительные сильные промоторы споруляции для использования в экспрессии гибридных белков в представителях семейства Bacillus cereus включают промотор BetA (В. anthracis Sterne; SEQ ID №: 86), промотор BclA (В. anthracis Sterne; SEQ ID №: 85), промоторы оперонов 1 и 2 кластера BclA гликозилтрансферазы (В. anthracis Sterne; SEQ ID №№: 101 и 102), и промотор β-пропеллерного белка YVTN (В. weihenstephensis КВАВ 4; SEQ ID №: 89).
[00145] В любом из рекомбинантных представителей семейства Bacillus cereus, описанных в данном документе, гибридный белок может экспрессироваться под контролем промотора споруляции, содержащего последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или 100% идентичности с последовательностью нуклеиновой кислоты любой из SEQ ID №: 85-103.
[00146] Если промотор споруляции содержит последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности с последовательностью нуклеиновой кислоты любой из SEQ ID №№№: 85-103, промоторная последовательность или последовательности сигма-К, специфические для полимеразы споруляции, предпочтительно имеют 100% идентичности с соответствующими нуклеотидами из SEQ ID №: 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102 или 103. Например, как показано в Таблице 2 выше, промотор BclA В. anthracis Sterne (SEQ ID №: 85) содержит промоторные последовательности сигма-К, специфические для полимеразы споруляции, на нуклеотидах 24-32, 35-43 и 129-137. Таким образом, если промотор споруляции включает последовательность, имеющую по меньшей мере 90% идентичности с последовательностью нуклеиновой кислоты SEQ ID №: 85, предпочтительно, чтобы нуклеотиды промотора споруляции, соответствующие нуклеотидам 24-32, 35-43 и 129-137 из SEQ ID №: 85 имели 100% идентичности с нуклеотидами 24-32, 35-43 и 129-137 в SEQ ID №: 85.
Препараты
[00147] Данное изобретение также относится к препаратам, содержащим любой из рекомбинантных представителей семейства Bacillus cereus, описанных в предыдущем разделе, и сельскохозяйственно приемлемый носитель.
[00148] Сельскохозяйственно приемлемый носитель может представлять собой любой носитель, приемлемый для использования в сельском хозяйстве. Например, подходящие сельскохозяйственно приемлемые носители включают, но не ограничиваются этим, диспергирующие вещества, сурфактанты, примеси, воду, загустители, противослеживающиеся агенты, противоосадочные вещества, компостирующие препараты, гранулированные подкормки, диатомиты, масла, красители, стабилизаторы, консерванты, полимеры, пленки или их комбинации.
[00149] Добавка может представлять собой масло, камедь, смолу, глину, полиоксиэтиленгликоль, терпен, вязкую органику, сложный эфир жирной кислоты, сульфатированный спирт, алкилсульфонат, нефтяной сульфонат, сульфат спирта, алкил бутан diamate натрия, полиэфир тиобутандиоата натрия, производное бензол-ацетонитрила, белковый материал (молочный продукт, пшеничную муку, соевую муку, кровь, альбумин, желатин или их комбинацию) или их комбинацию.
[00150] Загуститель может включать длинную цепь алкилсульфоната полиэтиленгликоля, полиоксиэтиленолеат или их комбинацию.
[00151] Сурфактант может включать тяжелое нефтяное масло, тяжелый нефтяной дистиллят, сложный эфир полиола жирной кислоты, полиэтоксилированный эфир жирной кислоты, арилалкил полиоксиэтиленгликоля, алкиламин ацетат, алкиларилсульфонат, многоатомный спирт, алкилфосфат или их комбинацию.
[00152] Противодействующее слипанию вещество включает соль натрия, карбонат кальция, диатомит или их комбинацию. Например, соль натрия может включать монометил-нафталинсульфонат натриевую соль, диметил- нафталинсульфонат натриевую соль, сульфит натрия, сульфат натрия или их комбинацию.
[00153] Подходящие сельскохозяйственно приемлемые носители включают вермикулит, древесный уголь, отходы сатурационного пресса сахарного завода, рисовую шелуху, карбоксиметилцеллюлозу, торф, перлит, мелкий песок, карбонат кальция, муку, квасцы, крахмал, тальк, поливинилпирролидон или их комбинацию.
[00154] Препарат может включать препарат для покрытия семян, жидкий препарат, применяемый для растений или для растительных ростовых сред, или твердый препарат, применяемый для растений или для растительных ростовых сред.
[00155] Например, композиция для покрытия семян может включать раствор на водной или масляной основе, применяемый для семян, или порошок или гранулированный препарат, применяемый для семян. В альтернативном варианте композиция для покрытия семян может включать порошок или гранулированный препарат, применяемый для семян.
[00156] Жидкий препарат, применяемый для растений или для растительных ростовых сред, может включать концентрированный препарат или препарат, готовый для использования.
[00157] Твердый препарат, применяемый для растений или для растительных ростовых сред, может включать гранулированный препарат или порошковое вещество.
[00158] Любой из указанных выше препаратов также может включать агрохимикат, например, удобрение, материал микроэлементов удобрения, инсектицид, гербицид, фунгицид, моллюскоцид, альгицид, вещество, улучшающее рост растений, бактериальный инокулянт, грибковый инокулянт или их комбинацию.
[00159] Удобрение может включать жидкое удобрение.
[00160] Удобрение может включать сульфат аммония, нитрат аммония, сульфат-нитрат аммония, хлорид аммония, бисульфат аммония, полисульфид аммония, тиосульфат аммония, водный раствор аммиака, безводный аммиак, полифосфат аммония, сульфат алюминия, нитрат кальция, известково-аммиачную селитру, сульфат кальция, обожженный магнезит, кальцитовый известняк, оксид кальция, нитрат кальция, доломитовый известняк, гашеную известь, карбонат кальция, диаммонийфосфат, моноаммонийфосфат, нитрат магния, сульфат магния, нитрат калия, хлорид калия, сульфат калия-магния, сульфат калия, нитраты натрия, магнезиальный известняк, оксид магния, мочевину, карбамидоформальдегидные смолы, мочевино-аммониевый нитрат, покрытую серой мочевину, мочевину с полимерным покрытием, изобутилиден димочевину, K2SO4-2MgSO4, каинит, сильвинит, кизерит, эпсомскую соль, элементарную серу, мергель, измельченные устричные раковины, рыбную муку, жмыхи, рыбный тук, кровяную муку, фосфорит, суперфосфат, шлак, костную муку, древесную золу, навоз, гуано летучих мышей, торф, компост, зеленый песок, муку из семян хлопчатника, муку из перьев, муку из крабов, рыбную эмульсию, гуминовую кислоту или их комбинацию.
[00161] Материал микроэлементного удобрения может включать борную кислоту, борат, борную фритту, сульфат меди, медную фритту, хелат меди, декагидрат тетрабората натрия, сульфат железа, оксид железа, сульфат железа-аммония, железную фритту, хелат железа, сульфат марганца, оксид марганца, хелат марганца, хлорид марганца, марганцевую фритту, молибдат натрия, молибденовую кислоту, сульфат цинка, оксид цинка, карбонат цинка, цинковую фритту, фосфат цинка, хелат цинка или их комбинацию.
[00162] Инсектицид может включать органофосфат, карбамат, пиретроид, акарицид, алкил-фталат, борную кислоту, борат, фторид, серу, мочевину, замещенную ароматическим галоидом, углеводород сложного эфира, инсектицид на биологической основе или их комбинацию.
[00163] Гербицид может включать соединение хлорфенокси, нитрофенольное соединение, соединение нитрокрезола, соединение дипиридила, ацетамид, алифатическую кислоту, анилид, бензамид, бензойную кислоту, производное бензойной кислоты, анисовую кислоту, производное анисовой кислоты, бензонитрил, бензотиадиазинона диоксид, тиокарбамат, карбамат, карбанилат, хлорпиридинил, производное циклогексенона, производное динитроаминобензола, соединение фтор-динитро-толуидин, изоксазолидинон, никотиновую кислоту, изопропиламин, производные изопропиламина, оксадиазолинон, фосфат, фталат, соединение пиколиновой кислоты, триазин, триазол, урацил, производное мочевины, эндотал, хлорат натрия или их комбинацию.
[00164] Фунгицид может включать замещенный бензол, тиокарбамат, этилен-бис-дитиокарбамат, тиофталид амид, соединение меди, ртутьорганическое соединение, оловоорганическое соединение, соединение кадмия, анилазин, беномил, циклогексамид, додин, этридиазол, ипродион, металаксил, тиамимефон, трифорин или их комбинацию.
[00165] Грибковый инокулянт может включать грибковый инокулянт из семейства Glomeraceae, грибковый инокулянт из семейства Claroidoglomeraceae, грибковый инокулянт из семейства Gigasporaceae, грибковый инокулянт из семейства Acaulosporaceae, грибковый инокулянт из семейства Sacculosporaceae, грибковый инокулянт из семейства Entrophosporaceae, грибковый инокулянт из семейства Pacidsporaceae, грибковый инокулянт из семейства Diversisporaceae, грибковый инокулянт из семейства Paraglomeraceae, грибковый инокулянт из семейства Archaeosporaceae, грибковый инокулянт из семейства Geosiphonaceae, грибковый инокулянт из семейства Ambisporaceae, грибковый инокулянт из семейства Scutellosporaceae, грибковый инокулянт из семейства Dentiscultataceae, грибковый инокулянт из семейства Racocetraceae, грибковый инокулянт из типа Basidiomycota, грибковый инокулянт из типа Ascomycota, грибковый инокулянт из типа Zygomycota или их комбинацию.
[00166] Бактериальный инокулянт может включать бактериальный инокулянт из рода Rhizobium, бактериальный инокулянт из рода Bradyrhizobium, бактериальный инокулянт из рода Mesorhizobium, бактериальный инокулянт из рода Azorhizobium, бактериальный инокулянт из рода Allorhizobium, бактериальный инокулянт из рода Sinorhizobium, бактериальный инокулянт из рода Kluyvera, бактериальный инокулянт из рода Azotobacter, бактериальный инокулянт из рода Pseudomonas, бактериальный инокулянт из рода Azospirillium, бактериальный инокулянт из рода Bacillus, бактериальный инокулянт из рода Streptomyces, бактериальный инокулянт из рода PaeniBacillus, бактериальный инокулянт из рода Paracoccus, бактериальный инокулянт из рода Enterobacter, бактериальный инокулянт из рода Alcaligenes, бактериальный инокулянт из рода Mycobacterium, бактериальный инокулянт из рода Trichoderma, бактериальный инокулянт из рода Gliocladium, бактериальный инокулянт из рода Glomus, бактериальный инокулянт из рода Klebsiella или их комбинацию.
[00167] Бактериальный инокулянт может включать штамм бактерий, стимулирующий рост растения. Штамм бактерий, стимулирующий рост растений, может включать штамм бактерий, который продуцирует инсектицидный токсин (например, токсин Cry), продуцирует фунгицидное соединение (например, β-1,3-глюканаза, хитозиназа, литиказа или их комбинация), продуцирует нематоцидное соединение (например, токсин Cry), продуцирует бактерицидное соединение, является устойчивым к одному или более антибиотикам, содержит одну или более самостоятельно реплицирующихся плазмид, прикрепляется к корням растений, колонизирует корни растений, формирует биопленки, растворяет питательные вещества, секретирует органические кислоты, или их комбинации.
[00168] Например, бактериальный инокулянт может включать Bacillus aryabhattai САР53 (NRRL № В-50819), Bacillus aryabhattai CAP56 (NRRL № B-50817), Bacillus flexus BT054 (NRRL № B-50816), Paracoccus kondratievae NC35 (NRRL № B-50820), Bacillus mycoides BT155 (NRRL № B-50921), Enterobacter клоаки CAP12 (NRRL № B-50822), Bacillus nealsonii BOBA57 (NRRL № NRRL B-50821), Bacillus mycoides EE118 (NRRL № B-50918), Bacillus subtilis EE148 (NRRL № B-50927), Alcaligenes faecalis EE107 (NRRL № B-50920), Bacillus mycoides EE141 (NRRL № B-50916), Bacillus mycoides BT46-3 (NRRL № B-50922), представителя семейства Bacillus cereus EE128 (NRRL № B-50917), Bacillus Thuringiensis BT013A (NRRL № B-50924), PaeniBacillus massiliensis BT23 (NRRL № B-50923), представителя семейства Bacillus cereus EE349 (NRRL № B-50928), Bacillus subtilis EE218 (NRRL № B-50926), Bacillus megaterium EE281 (NRRL № B-50925), или их комбинации. Каждый из этих штаммов был помещен на хранение Центром сельскохозяйственных исследований (ЦСИ) Министерства сельского хозяйства США (МСХСША) по адресу: 1815 North University Street, Peoria, Illinois 61604 U.S.A., 11 марта 2013 года (Bacillus aryabhattai CAP53, Bacillus aryabhattai CAP56, Bacillus flexus BT054, Paracoccus kondratievae NC35, Enterobacter cloacae CAP12, и Bacillus nealsonii BOBA57) или 10 марта 2014 года (Bacillus mycoides BT155, Bacillus mycoides EE118, Bacillus subtilis EE148, Alcaligenes faecalis EE107, Bacillus mycoides EE141, Bacillus mycoides BT46-3, представитель семейства Bacillus cereus ЕЕ128, Bacillus thuringiensis ВТ013А, PaeniBacillus massiliensis BT23, представитель семейства Bacillus cereus EE349, Bacillus subtilis EE218, и Bacillus megaterium EE281), и идентифицируется по номерам NRRL, указанным в скобках.
[00169] Эти штаммы, стимулирующие рост растения, были выделены из ризосфер различных активно растущих растений и были идентифицированы по их последовательности 16S рРНК (указанной в данном документе как SEQ ID №№: 104-121) и с помощью биохимических анализов. Данные штаммы были идентифицированы по меньшей мере до рода с помощью общих биохимических методов и морфологических показателей. Биохимические тесты для подтверждения грам-отрицательных штаммов, таких как Paracoccus kondratievae, Alcaligenes faecalis и Enterobacter cloacae, включали выращивание на среде MacConkey и питательном агаре, микроскопические исследования, выращивание на среде, содержащей 5% и 7,5% NaCl, выращивание при рН 5 и рН 9, выращивание при 42°С и 50°С, способность продуцировать кислоту при ферментации с целлобиозой, лактозой, глицерином, глюкозой, сахарозой, d-маннитом и крахмалом; продуцирование флуоресцентных пигментов; гидролиз желатина; восстановление нитратов; продуцирование каталазы, гидролиз крахмала; оксидативная реакция, продуцирование уреазы и подвижность. Аналогичным образом биохимические тесты для подтверждения грам-положительных штаммов, таких как Bacillus и Paenibacillus, включали выращивание на среде PEA и питательном агаре, микроскопические исследования, выращивание на среде, содержащей 5% и 7,5% NaCl, выращивание при рН 5 и рН 9, выращивание при 42°С и 50°С, способность продуцировать кислоту при ферментации с целлобиозой, лактозой, глицерином, глюкозой, сахарозой, d-маннитом и крахмалом; продуцирование флуоресцентных пигментов; гидролиз желатина; восстановление нитратов; продуцирование каталазы, гидролиз крахмала; оксидативная реакция, продуцирование уреазы и подвижность. Идентификация этих штаммов и демонстрация их стимулирующих эффектов на рост растений описаны далее в примерах, приведенных ниже.
[00170] Например, препарат может включать штамм бактерий, стимулирующий рост растения, включающий Paracoccus kondratievae NC35, Bacillus aryabhattai CAP53 или Bacillus megaterium EE281, причем данный препарат дополнительно содержит любой из рекомбинантных представителей семейства Bacillus cereus, описанных в данном документе, в том числе любой из описанных в данном документе штаммов рекомбинантных представителей семейства Bacillus cereus, стимулирующих рост растений (например, рекомбинантный Bacillus mycoides ВТ155, Bacillus mycoides EE141 или Bacillus thuringiensis BT013A). Штамм рекомбинантного представителя семейства Bacillus cereus, стимулирующий рост растения, может экспрессировать любой из гибридных белков, описанных в данном документе, например, гибридный белок, содержащий сигнальную последовательность SEQ ID №: 60 и негормональный пептид (например, ингибитор трипсина Кунитца (ИТК)), фермент, участвующий в продуцировании или активации соединения, стимулирующего рост растений (например, хитозиназы), белок или пептид, связывающийся с растением (например, TasA); белок или пептид, защищающий растение от патогенов (например, TasA), или фермент, который разрушает или изменяет бактериальные, грибковые или растительные источники питательных веществ (например, фосфатазы, такие как PhoA или фитазы, или эндоглюканазы).
Способы стимуляции роста растений
[00171] Данное изобретение также относится к способам стимуляции роста растений. Способ стимуляции роста растений включает введение в среду для роста растений любого из рекомбинантных представителей семейства Bacillus cereus, которые обсуждались выше, или любого из препаратов, которые обсуждались выше. В альтернативном варианте любой из рекомбинантных представителей семейства Bacillus cereus, которые обсуждались выше, или любой из препаратов, которые обсуждались выше, могут быть применены к растению, семени растения или области, окружающей растение или семя растений. В таких способах белок или пептид, стимулирующий рост растения, физически прикреплен к экзоспорию рекомбинантного представителя семейства Bacillus.
[00172] В альтернативном варианте способ стимуляции роста растений включает введение рекомбинантного представителя семейства Bacillus cereus, экспрессирующего гибридный белок, в среду для роста растений, или применение рекомбинантного представителя семейства Bacillus cereus, экспрессирующего гибридный белок, к растению, семени растения или области, окружающей растение или семя растения. Гибридный белок содержит по меньшей мере один белок или пептид, стимулирующий рост растения, и сигнальную последовательность, белок экзоспория или фрагмент белка экзоспория. Белок или пептид, стимулирующий рост растения, физически прикреплен к экзоспорию рекомбинантного представителя семейства Bacillus. Сигнальная последовательность, белок экзоспория или фрагмент белка экзоспория может представлять собой любую из сигнальных последовательностей, белков экзоспория или фрагментов белка экзоспория, перечисленных ранее в параграфе [0005].
[00173] Сигнальная последовательность может дополнительно состоять из 16 аминокислот и иметь по меньшей мере около 43% идентичности с аминокислотами 20-35 из SEQ ID №: 1, причем идентичность с аминокислотами 25-35 составляет по меньшей мере около 54%. В альтернативном варианте сигнальная последовательность может состоять из аминокислот 1-35 из SEQ ID №: 1, аминокислот 20-35 из SEQ ID №: 1; SEQ ID №: 1 или SEQ ID №: 60.
[00174] Сигнальная последовательность может включать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере около 50% идентичности с аминокислотами 20-35 из SEQ ID №: 1, причем идентичность с аминокислотами 25-35 составляет по меньшей мере около 63%. В альтернативном варианте сигнальная последовательность состоит из аминокислотной последовательности, состоящей из 16 аминокислот и имеющей по меньшей мере около 50% идентичности с аминокислотами 20-35 из SEQ ID №: 1, причем идентичность с аминокислотами 25-35 составляет по меньшей мере около 63%.
[00175] Сигнальная последовательность может включать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере около 50% идентичности с аминокислотами 20-35 из SEQ ID №: 1, причем идентичность с аминокислотами 25-35 составляет по меньшей мере около 72%. В альтернативном варианте сигнальная последовательность состоит из аминокислотной последовательности, состоящей из 16 аминокислот и имеющей по меньшей мере около 50% идентичности с аминокислотами 20-35 из SEQ ID №: 1, причем идентичность с аминокислотами 25-35 составляет по меньшей мере около 72%.
[00176] Сигнальная последовательность может включать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере около 56% идентичности с аминокислотами 20-35 из SEQ ID №: 1, причем идентичность с аминокислотами 25-35 составляет по меньшей мере около 63%. В альтернативном варианте сигнальная последовательность состоит из аминокислотной последовательности, состоящей из 16 аминокислот и имеющей по меньшей мере около 56% идентичности с аминокислотами 20-35 из SEQ ID №: 1, причем идентичность с аминокислотами 25-35 составляет по меньшей мере около 63%.
[00177] Сигнальная последовательность может включать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере около 62% идентичности с аминокислотами 20-35 из SEQ ID №: 1, причем идентичность с аминокислотами 25-35 составляет по меньшей мере около 72%. В альтернативном варианте сигнальная последовательность состоит из аминокислотной последовательности, состоящей из 16 аминокислот и имеющей по меньшей мере около 62% идентичности с аминокислотами 20-35 из SEQ ID №: 1, причем идентичность с аминокислотами 25-35 из SEQ ID №: 1 составляет по меньшей мере около 72%.
[00178] Сигнальная последовательность может включать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере около 68% идентичности с аминокислотами 20-35 из SEQ ID №: 1, причем идентичность с аминокислотами 25-35 составляет по меньшей мере около 81%. В альтернативном варианте сигнальная последовательность состоит из аминокислотной последовательности, состоящей из 16 аминокислот и имеющей по меньшей мере около 68% идентичности с аминокислотами 20-35 из SEQ ID №: 1, причем идентичность с аминокислотами 25-35 составляет по меньшей мере около 81%.
[00179] Сигнальная последовательность может включать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере около 75% идентичности с аминокислотами 20-35 из SEQ ID №: 1, причем идентичность с аминокислотами 25-35 составляет по меньшей мере около 72%. В альтернативном варианте сигнальная последовательность состоит из аминокислотной последовательности, состоящей из 16 аминокислот и имеющей по меньшей мере около 75% идентичности с аминокислотами 20-35 из SEQ ID №: 1, причем идентичность с аминокислотами 25-35 из SEQ ID №: 1 составляет по меньшей мере около 72%.
[00180] Сигнальная последовательность может включать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере около 75% идентичности с аминокислотами 20-35 из SEQ ID №: 1, причем идентичность с аминокислотами 25-35 составляет по меньшей мере около 81%. В альтернативном варианте сигнальная последовательность состоит из аминокислотной последовательности, состоящей из 16 аминокислот и имеющей по меньшей мере около 75% идентичности с аминокислотами 20-35 из SEQ ID №: 1, причем идентичность с аминокислотами 25-35 из SEQ ID №: 1 составляет по меньшей мере около 81%.
[00181] Сигнальная последовательность может включать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере около 81% идентичности с аминокислотами 20-35 из SEQ ID №: 1, причем идентичность с. аминокислотами 25-35 составляет по меньшей мере около 81%. В альтернативном варианте сигнальная последовательность состоит из аминокислотной последовательности, состоящей из 16 аминокислот и имеющей по меньшей мере около 81% идентичности с аминокислотами 20-35 из SEQ ID №: 1, причем идентичность с аминокислотами 25-35 составляет по меньшей мере около 81%.
[00182] Сигнальная последовательность может включать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере около 81% идентичности с аминокислотами 20-35 из SEQ ID №: 1, причем идентичность с аминокислотами 25-35 составляет по меньшей мере около 90%. В альтернативном варианте сигнальная последовательность состоит из аминокислотной последовательности, состоящей из 16 аминокислот и имеющей по меньшей мере около 81% идентичности с аминокислотами 20-35 из SEQ ID №: 1, причем идентичность с аминокислотами 25-35 составляет по меньшей мере около 90%.
[00183] В альтернативном варианте белок экзоспория или фрагмент белка экзоспория может включать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или 100% идентичности с любой из SEQ ID №№: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 44,46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 59, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83 и 84.
[00184] Белок, стимулирующий рост растения, может включать фермент. Например, фермент может включать фермент, который разрушает или изменяет бактериальный, грибковый или растительный источник питательных веществ. Такие ферменты включают целлюлазы, липазы, оксидазы, лигнин протеазы, гликозид гидролазы, фосфатазы, нитрогеназы, нуклеазы, амидазы, нитрат редуктазы, нитрит редуктазы, амилазы, аммиак оксидазы, лигниназы, глюкозидазы, фосфолипазы, фитазы, пектиназы, глюканазы, сульфатазы, уреазы, ксиланазы и сидерофоры. При введении в среду для роста растений или применении на растение, семенах или области, окружающей растение или семя растений, гибридные белки, содержащие ферменты, которые разрушают или изменяют бактериальный, грибковый или растительный источник питательных веществ, могут помочь в обработке питательных веществ в непосредственной близости от растения и привести к повышенному поглощению питательных веществ растением или полезных бактериями или грибками в непосредственной близости от растения.
[00185] Подходящие целлюлазы включают эндоцеллюлазы (например, эндоглюканазу, такую как эндоглюканаза Bacillus subtilis, эндоглюканаза Bacillus thuringiensis, эндоглюканаза Bacillus cereus или эндоглюканаза Bacillus clausii), экзоглюканазы (например, экзоглюканазу Trichoderma reesei), и β-глюкозидазы (например, β-глюкозидазу Bacillus subtilis, β-глюкозидазу Bacillus thuringiensis, β-глюкозидазу Bacillus cereus или β-глюкозидазу Bacillus clausii).
[00186] Липаза может включать липазу Bacillus subtilis, липазу Bacillus thuringiensis, липазу Bacillus cereus или липазу Bacillus clausii.
[00187] Подходящие лигнин оксидазы включают лигнин пероксидазы, лакказы, глиоксал оксидазы, лигниназы и марганец пероксидазы.
[00188] Протеаза может включать субтилизин, кислую протеазу, щелочную протеазу, протеиназу, пептидазу, эндопептидазу, экзопептидазу, термолизин, папаин, пепсин, трипсин, проназу, карбоксилазу, сериновую протеазу, глутаминовую протеазу, аспартатную протеазу, цистеиновую протеазу, треониновую протеазу или металлопротеазу.
[00189] Фосфатаза может включать фосфорную моноэфир-гидролазу, фосфомоноэстеразу, (например, PhoA4), фосфорную диэфир-гидролазу, фосфодиэстеразу, трифосфорную моноэфир-гидролазу, фосфорил ангидрид-гидролазу, пирофосфатазу, фитазу, (например, фитазу Bacillus subtilis ЕЕ148 или фитазу Bacillus thuringiensis ВТ013А), триметафосфатазу или трифосфатазу.
[00190] Нитрогеназа может включать нитрогеназу из Nif семейства (например, NifBDEHKNXV PaeniBacillus massiliensis).
[00191] В любом из описанных выше способов стимуляции роста растений растения, выращиваемые в среде для роста растений, содержащей рекомбинантного представителя семейства Bacillus cereus, проявляют усиленный рост по сравнению с ростом растений в идентичной среде для роста растений, не содержащей рекомбинантного представителя семейства Bacillus cereus.
[00192] В любом из описанных выше способов стимуляции роста растений рекомбинантный представитель семейства Bacillus cereus может включать любой из описанных выше рекомбинантных штаммов бактерий, стимулирующих рост растений.
[00193] В любом из описанных выше способов стимуляции роста растений гибридный белок может экспрессироваться под контролем любого из промоторов, описанных ранее.
Способы зашиты растения от патогена
[00194] Данное изобретение также относится к способам защиты растения от патогена. Такие способы включают введение любого из рекомбинантных представителей семейства Bacillus cereus, описанных выше, или любого из препаратов, описанных выше, в среду для роста растений. В альтернативном варианте такие способы включают применение любого из рекомбинантных представителей семейства Bacillus cereus, описанных выше, или любого из препаратов, описанных выше, к растению, к семени растения или к области, окружающей растение или семя растения. В этих способах белок или пептид, защищающий растение от патогена, физически прикреплен к экзоспорию рекомбинантного представителя семейства Bacillus cereus.
[00195] Растения, выращиваемые в среде для роста растений, содержащей рекомбинантного представителя семейства Bacillus cereus, менее восприимчивы к инфицированию патогеном по сравнению с растениями, выращиваемыми в идентичной среде для роста растений, не содержащей рекомбинантного представителя семейства Bacillus cereus. Снижение чувствительности к патогену может являться результатом стимуляции иммунной системы растения белком или пептидом, защищающим растение от патогена, или может являться результатом прямого или косвенного воздействия белка или пептида, защищающего растение от патогена, на патоген.
Способы повышения устойчивости к стрессу в растении
[00196] Данное изобретение также относится к способам повышения устойчивости к стрессу в растении. Такие способы включают введение любого из рекомбинантных представителей семейства Bacillus cereus, описанных выше, или любого из препаратов, описанных выше в среде для роста растений. В альтернативном варианте такие способы включают применение любого из рекомбинантных представителей семейства Bacillus cereus, описанных выше, или любого из препаратов, описанных выше, к растению, к семени растения или к области, окружающей растение или семя растения. В этих способах белок или пептид, который повышает устойчивость к стрессу в растении, физически прикреплен к экзоспорию рекомбинантного представителя семейства Bacillus cereus.
[00197] Растения, выращиваемые в среде для роста растений, содержащей рекомбинантного представителя семейства Bacillus cereus, менее восприимчивы к стрессу по сравнению с растениями, выращиваемыми в идентичной среде для роста растений, не содержащей рекомбинантного представителя семейства Bacillus cereus.
Способы иммобилизации спор рекомбинантного представителя семейства Bacillus cereus на растении
[00198] Данное изобретение также относится к способам иммобилизации споры рекомбинантного представителя семейства Bacillus cereus на растении. Эти способы включают введение любого из рекомбинантных представителей семейства Bacillus cereus, описанных выше, или любого из препаратов, описанных выше, в среду для роста растений. В альтернативном варианте такие способы включают применение любого из рекомбинантных представителей семейства Bacillus cereus, описанных выше, или любого из препаратов, описанных выше, к растению, к семени растения или к области, окружающей растение или семя растения. Белок или пептид, связывающийся с растением, физически прикреплен к экзоспорию рекомбинантного представителя семейства Bacillus.
[00199] Эти способы позволяют споре представителя семейства Bacillus cereus связываться с растением таким образом, что спора остается на растении. Например, эти способы позволяют споре представителя семейства Bacillus cereus связываться с корнем растения или с надземной частью растения (например, листья, стебли, плоды или цветы) таким образом, что спора остается на корневой структуре растения или на его надземной части и не проникает в среду роста растения или в среду, окружающую надземные части растения.
[00200] В любом из способов иммобилизации спор рекомбинантного представителя семейства Bacillus cereus на растении белок или пептид, связывающийся с растением, может избирательно воздействовать и удерживать представителя семейства Bacillus cereus на растительной структуре или субструктуре (например, на корнях растения или субструктуре корней растения или на воздушной части растения или субструктуре воздушной части растения).
Среда роста растений
[00201] В любом из описанных выше способов среда для роста растений представляет собой материал, который способен поддерживать рост растений. Среда роста растений может включать почву, воду, водную среду, песок, гравий, полисахарид, мульчу, компост, торф, солому, древесину, глину, соевую муку, дрожжевой экстракт или их комбинацию. Например, среда для роста растений включает почву, компост, торф или их комбинацию.
[00202] Среда роста растений необязательно может быть с добавлением субстрата для фермента. Например, субстрат может включать триптофан, аденозинмонофосфат, аденозиндифосфат, аденозинтрифосфат (например, аденозин-3-трифосфат), индол, триметафосфат, ферродоксин, ацетоин, диацетил, пируват, ацетолактат, пектин, целлюлозу, метилцеллюлозу, крахмал, хитин, пектин, белоковую муку, производное целлюлозы, фосфат, ацетоин, хитозан, неактивное производное индол-3-уксусной кислоты, неактивное производное гибберелловой кислоты, ксилан, холин, производное холина, пролин, полипролин, пролин-содержащую муку, пролинсодержащий белок, фенилаланин, хоризмат, арабиноксилан, жир, воск, масло, фитиновую кислоту, лигнин, гуминовую кислоту, холин, производное холина или их комбинацию.
Способы применения
[00203] В любом из описанных выше способов рекомбинантный представитель семейства Bacillus cereus или препарат может быть введен в среду роста растения или применен к растению, семени растения или области, окружающей растение или семя растения.
[00204] Например, способ может включать покрытие семян рекомбинантным представителем семейства Bacillus cereus или препаратом, содержащим рекомбинантного представителя семейства Bacillus cereus, до посадки.
[00205] В альтернативном варианте способ может включать применение рекомбинантного представителя семейства Bacillus cereus или препарата к воздушной части растения, например, к листьям, стеблям, плодам или цветам. Например, рекомбинантный представитель семейства Bacillus cereus или препарат может быть распылен, нанесен щеткой, инфильтрирован или иным способом применен к листьям или другим воздушным частям растения.
[00206] Способ может включать введение рекомбинантного представителя семейства Bacillus cereus в среду для роста растений путем применения жидкого или твердого препарата, содержащего рекомбинантного представителя семейства Bacillus cereus к среде (например, почве, компосту, торфу или их комбинации).
[00207] Препарат может быть применен к среде для роста растений до, одновременно с или после посадки семян, саженцев, черенков, луковиц или растений в среду для роста растений.
Дополнительное применение агрохимикатов
[00208] Любой из описанных выше способов может дополнительно включать введение по меньшей мере одного агрохимиката в среду для роста растений или применения по меньшей мере одного агрохимиката на растения или семена. Агрохимикат может представлять собой любой из перечисленных выше, предназначенных для включения в препараты, или любую их комбинацию.
Растения
[00209] Вышеуказанные способы могут быть осуществлены на различных растениях. Например, растения могут относиться к двудольным, однодольным или голосеменным.
[00210] Например, если растение относится к двудольным, двудольные могут быть выбраны из группы, состоящей из фасоли, гороха, томатов, перца, кабачков, люцерны, миндаля, аниса, яблока, абрикоса, артишока, арракачи, авокадо, земляных бобов, свеклы, бергамота, черного перца, акации черной, ежевики, черники, апельсина горького, бок чой, бразильского ореха, хлебного дерева, брокколи, бобов, брюссельской капусты, гречки, капусты, рыжика, китайской капусты, какао, дыни, тмина, артишока испанского, рожкового дерева, моркови, ореха кешью, маниоки, клещевины обыкновенной, цветной капусты, сельдерея корневого, сельдерей салатного, вишни, каштана, нута, цикория, перца чили, хризантемы, корицы, цитрона, клементина, гвоздики, клевера, кофе, гуру, рапса, кукурузы, хлопка, хлопчатника, коровьего гороха, крамбе, клюквы, кресс-салата, огурца, смородины, кремовой яблони, кассии пучковатой, чины клубненосной, баклажана, цикория-эндивия, укропа, пажитника, риса, фундука, льна, герань, крыжовника, тыквы, винограда, грейпфрута, гуавы, конопли, хны, хмеля, конских бобов, хрена, индиго, жасмина, топинамбура, джута, капусты кормовой, капка, кенафа, кольраби, кумквата, лаванды, лимона, чечевицы, леспедецы, салата-латука, лайма настоящего, солодки, личи, мушмула, люпин, ореха макадамии, булава, мандарин, кормовой, манго, мушмулы японской, дыни, мяты, шелковицы, горчицы, нектарина, масличного нуга, мускатного ореха, бамии, маслины, опиумного мака, апельсина, папайи, пастернака, гороха, персика, арахиса, груши, ореха пекана, хурмы, голубиного гороха, фисташкового ореха, подорожника, сливы, граната, грейпфрута, мака, картофеля, сладкого картофеля, чернослива, тыквы, квебрахо, айвы, деревьев из рода Cinchona, лебеды, редиса, рами, рапса, малины, нанду, ревня, розы, фикуса каучуконосного, брюквы, сафлора, эспарцета, козлобородника, саподиллы, мандарина уншиу, козлеца испанского, кунжута, масляного дерева, сои, шпината, кабачка, клубники, сахарной свеклы, сахарного тростника, подсолнечника, сладкого перца, танжерина, чая, теффа, табака, помидора, трилистника, тунга, репы, растения рода Urena, вики, грецкого ореха, арбуза, мате, сурепки, пастушей сумки, кресс-салата, ярутки, иллициума настоящего, лавра, лавра благородного, кассии, джамболана, укропа, тамаринда, мяты перечной, орегана, розмарина, шалфея, сметанного яблока, щитолистника, калофилла, момордики харантской, лумбанга, инокарпуса съедобного, базилика, черники облиствленной, гибискуса, пассифлоры, златолиста каймито, сассафрасы, кактуса, зверобоя, вербейника, боярышника, кориандра, карри, киви, тимьяна, цукини, уллюки, джикамы, гидрофиллума, стрихноса колючего, момбина желтого, карамболя, амаранта, васаби, японского перца, желтой сливы, настурции клубненосной, Toona sinensis, новозеландского шпината, тетрагонии, угу, пижмы, песчанка, момбина пурпурного, малайского яблока, акмеллы осота огородного, китайского картофеля, смирнии европейской, гулявника лекарственного, смолевки, агата, дерева кассия, чертополоха, кровохлебки, антильскогой крыжовника, солянки, солероса, щавля, птеридиса мечевидного, капусты листовой, примулы, первоцвет, портулака, спорыша, терпентинного дерева, пизонии белой, дикого бетеля, западноафриканского переца, эриодиктиона клейкого, эстрагона, петрушки, кервеля, сурепки весенней, бедренца камнеломкового, липпии сладкой, белокопытника, сисо, водяного перца, периллы, паркии красивой, оки, кампонга, китайской селеры, лимонного базилика, тайского базилика, водяной мимозы, кокорыша, кордилины южной, моринги, мирабилиса, страусника обыкновенного, лимнофилы ароматной, лимнохариса желтого, любистка, клоповника, маки, бутылочной тыквы, лобия, водяного шпината, пазника стержнекорневого, хаттюнии сердцевидной, окинавского шпината, глинуса лядвенцевидного, галинсоги мелкоцветковой, синеголовника пахучего, рукколы, артишока испанского, циклантеры съедобной, петрушки японской, чипиля, критмума морского, кратоксилума красивого, иван-чая, кокцинии индийской, бодяка огородного, крамбе приморской, чхайи, кионы, горчицы эфиопской, мари гигантской, мари цельнолистной, epazole, мари белой, центеллы перьевидной, петушиного гребня, каперсника, брокколи рапини, пекинской капусты, курчаволистной горчицы, савойской капусты, кай-лан, листовой горчицы, базеллы белой, мангольда, алтея лекарственного, вьющейся акации, канатника Теофраста, паприки, биксы аннатовой, мяты курчавой, чабера, майорана, тмина, ромашки, мелиссы, душистого переца, черника, черимойи, морошки, терносливы, питайи, дуриана, бузины, фейхоа, джекфрута, ююбы, физалиса, мангостана, рамбутана, красной смородины, черной смородины, гаультерии шаллон, фрукта угли фрукты, фасоли адзуки, черной фасоли, коровьего гороха, вьющейся фасоли, фасоли обыкновенной, фасоли зеленой, фасоли лимской, фасоли золотистой, фасоли многоцветковой, фасоли пинто, фасоли огненно-красной, стручкового гороха, спаржевой капусты, крапивы, радиккьо, редьки японской, редьки белой, поручейника сахарного, японского горчичного шпината, брокколини, редьки черной, лопуха, конских бобов, итальянской брокколи, боба индийского, люпина, стеркулии, боба бархатного, боба крылатого, боба бататового, акации безжилковой, вернонии, акации песчаной, акации Муррея, акации колючей, акации иволистой, акации жилистой, чиа, бука, свечного дерева, арбуза кормового, меликокки, ореха Майя, монгонго, ирвингию, райского ореха и чемпедака.
[00211] В альтернативном варианте двудольные могут относиться к семействам, выбранным из группы, состоящей из Acanthaceae (акант), Aceraceae (клен), Achariaceae, Achatocarpaceae (ачатокарпус), Actinidiaceae (киви), Adoxaceae (адокса), Aextoxicaceae, Aizoaceae (фига готтентотская), Akaniaceae, Alangiaceae, Alseuosmiaceae, Alzateaceae, Amaranthaceae (амарант), Amborellaceae, Anacardiaceae (сумах), Ancistrocladaceae, Anisophylleaceae, Annonaceae (аннона сетчатая), Apiaceae (морковь), Apocynaceae (кутра), Aquifoliaceae (падуб), Araliaceae (женьшень), Aristolochiaceae (кирказон), Asclepiadaceae (ваточник), Asteraceae (астра), Austrobaileyaceae, Balanopaceae, Balanophoraceae (баланофора), Balsaminaceae (мимоза стыдливая), Barbeyaceae, Barclayaceae, Basellaceae (базелла), Bataceae (солерос), Begoniaceae (бегония), Berberidaceae (барбарис), Betulaceae (береза), Bignoniaceae (кампсис укореняющийся), Bixaceae (аннато), Bombacaceae (хлопковое дерево), Boraginaceae (огуречная трава), Brassicaceae (горчица, также Cruciferae), Bretschneideraceae, Brunelliaceae (брунеллия), Bruniaceae, Brunoniaceae, Buddlejaceae (буддлея Давида), Burseraceae (босвеллия), Buxaceae (самшит), Byblidaceae, Cabombaceae (бразения), Cactaceae (кактус), Caesalpiniaceae, Callitrichaceae (болотник), Calycanthaceae (ластовень Шорта), Calyceraceae (калицера), Campanulaceae (колокольчик), Canellaceae (корица), Cannabaceae (конопля), Capparaceae (каперсы колючие), Caprifoliaceae (жимолость), Cardiopteridaceae, Caricaceae (папайя), Caryocaraceae (кариокар ореховый), Caryophyllaceae (гвоздика), Casuarinaceae (казуарина), Cecropiaceae (цекропия), Celastraceae (паслен сладко-горький), Cephalotaceae, Ceratophyllaceae (роголистник), Cercidiphyllaceae (церцидифиллюм), Chenopodioideae (лебеда), Chloranthaceae (хлорант), Chrysobalanaceae (икако), Circaeasteraceae, Cistaceae (ладанник), Clethraceae (клетра), Clusiaceae (мангостан, также Clusiaceae), Cneoraceae, Columelliaceae, Combretaceae (индийский миндаль), Compositae (астра), Connaraceae (коннарус), Convolvulaceae (ипомеи), Coriariaceae, Cornaceae (кизил), Corynocarpaceae (коринокарпус), Crassulaceae (очиток), Crossosomataceae (кроссосома), Crypteroniaceae, Cucurbitaceae (огурец), Cunoniaceae (кунония), Cuscutaceae (повилика), Cyrillaceae (цирилла), Daphniphyllaceae, Datiscaceae (датиска), Davidsoniaceae, Degeneriaceae, Dialypetalanthaceae, Diapensiaceae (диапенсия), Dichapetalaceae, Didiereaceae, Didymelaceae, Dilleniaceae (дилления), Dioncophyllaceae, Dipentodontaceae, Dipsacaceae (ворсянка), Dipterocarpaceae (шорея), Donatiaceae, Droseraceae (росянка), Duckeodendraceae, Ebenaceae (черное дерево), Elaeagnaceae (лох), Elaeocarpaceae (элеокарпус), Elatinaceae (повойничек), Empetraceae (водяника), Epacridaceae (эпакрис), Eremolepidaceae (сережка-омелы), Ericaceae (эрика), Erythroxylaceae (кока), Eucommiaceae, Eucryphiaceae, Euphorbiaceae (молочай), Eupomatiaceae, Eupteleaceae, Fabaceae (горох или бобы), Fagaceae (бук), Flacourtiaceae (флакуртия), Fouquieriaceae (фукьерия блестящая), Frankeniaceae (франкения), Fumariaceae (дымянка), Garryaceae (гаррия), Geissolomataceae, Gentianaceae (горечавка), Geraniaceae (герань), Gesneriaceae (геснера), Globulariaceae, Gomortegaceae, Goodeniaceae (гудения), Greyiaceae, Grossulariaceae (смородина), Grubbiaceae, Gunneraceae (гуннера), Gyrostemonaceae, Haloragaceae (уруть), Hamamelidaceae (гамамелиса), Hernandiaceae (эрнадия), Himantandraceae, Hippocastanaceae (конский каштан), Hippocrateaceae (Hippocratea), Hippuridaceae (водяная сосенка), Hoplestigmataceae, Huaceae, Hugoniaceae, Humiriaceae, Hydnoraceae, Hydrangeaceae (гортензия), Hydrophyllaceae (водолюб), Hydrostachyaceae, Icacinaceae (икацина), Idiospermaceae, Illiciaceae (анис звездчатый), Ixonanthaceae, Juglandaceae (грецкий орех), Julianiaceae, Krameriaceae (ратания), Lacistemataceae, Lamiaceae (мята, также Labiatae), Lardizabalaceae (лардизабала), Lauraceae (лавр), Lecythidaceae (бразильский орех), Leeaceae, Leitneriaceae (пробковое дерево), Lennoaceae (lennoa), Lentibulariaceae (пузырчатка), Limnanthaceae (пенник луговой), Linасеае (лен), Lissocarpaceae, Loasaceae (лоаза), Loganiaceae (логания), Loranthaceae (ремнецветник), Lythraceae (вербейник), Magnoliaceae (магнолия), Malesherbiaceae, Malpighiaceae (мальпигия), Malvaceae (мальва), Marcgraviaceae (маркгавия), Medusagynaceae, Medusandraceae, Melastomataceae (меластома), Meliaceae (красное дерево), Melianthaceae, Mendonciaceae, Menispermaceae (луносемянник), Menyanthaceae (вахта трилистная), Mimosaceae, Misodendraceae, Mitrastemonaceae, Molluginaceae (моллюго мутовчатая), Monimiaceae (монимия), Monotropaceae (вертляница одноцветковая), Moraceae (шелковица), Moringaceae (моринга), Myoporaceae (миопорум), Myricaceae (восковница), Myristicaceae (мускатный орех), Myrothamnaceae, Myrsinaceae (мурсин), Миртовые (мирт), Nelumbonaceae (лотос), Nepenthaceae (непентес кхаси), Neuradaceae, Nolanaceae, Nothofagaceae, Nyctaginaceae (ночная красавица), Nymphaeaceae (кувшинка), Nyssaceae (нисса лесная), Осhnасеае (охна), Olacaceae (олакс), Oleaceae (оливка), Oliniaceae, Onagraceae (энотера), Oncothecaceae, Opiliaceae, Orobanchaceae (заразиха), Oxalidaceae (кислица обыкновенная), Paeoniaceae (пион), Pandaceae, Papaveraceae (мак), Papilionaceae, Paracryphiaceae, Passifloraceae (пассифлора), Pedaliaceae (кунжут), Pellicieraceae, Penaeaceae, Pentaphragmataceae, Pentaphylacaceae, Peridiscaceae, Physenaceae, Phytolaccaceae (лаконоса), Piperaceae (перец), Pittosporaceae (питтоспорум), Plantaginaceae (подорожник), Platanaceae (платан), Plumbaginaceae (свинчатка), Podostemaceae (подостемовые), Polemoniaceae (флокс), Polygalaceae (молочай), Polygonaceae (гречка), Portulacaceae (портулак), Primulaceae (примула), Proteaceae (протея), Punicaceae (гранат), Pyrolaceae (грушанка), Quiinaceae, Rafflesiaceae (раффлезия), Ranunculaceae (лютик), Resedaceae (резеда), Retziaceae, Rhabdodendraceae, Rhamnaceae (крушина), Rhizophoraceae (красное мангровое дерево), Rhoipteleaceae, Rhynchocalycaceae, Rosaceae (роза), Rubiaceae (марена), Rutaceae (рута), Sabiaceae (сабия), Saccifoliaceae, Salicaceae (ива), Salvadoraceae, Santalaceae (сандаловое дерево), Sapindaceae (сапиндус), Sapotaceae (саподилла), Sarcolaenaceae, Sargentodoxaceae, Sarraceniaceae (саррацения), Saururaceae (заурурус поникший), Saxifragaceae (камнеломка), Schisandraceae (лимонник), Scrophulariaceae (норичник), Scyphostegiaceae, Scyropetalaceae, Simaroubaceae (кассия), Simmondsiaceae (жожоба), Solanaceae (картофель), Sonneratiaceae (соннератия), Sphaerosepalaceae, Sphenocleaceae (спеноклея), Stackhousiaceae (стакхузия), Stachyuraceae, Staphyleaceae (клетчатка), Sterculiaceae (какао), Stylidiaceae, Styracaceae (стиракс), Surianaceae (суриана), Symplocaceae (симплокос красильный), Tamaricaceae (тамарикс), Tepuianthaceae, Tetracentraceae, Tetrameristaceae, Theaceae (чай), Theligonaceae, Theophrastaceae (теофраст), Thymelaeaceae (волчье лыко), Ticodendraceae, Tiliaceae (липа), Tovariaceae, Trapaceae (водяной орех), Tremandraceae, Trigoniaceae, Trimeniaceae, Trochodendraceae, Tropaeolaceae (настурция), Turneraceae (турнера), Ulmaceae (вяз), Urticaceae (крапива), Valerianaceae (валериан), Verbenaceae (вербена), Violaceae (фиалка), Viscaceae (омела), Vitaceae (виноград), Vochysiaceae, Winteraceae (винтера), Xanthophyllaceae и Zygophyllaceae (креозотовый куст).
[00212] Если растения относятся к однодольным, однодольные могут быть выбраны из группы, состоящей из кукурузы, пшеницы, овса, риса, ячменя, проса, банана, лука, чеснока, спаржи, плевела, фонио, райшана, нипы, куркумы, шафраны, калганы, чеснока, кардамона, финика, ананаса, лука-шалота, лука-порея, водяного каштана, дикого лука, бусенника, бамбука, дагусса, вольфии бескорневой, маланги, ксантосомы, абаки, ареки, африканского проса, бетеля, сорго технического, цитронеллы, кокоса, колоказии съедобной, кукурузы, сорго, твердой пшеницы, эдо, фуркреа, формио, имбиря, ежы сборной, эспарто, суданской травы, сорго гвинейского, мексиканской пеньки, гибридной кукурузы, джовара, сорго лимонного, агавы, проса тростникового, проса пальчатого, проса итальянского, проса японского, проса обыкновенного, льна новозеландского, овса, масличной пальмы, пальмировой пальмы, саговой пальмы, полевицы белой, сизаля, пшеницы спельты, сахарной кукурузы, сорго сахарного, таро, теффа, тимофеевки луговой, тритикале, ванили, пшеницы и батата.
[00213] В альтернативном варианте однодольные могут относится к семействам, выбранным из группы, состоящей из Асоrасеае (аира), Agavaceae (агава американская), Alismataceae (частуха подорожниковая), Aloeaceae (алоэ), Aponogetonaceae (апоногетон двуколосый), Аrасеае (арум), Аrесасеае (пальма), Bromeliaceae (бромелия), Burmanniaceae (бурманния), Butomaceae (сусак зонтичный), Саnnасеае (пушница), Centrolepidaceae, Commelinaceae (традесканция), Corsiaceae, Costaceae (костус), Cyanastraceae, Cyclanthaceae (панамская пальма), Cymodoceaceae (сирингодиум), Cyperaceae (осока), Dioscoreaceae (батат), Eriocaulaceae (шерстестебельник), Flagellariaceae, Geosiridaceae, Haemodoraceae (тысячелистник), Hanguanaceae (гангуана), Heliconiaceae (хеликония), Hydatellaceae, Hydrocharitaceae (валлиснерия), Iridaceae (ирис), Joinvilleaceae (жуанвилея), Juncaceae (тростник), Juncaginaceae (триостренник), Lemnaceae (ряска), Liliaceae (лилия), Limnocharitaceae (гидроклеис кувшинковидный), Lowiaceae, Marantaceae (маранта беложильчатая), Mayacaceae (маяка), Musaceae (банан), Najadaceae (кувшинка пахучая), Orchidaceae (орхидея), Pandanaceae (панданус), Petrosaviaceae, Philydraceae (филидровые), Poaceae (травы), Pontederiaceae (водяной гиацинт), Posidoniaceae (посидония), Potamogetonaceae (рдест), Rapateaceae, Restionaceae, Ruppiaceae (паспалум двухрядный), Scheuchzeriaceae (шейхцерия), Smilacaceae (смилакс), Sparganiaceae (ежеголовник малый), Stemonaceae (стемона), Strelitziaceae, Taccaceae (така), Thurniaceae, Triuridaceae, Typhaceae (рогоз), Velloziaceae, Xanthorrhoeaceae, Xyridaceae (сисиринхиум полосатый), Zannichelliaceae (цаникеллия болотная), Zingiberaceae (имбирь) и Zosteraceae (зостера).
[00214] Если растения относятся к голосеменным, голосеменные могут относиться к семействам, выбранным из группы, состоящей из Araucariaceae, Boweniaceae, Cephalotaxaceae, Cupressaceae, Cycadaceae, Ephedraceae, Ginkgoaceae, Gnetaceae, Pinaceae, Podocarpaceae, Taxaceae, Taxodiaceae, Welwitschiaceae и Zamiaceae.
ПРИМЕРЫ
[00215] Следующие не ограничивающие примеры предназначены для дополнительной иллюстрации настоящего изобретения.
Пример 1. Использование рекомбинантного представителя семейства Bacillus cereus, выводящего липазы или эндоглюканазы для стимуляции роста растений сои.
[00216] Гены липазы и эндоглюканазы Bacillus subtilis были амплифицированы с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) с использованием следующих праймеров, приведенных ниже в таблице 3:
[00217] Для создания гибридных конструкций гены сливали с нативным промотором BclA ДНК Bacillus thuringiensis, которая кодирует первые 35 аминокислот BclA (аминокислоты 1-35 из SEQ ID №: 1) с использованием техники сплайсинга путем перекрывающихся участков (SOE). Правильные ампликоны были клонированы в челночный вектор Е. coli/Bacillus рНР13 и правильные клоны были скринированы ДНК секвенированием последовательности ДНК. Правильные клоны были электропорированы в Bacillus Thuringiensis (Cry-, плазмида-) и скринированы на устойчивость к хлорамфениколу. Правильные трансформанты выращивали в сердечно-мозговом бульоне в течении ночи при 30°С, высевали на чашки с питательным агаром и инкубировали при 30°С в течение 3 дней. Споры, экспрессирующие гибридную конструкцию (BEMD споры), были собраны с чашек путем промывки в фосфатном буферном солевом растворе (PBS) и очищали центрифугированием и дополнительными промывками в натрий-фосфатном буфере. Нетрансформированные контрольные споры Bacillus thuringiensis (Bt.) получали идентичным образом.
[00218] Соевые бобы (штамм Jake 011-28-04) были посажены на 2,54 см в глубину в горшки глубиной 10 см со стандартным верхним суглинистым слоем. Споры разбавляли до концентрации 1×104/мл в 50 мл воды и применяли к каждому семени при посадке. Растения выращивали при идеальном освещении, используя лампы Т5, 54 Вт, и 11-часовой световой экспозиции в день, при контролируемых температурных условиях в пределах 15,5-25,5°С. Растения поливали до насыщения каждые три дня в течение двухнедельного обследования. В конце двух недель измеряли высоту каждого растения, и измерения были нормализованы к контрольным спорам Bacillus thuringiensis. Было проведено два независимых исследования.
[00219] Результаты показаны в таблице 4 вместе со стандартной ошибкой среднего. В обоих испытаниях растения сои, выращенные в присутствии спор ВЭВ, выводящих липазу или эндоглюканазу, вырастали значительно выше, чем контрольные растения сои, обработанные спорами Bt. (статистический анализ проводили с помощью t-теста).
Пример 2. Использование рекомбинантного представителя семейства Bacillus cereus, выводящего эндоглюканазу, для стимуляции роста растений кукурузы.
[00220] ВЭВ споры, экспрессирующие эндоглюканазу были созданы идентичным образом, как описано выше в примере 1. Кукуруза была посажена на 3,8 см в глубину 3 см в горшки глубиной 10 см со стандартным верхним суглинистым слоем. Споры, контрольные и ВЭВ, экспрессирующие эндоглюканазу, разводили до концентрации 1×104/мл в 50 мл воды и применяли к каждому растению при посадке. Также был включен контроль с одной водой. Растения были выращены при идеальном свете, используя лампы Т5, 54 Вт, и 11-часовой световой экспозиции в день, при контролируемых температурных условиях в пределах 15,5-25,5°С. Растения поливали до насыщения каждые три дня в течение одной недели испытаний. В конце двух недель измеряли высоту каждого растения, и измерения были нормализованы к контрольным спорам Bacillus thuringiensis.
[00221] Результаты приведены в таблице 5, вместе со стандартной ошибкой среднего. Кукуруза, выращенная в присутствии ВЭВ спор, выводящих эндоглюканазу, выросла значительно выше, чем контрольные растения сои, обработанные спорами Bt., и контрольные растения, обработанные только водой (статистический анализ проводили с помощью t-теста).
Пример 3. Использование рекомбинантного представителя семейства Bacillus cereus, выводящего эндоглюканазы или протеазы для стимуляции роста растений пшеницы.
[00222] Споры ВЭВ, экспрессирующие эндоглюканазу, были созданы идентичным образом, как описано выше в примере 1. Споры ВЭВ, эспрессирующие протеазу PtrB Е. coli, были созданы с использованием аналогичных способов, которые описаны выше в примере 1, и следующих праймеров: ggatccatgctaccaaaagcc (прямой, SEQ ID №: 41) и ggatccttagtccgcaggcgtagc (обратный, SEQ ID №: 42).
[00223] Твердая озимая пшеница была посажена на 2,54 см в глубину в горшки глубиной 10 см со стандартным верхним суглинистым слоем. Споры, контроль и ВЭВ, экспрессирующие эндоглюканазу или протеазу, разводили до концентрации 1×104/мл в 50 мл воды и применяли к каждому растению при посадке. Также был включен контроль только с водой. Растения выращивали при идеальном освещении, используя лампы Т5, 54 Вт, и 11-часовой световой экспозиции в день, при контролируемых температурных условиях в пределах 15,5-25,5°С. Растения поливали до насыщения каждые три дня в течение одной недели испытаний. В конце одной недели измеряли высоту каждого растения, и измерения были нормализованы по контрольным растениям.
[00224] Результаты приведены в таблице 6, вместе со стандартной ошибкой среднего. Пшеница, росшая в присутствии спор ВЭВ, выводящих эндоглюканазу или протеазу, выросла значительно выше, чем контрольные растения сои, обработанные спорами B.t., и контрольные растения, обработанные только водой (статистический анализ проводили с помощью t-теста).
Пример 4. Использование рекомбинантного представителя семейства Bacillus cereus, выводящего эндоглюканазу для стимуляции роста растений плевела.
[00225] Споры ВЭВ, экспрессирующие эндоглюканазу, были созданы идентичным образом, как описано выше в примере 1. Пастбищный плевел был посажен на 6,4 мм в глубину в горшки глубиной 10 см со стандартным верхним суглинистым слоем. Споры, контроль и ВЭВ, экспрессирующие эндоглюканазу, разводили до концентрации 1×104/мл в 50 мл воды и применяли к каждому растению при посадке. Также был включен контроль только с водой. Растения выращивали при идеальном освещении, используя лампы Т5, 54 Вт, и 11-часовой световой экспозиции в день, при контролируемых температурных условиях в пределах 15,5-25,5°С. Растения поливали до насыщения каждые три дня в течение двухнедельного обследования. В конце двух недель измеряли высоту каждого растения, и измерения были нормализованы по контрольным растениям, обработанным только водой.
[00226] Результаты приведены в таблице 7, вместе со стандартной ошибкой среднего. Плевел, выращенный в присутствии спор ВЭВ, выводящих эндоцеллюлазу, вырос значительно выше, чем контрольный, обработанный спорами B.t. или водой плевел (статистический анализ проводили с помощью t-теста).
Пример 5. Использование рекомбинантных представителей семейства Bacillus cereus, выводящих ферменты, участвующие в синтезе или активации растительных гормонов для стимуляции роста растений.
[00227] Система ВЭВ также может быть использована для выведения ферментов, участвующих в синтезе гормонов растений. Например, растительный гормон индол-3-уксусная кислота является мощным стимулятором роста растений. Индол-3-уксусная кислота синтезируется in vivo из триптофана ферментами триптофан монооксигеназной и индол-3-ацетамид гидролазой. Индол-3-уксусная кислота и другие ауксиновые гормоны могут также быть синтезированы in vivo из триптофана и/или из индола ферментами нитрилазой, триптофан аминотрансферазой, индол-3-ацетальдегид дегидрогеназой, индол-3-пируват-декарбоксилазой, амин оксидазой, триптофан-декарбоксилазой и триптофан-оксидазой боковой цепи.
[00228] Система ВЭВ также может быть использована для выведения ферментов, участвующих в модификации гормонов роста растений в биологически активные или неактивные формы. Например, нитрилаза может экспрессироваться в системе ВЭВ для катализа превращения индол-3-ацетонитрила в биологически активную форму индол-3-уксусная кислота. Кроме того, неактивные формы гормонов растений, такие как индол-3-ацетонитрил, могут вводиться в среды роста растений с нитрилазой, экспрессированной в ВЭВ, чтобы обеспечить постепенное высвобождение активного гормона в среду роста растений. Многие другие неактивные или менее активные формы растительных гормонов могут быть изменены с помощью соответствующих им ферментов.
[00229] Подобные гормоны роста растений (ауксины) включают индол-3-пировиноградную кислоту, индол-3-ацетальдоксим, индол-3-ацетамид, индол-3-ацетонитрил, индол-3-этанол, индол-3-пируват, индол-3-масляную кислоту, фенилуксусную кислоту, 4-хлориндол-3-уксусную кислоту и индол-3-ацетальдоксим. Эти гормоны синтезируются из триптофана и/или индола в естественных условиях с помощью ферментов триптофан монооксигеназы, индол-3-ацетамид гидролазы, нитрилазы, нитрил гидролазы, ацетолактат синтетазы, альфа-ацетолактат декарбоксилазы, триптофан аминотрансферазы, индол-3-ацетальдегид дегидрогеназы, индол 3-пируватдекарбоксилазы, амин оксидазы, триптофан-декарбоксилазы и триптофан-оксидазы боковой цепи.
[00230] Гормоны роста цитокининового семейства можно также синтезировать с помощью ферментов, экспрессированных в системе ВЭВ. Примеры цитокининов включают кинетин, зеатин (цис и транс), 6-бензиламинопурин, дигидроксизеатин, N6-(D2-изопентенил) аденин, рибозилзеатин, N6-(D2-изопентенил) аденозин, 2-метилтио-цис-рибозилзеатин, цис-рибозилзеатин, рибозилзеатин-5-монофосфат, N6-метиламинопурин, N6-диметиламинопурин, 2'-дезоксизеатина рибозид, 4-гидрокси-3-метил-транс-2-бутенил аминопурин, орто-тополин, мета-тополин, бензиладенин, орто-метилтополин и мета-метилтополин. Эти соединения, стимулирующие рост растения, синтезируются in vivo из мевалоната или аденозин моно/ди/трифосфата ферментами, включающими аденозинфосфат изопентенилтрансферазы, фосфатазы, аденозин-киназы, аденин фосфорибозилтрансферазу, CYP735A, 5'-рибонуклеотид фосфогидролазу, аденозин нуклеозидазы, зеатин цис-транс-изомеразу, зеатин О-глюкозилтрансферазы, β-глюкозидазы, цис-гидроксилазы, СК цис-гидроксилазы, СК N-глюкозилтрансферазы, 2,5-рибонуклеотид фосфогидролазы, аденозин нуклеозидазы, пурин нуклеозидфосфорилазы и зеатин редуктазы.
[00231] Используя способы, подобные описанным выше в примере 1, любой из этих ферментов может быть включен в систему ВЭВ для выведения на ВЭВ споры путем создания слитой конструкции, содержащей фермент и сигнальную последовательность, которая направляет экспрессированный фермент в экзоспорий, когда гибридная конструкция экспрессируется в представителе семейства Bacillus cereus. Рекомбинантный представитель семейства Bacillus cereus, экспрессирующий такую конструкцию, может быть добавлен в почву, или другую среду для роста растений, или нанесен непосредственно на листву растений с помощью способов, аналогичных тем, которые описаны выше в примере 1 для стимуляции роста растений.
[00232] Среда роста растений может быть дополнена предшественниками или субстратами для ферментов. Например, среда для роста растений может быть дополнена триптофаном, аденозинмонофосфатом, аденозиндифосфатом, аденозинтрифосфатом или индолом. Подходящие концентрации этих субстратов находятся между 100 нМ и 100 мкМ.
Пример 6. Использование рекомбинантных представителей семейства Bacillus cereus, выводящих протеазы или пептидазы, расщепляющие белки, пептиды, пробелки или препробелки в биологически активные пептиды для стимуляции роста растений.
[00233] Протеазы и пептидазы могут быть экспрессированы в системе ВЭВ, что может ферментативно расщеплять доступные белки в среде для роста растений в биологически активных пептидов, которые могут действовать на растение непосредственно или косвенно. Примеры включают ферментативное расщепление соевого шрота, дрожжевого экстракта или другой богатой белком пищи, добавляющейся к среде для роста растений, в активные пептиды, которые могут непосредственно стимулировать рост растений. Биологически активные пептиды, полученные путем ферментативного расщепления белковых питательных добавок, включают RHPP и RKN 16D10, мощные стимуляторы развития корневой системы растений. Кроме того, пробелки или препробелки могут разрезаться в активные формы с помощью протеаз и пептидаз, экспрессированых в ВЭВ. Неактивные пробелки или препробелки могут быть добавлены в среду роста растений чтобы облегчить их постепенное расщепление ВЭВ протеазами и замедлить высвобождение биологически активных белков.
[00234] Используя способы, подобные описанным выше в примере 1, любая из этих протеаз и пептидаз может быть включена в систему ВЭВ для выведения на ВЭВ споры путем создания слитой конструкции, содержащей протеазу или пептидазу и сигнальную последовательность, которая направляет экспрессированный фермент в экзоспорий, когда гибридная конструкция экспрессирована в представителе семейства Bacillus cereus. Рекомбинантный представитель семейства Bacillus cereus, экспрессирующий такую конструкцию, может потом быть добавлен к почве или другой среде для роста растений с добавлением соевой муки, дрожжевого экстракта или другой богатой белком питательной добавки для стимуляции роста растений. Соевый шрот, дрожжевой экстракт, или другая богатая белком питательная добавка предпочтительно добавляется к среде для роста растений в виде жидкой композиции, содержащей от около 10 мкг/л до около 100 мг/л в белковой муки, дрожжевого экстракта или другой богатой белком питательной добавки.
Пример 7. Использование спор ВЭВ, экспрессирующих протеазы PtrB, для стимуляции роста растений.
[00235] Споры ВЭВ, экспрессирующие протеазы PtrB Е. coli, были получены, как описано выше в примере 3. Семена сои были посажены на глубину 2,54 см в горшки глубиной 10 см со стандартным суглинистым верхним слоем почвы. Споры, контрольные и ВЭВ, экспрессирующие протеазу, разводили до концентрации 1×104/мл в 50 мл воды и применяли к каждому растению при посадке. Также был включен контроль с одной водой. Соевая мука в дозе 25 мг/горшок была добавлена в воду при посадке. Растения выращивали при идеальном освещении, используя лампы Т5, 54 Вт, и 13-часовой световой экспозиции в день, при контролируемых температурных условиях в пределах 15,5-25,5°С. Растения поливали до насыщения каждые три дня в течение одной недели испытаний. По окончанию двух недель измеряли высоту каждого растения, и измерения были нормированы по контрольным растениям, обработанным только водой.
[00236] Результаты показаны в таблице 8, вместе со стандартной ошибкой среднего, в процентах от контроля с водой. Соя, росшая в присутствии спор ВЭВ, выводящих протеазу, выросла значительно выше чем контрольные растения сои, обработанные спорами Bt. и контрольные растения, обработанные только водой (статистический анализ проводили с помощью t-теста). Добавление соевой муки к контролю с водой или контролю В. thuringiensis не производило большого эффекта. В отличие от этого, в присутствии соевой муки и системы протеаз ВЭВ, растения сои существенно отвечали на все другие виды обработки.
Пример 8. Использование рекомбинантных представителей семейства Bacillus cereus, выводящих белки или пептиды, участвующие в стимулировании роста растений.
[00237] Система ВЭВ также может быть использована для выведения белков или пептидов, которые непосредственно вовлечены в стимулировании роста растений. Например, пептидные гормоны растений или не гормональные пептиды, которые стимулируют рост растений, могут экспрессироваться в системе ВЭВ. Например, негормональные пептиды, которые непосредственно связываются и активируют рецепторы растений, могут экспрессироваться в системе ВЭВ для непосредственного воздействия на рецепторы в растении и корнях целевых растений. Такие пептидные гормоны и негормональные пептиды включают фитосульфокин, calcalva 3 (CLV3), системны, РКН 16D10, Hg-Syv46, eNOD40, NOD белков семейства, ZmlGF, белки семейства SCR/SP11 и пептиды, RHPP, POLARIS и ИТК. Эти пептиды и родственные пептиды могут быть выражены в системе ВЭВ и доставлены в среде для роста растений или непосредственно применены на листву для стимуляции роста растений.
[00238] Используя способы, подобные описанным выше в примере 1, любой из этих белков или пептидов может быть включен в систему ВЭВ для выведения на ВЭВ спорах путем создания слитой конструкции, содержащей фермент и сигнальную последовательность, которая направляет экспрессированный фермент в экзоспорий, когда гибридная конструкция экспрессирован в представителе семейства Bacillus cereus. Рекомбинантный представитель семейства Bacillus cereus, экспрессирующий такую конструкцию, может быть добавлен в почву, или другую среду для роста растений, или нанесен непосредственно на листву растений с помощью способов, аналогичных тем, которые описаны выше в примере 1, для стимуляции роста растений.
Пример 9. Использование спор ВЭВ, экспрессирующих POLARIS или ИТК для стимуляции роста растений.
[00239] Споры ВЭВ растений, экспрессирующие пептид POLARIS и соевый пептид ИТК, были созданы путем синтеза генов, кодирующих пептиды POLARIS или ИТК, связанных с сигнальной последовательностью SEQ ID №: 60. Гены затем были введены в Bacillus thuringiensis и были получены споры, как описано в примере 1. Семена сои были посажены на 2,54 см в глубину в горшки глубиной 10 см со стандартным верхним суглинистым слоем. Споры ВЭВ, экспрессирующие POLARIS или ИТК, разводили до концентрации 1×104/мл в 50 мл воды и применяли к каждому растению при посадке. Также включали контроль только с водой. Чистые пептиды POLARIS и ИТК также были протестированы на их воздействие на сою в количестве 0,05 мг/горшок. Растения выращивали при идеальном освещении, используя лампы Т5, 54 Вт, и 13-часовой световой экспозиции в день, при контролируемых температурных условиях в пределах 15,5-25,5°С. Растения поливали до насыщения каждые три дня в течение двух недельного испытания. По окончанию двух недель измеряли высоту каждого растения, и измерения были нормированы по контрольным растениям, обрабатываемых только водой.
[00240] Результаты приведены в таблице 9, вместе со стандартной ошибкой среднего в процентах от контроля только с водой. Соя, росшая в присутствии спор ВЭВ, выводящих POLARIS, выросла выше и имела некоторое повышение в развитии корней при сравнении с контрольной соей. Присутствие свободного пептида ИТК приводило к значительной низкорослости растений, терявших 6-8% их высоты, но прибавлявших 15% в длине корней. Экспрессия ИТК в системе ВЭВ приводила к повышению в росте корней, но не вызывала задержки в росте растений в высоту. Важно отметить, что присутствие контрольных спор Bacillus thuringiensis со свободным пептидом ИТК не предотвращало эффект задержки в росте, вызванный ИТК, в то время как ВЭВ с ИТК не проявляла такой задержки роста.
Пример 10. Использование рекомбинантных представителей семейства Bacillus cereus, выводящих ферменты, разрушающие или модифицирующие бактериальный, грибковый или растительный источник питательных веществ, для стимуляции роста растений и/или получения питательных веществ.
[00241] Система ВЭВ также может быть использована для выведения ферментов, разрушающих или благотворно модифицирующих бактериальный, грибковый или растительный источник питательных веществ, присутствующий в почве или другой среде для роста растений. Такие ферменты разлагают продукты, присутствующие в почве или другой среде для роста растений в формы, которые могут быть легко поглощены растениями и/или полезными бактериями и/или грибами ризосферы. Такие ферменты включают, например, глюкозид-гидролазы для расщепления сложных углеводов, целлюлазы для расщепления целлюлозы; липазы для расщепления липидов, в том числе масла, жиров и восков; лигнин оксидазы для расщепления лигнина и гуминовых кислот; протеазы для расщепления полипептидов; фосфолипазы для расщепления мембран; амидазы и нитрогеназы для восстановления азота; амилазы для обработки крахмалов; нуклеазы для восстановления нуклеотидов, пектиназы для расщепления пектина, сульфатазы для восстановления серы и ксиланазы для расщепления ксиланов и арабиноксиланов. Полученные продукты, в том числе простые сахара, аминокислоты, жирные кислоты и другие питательных вещества, будут легко доступна для прямого поглощения растениями и/или для стимуляции роста и разрастания полезных бактерий и/или грибов в ризосфере растений.
[00242] Кроме того, ферменты и другие биологические молекулы могут быть использованы для высвобождения или изолирования фосфата, азота и других ключевых элементарных питательных веществ для поглощения растениями из их различных органических и неорганических форм в почве. Например, фосфатазы могут быть использованы для разложения фосфатов в среде в неорганические фосфаты, пригодные для использования растениями. Фосфатами могут быть природные фосфаты, присутствующие в среде для роста растений. В альтернативном варианте или в дополнение, среда для роста растений может быть дополнена фосфатами, такими как триметафосфат, обычной сельскохозяйственной добавки. Примеры полезных фосфатаз включают фосфорный моноэфир гидролазы, фосфомоноэстеразы, фосфорный диэфир гидролазы, фосфодиэстеразы, трифосфорный моноэфир гидролазы, фосфорный ангидрид гидролазы, пирофосфатазы, фитазу, триметафосфатазы и трифосфатазы. Например, ферменты триметафосфатазы, трифосфатазы и пирофосфатазы последовательно расщепляют триметафосфат в доступный неорганический фосфат.
[00243] Семейство ферментов нитрогеназ преобразует атмосферный азот (N2) в аммиак, таким образом превращая азот, по-другому не доступный для растений, в доступную форму. Подходящие ферменты относятся к семейству нитрогеназ Nif.
[00244] Химическая энергия может быть непосредственно добавлена в среду для роста растений в виде аденозинтрифосфата, ферродоксина или дополнительных ферментов, которые производят такую энергию в системе ВЭВ. Они являются кофакторами для нитрогеназ и ограничено присутствуют в почве. Таким образом, такие кофакторы могут быть добавлены в почву, чтобы ускорить реакции, описанные ранее.
[00245] Другие добавки, которые могут быть добавлены в среду для роста растений, включают крахмалы, целлюлозу и производные целлюлозы, пектины, ксиланы и арабиноксиланы, жиры, воски, масла, фитиновые кислоты, лигнины, гуминовые кислоты и других источники питательных веществ, к которым выше приведенные классы ферментов проявляют активность.
[00246] Используя способы, подобные описанным выше в примере 1, любой из этих ферментов может быть включен в систему ВЭВ для выведения на ВЭВ споры путем создания слитой конструкции, содержащей фермент и сигнальную последовательность, которая направляет экспрессированный фермент в экзоспорий, когда гибридная конструкция экспрессируется в представителе семейства Bacillus cereus. Гибридная конструкция затем может экспрессироваться в представителе семейства Bacillus cereus, и этот рекомбинантный представитель семейства Bacillus cereus может быть добавлен к почве или другой среде для роста растений с помощью способов, аналогичных тем, которые описаны выше в примере 1 для стимуляции роста растений.
Пример 11. Использование ВЭВ спор, экспрессирующих фосфатазы для стимуляции роста растений.
[00247] ВЭВ споры Bacillus subtilis, экспрессирующие фосфатазу А4 (PhoA4) были созданы путем синтеза гена, кодирующего PhoA4, связанного с сигнальной последовательностью SEQ ID №: 60. Этот ген затем был введен в Bacillus thuringiensis, и споры были получены, как в примере 1. Кукуруза была посажена на глубину 2,54 см в горшки глубиной 10 см со стандартным верхним суглинистым слоем. ВЭВ споры, экспрессирующие PhoA4, разводили до концентрации 1×104/мл в 50 мл воды и применяли к каждому растению при посадке. Также включали контроль только с водой. Полифосфат был добавлен в горшки в жидком виде в расчете 0,5 мг/горшок. Растения выращивали при идеальном освещении, используя лампы Т5, 54 Вт, и 13-часовой световой экспозиции в день, при контролируемых температурных условиях в пределах 15,5-25,5°С. Растения поливали до насыщения каждые три дня в течение двухнедельного испытания. В конце двух недель измеряли высоту каждого растения, и измерения были нормализованы по контрольным растениям, обработанным только водой.
[00248] Результаты приведены в таблице 10. Кукуруза, росшая в присутствии спор ВЭВ, выводящих PhoA4, показывает повышенный рост, в особенности в присутствии добавленного полифосфата. Этот эффект был выше, чем эффект только от полифосфата.
Пример 12. Использование рекомбинантных представителей семейства Bacillus cereus, выводящих ферменты, участвующие в синтезе 2,3-бутандиола или активации гибберелловой кислоты для стимуляции роста растений.
[00249] Система ВЭВ также может быть использована для выведения ферментов, участвующие в синтезе 2,3-бутандиола, соединения, способствующего росту растений, in vivo 2,3-бутандиол синтезируется полезными бактериями и грибами в ризосфере из ацетоина, диацетила, ацетолактата или пирувата ферментами ацетолактат синтетазой, α-ацетолактат декарбоксилазой, пируватдекарбоксилазой, диацетил редуктазой, бутандиол дегидрогеназой и ацетоин редуктазой.
[00250] Система ВЭВ также может быть использована для выведения ферментов, участвующих в синтезе или активации соединения, способствующего росту растения, гибберелловой кислоты. Гибберелловая кислота может быть образована путем действия ферментов, включая, но не ограничиваясь, гидроксиламин редуктазы, 2-оксоглутарат диоксигеназы, гиббереллин 2В/3В гидролазы, гиббереллина-3 оксидазы и гиббереллина-20 оксидазы.
[00251] Любой из этих ферментов может быть включен в систему ВЭВ для выведения на ВЭВ споры с помощью способов, аналогичных тем, которые описаны выше в примере 1. Может быть получена гибридная конструкция, содержащая фермент и сигнальную последовательность, которая направляет фермент в экзоспорий, если гибридная конструкция экспрессируется в представителе семейства Bacillus cereus. Гибридная конструкция затем экспрессируется в представителе семейства Bacillus cereus и представитель семейства Bacillus cereus вносится в почву или другую среду роста растений для стимуляции роста растений.
[00252] Чтобы увеличить эффект отображаемых на ВЭВ ферментов, почва может быть дополнена субстратами для ферментов. Например, почва или другая среда для роста растений может быть дополнена ацетоином, который является субстратом для ацетоин редуктазы; пируватом, который является субстратом для пируватдекарбоксилазы; диацетилом, который является субстратом для диацетил редуктазы; и/или ацетолактатом, который является субстратом для ацетолактат декарбоксилазы. В альтернативном варианте или в дополнение, почва или другая среда для роста растений может быть дополнена более слабыми или неактивными формами гибберелловой кислоты, которые будут преобразованы в более активные формы в почве или другой среде роста растений под действием ферментов, описанных ранее.
Пример 13. Использование рекомбинантных представителей семейства Bacillus cereus, выводящих протеазы для защиты растений от патогенов.
[00253] Система ВЭВ также может быть использована для выведения ферментов, которые защищают растения от одного или нескольких патогенов. Например, некоторые бактериальные патогены могут взаимодействовать между отдельными особями с помощью секреции бактериальных гомосеринлактонов или похожих сигнальных молекул. Таким образом, протеазы, специфичные к бактериальным сигнальным молекулам гомосеринлактонам, могут защитить растения от таких бактериальных патогенов, разрушая коммуникацию между бактериями - шаг, необходимый бактериям для вырабатывания токсинов и активирования факторов вирулентности. Подходящие протеазы, специфичные к бактериальным сигнальным молекулам гомосеринлактонам, включают эндопептидазы и экзопептидазы.
[00254] Протеазы, специфичные к бактериальным сигнальным молекулам гомосеринлактонам, могут быть включены в систему ВЭВ, используя способы, аналогичные описанным выше в примере 1. Может быть получена гибридная конструкция, включающая протеазу и сигнальную последовательность, которая направляет фермент в экзоспорий, если гибридная конструкция экспрессируется в представителе семейства Bacillus cereus. Гибридная конструкция затем экспрессируется в представителе семейства Bacillus cereus, и представитель семейства Bacillus cereus вносится в почву или другую среду для роста растений для стимуляции роста растений. Протеаза затем может расщепить бактериальные сигнальные молекулы гомосеринов, блокируя ключевой шаг в вирулентности этих микроорганизмов и, таким образом, помогает защитить растение от этих патогенов. Другие протеазы и пептидазы эффективно работают в этом применении в системе ВЭВ, как было показано выше в примере 6 и 7.
Пример 14. Использование рекомбинантных представителей семейства Bacillus cereus, выводящих антимикробные белки и пептиды для защиты растений от патогенов.
[00255] Система ВЭВ также может быть использована для выведения ферментов, которые имеют антибактериальные и/или антигрибковые активности, что может защитить растения от одного или более патогенов. Например, антимикробные белки и пептиды, такие как бактериоцины, лизоцимы (например, LysM), сидерофоры, кональбумин, альбумин, лактоферрины (например, LfcinB) или TasA могут быть экспрессированы в системе ВЭВ для оказывания своего воздействия на бактериальные и грибковые патогены растений. Бактериоцины, альбумин, кональбумин, лизоцимы и лактоферрин оказывают прямое антимикробное действие на свои цели, в то время как сидерофоры связывают важные питательные вещества, требуемые патогенами для вирулентности. Например, пептид лактоферрина LfcinB, при экспрессии на поверхности системы ВЭВ, будет лизировать клетки бактерий, которые чувствительны к пептидам лактоферрина в среде для роста растений. Эти белки и пептиды имеют специфическое действие на некоторых микробов и могут быть селективно направлены против целевой группы патогенов, не влияя на все микробы в среде для роста растений.
[00256] Любой из этих белков или пептидов может быть включен в систему ВЭВ для выведения на спорах ВЭВ с помощью способов, аналогичных тем, которые описаны ранее в примере 1. Может быть получена гибридная конструкция, содержащая фермент и сигнальную последовательность, которая направляет фермент в экзоспорий, если гибридная конструкция экспрессируется в представителе семейства Bacillus cereus. Гибридная конструкция затем экспрессируется в представителе семейства Bacillus cereus, и представитель семейства Bacillus cereus вносится в почву или другую среду для роста растений для защиты растений от одного или более патогенов.
Пример 15. Использование спор ВЭВ, экспрессирующих антимикробные пептиды для защиты растений от бактерий.
[00257] Гены были синтезированы таким образом, что они кодировали любой из двух антимикробных пептидов, LfcinB (получен из бычьего лактоферрина) и LysM (получен из куриного лизоцима), связанных с сигнальной последовательностью BclA (SEQ ID №: 60), находящейся под контролем промотора BclA (SEQ ID №: 85). Гены были введены в Bacillus thuringiensis ВТ013А и споры были получены путем выращивания ночной культуры трансформированных Bacillus на бульоне с сердечно-мозговой вытяжкой, высевание на чашки с питательным агаром при 30°С и последующим выращиванием в течение 3 дней. Споры смывали с чашек и промывали 3 раза в натрий-фосфатном буфере. Культуры Staphylococcus epidermidis выращивали в течение ночи на трипсиновом соевом бульоне при 37°С. После этого ночную культуру затем осаждали, промывали в натрий-фосфатном буфере и ресуспендировали в натрий-фосфатном буфере при Abs595=0,2. ВЭВ в концентрации 1×104, экспрессирующий пептиды LysM или LfcinB, инкубировали в натрий-фосфатном буфере с S. epidermidis в течение 3 часов при 37°С со встряхиванием. Контрольный образец S. epidermidis не обрабатывали (без спор ВЭВ). После 3-часовой инкубации разбавление пластины S. epidermidis были сделаны и инкубировали при 37°С в течение ночи. На следующий день культуры S. epidermidis подсчитывали и определяли процент погибших. Максимальная активность уничтожения зарегистрирована в таблице 11 ниже. Пептиды, экспрессированные ВЭВ, уничтожили значительное число клеток S. epidermidis. Это может непосредственно привести к уничтожению бактерий на ризосфере, семени или другом растительном материале. Выбор пептидов, специфичных для некоторых классов бактерий, также может изменить популяцию микроорганизмов в районе растения в выгодную сторону, или селективно воздействовать на ключевые патогены.
Пример 16. Использование рекомбинантных представителей семейства Bacillus cereus, выводящих ферменты для защиты растений от патогенов.
[00258] Система ВЭВ также может быть использована для выведения ферментов, которые защищают растения от одного или более патогенов. Например, поименный клеточные стенки дрожжей и плесневого гриба разрушаются под действием ферментов, таких как β-1,3-глюканазы, β-1,4-глюканазы, β-1,6-глюканазы, хитозиназы, хитиназы, хитозиназа-подобные белки и лутиказы. Клеточные стенки бактерий разрушаются ферментами, выбранными из протеиназ, протеаз, мутанолизина, стафолизина и лизоцимов. Каждый из этих ферментов, разрушающих клеточные стенки, может быть экспрессирован на системе ВЭВ и внесен в среду для роста растений для селективного ингибирования патогенных микробов в ризосфере.
[00259] Система ВЭВ также может быть использована для выведения ферментов или белков, которые защищают растения от патогенных насекомых или червей, например, путем подавления поедания желаемых растений насекомым или червями. Примеры таких целевых белков и ферментов включают эндотоксины, Cry токсины, другие инсектицидные белковые токсины, ингибиторы протеаз, цистеиновые протеазы, белок Cry5B, белок Cry 21А, хитиназа, белки ингибитора протеазы, пептиды ингибитора протеазы, ингибиторы трипсина, и стреловидный ингибитор протеазы.
[00260] Любой из этих белков или пептидов может быть включен в систему ВЭВ для выведения на спорах ВЭВ спор с помощью способов, аналогичных тем, которые описаны выше в примере 1. Также может быть получена гибридная конструкция, включающая фермент и сигнальную последовательность, которая транспортирует фермент в экзоспорий, если гибридная конструкция экспрессируется в представителе семейства Bacillus cereus. Данная гибридная конструкция затем экспрессируется в представителе семейства Bacillus cereus, и представитель семейства Bacillus cereus вносится в почву или другую среду для роста растений для защиты растений от патогенов.
Пример 17. Использование спор ВЭВ, экспрессирующих противогрибковый фермент, для защиты растений, и демонстрация эффективности против Sacchromyces.
[00261] Ген синтезировали таким образом, что он кодировал противогрибковый фермент β-1,3-глюканазу из Bacillus subtilis, связанный с сигнальной последовательностью BclA (SEQ ID №: 60) под контролем промотора BclA (SEQ ID №: 85). Ген вводили в Bacillus thuringiensis ВТ013А, и споры были получены путем выращивания ночной культуры трансформированного Bacillus на бульоне в сердечно-мозговой вытяжкой, высевания на чашки с питательным агаром при 30°С и последующего выращивания в течение 3 дней. Споры смывали с чашек и промывали 3 раза в натрий-фосфатном буфере. Культуры Saccharomyces cerevisiae выращивали в течение ночи в бульоне YZ при 37°С. После этого ночную культуру осаждали, промывали в натрий-фосфатном буфере и ресуспендировали в натрий-фосфатном буфере при Abs595=0,2. ВЭВ в концентрации 1×104, экспрессирующую β-1,3-глюканазу, инкубировали в натрий-фосфатном буфере с Saccharomyces в течение 1 часа при 37°С со встряхиванием. Контрольный образец Saccharomyces не обрабатывали (без спор ВЭВ). После 3 часов инкубации делали разведение Saccharomyces на чашках и инкубировали при 37°С в течение ночи. На следующий день культуры Saccharomyces подсчитывали и определяли процент погибших. В таблице 12 ниже показана активность уничтожения спорами ВЭВ, экспрессирующими β-1,3-глюканазу. Фермент, экспрессируемый ВЭВ, уничтожил значительное количество клеток Saccharomyces. Это может непосредственно привести к уничтожению грибковых микроорганизмов на ризосфере, семени или другом растительном материале. Выбор белков, специфичных для некоторых классов грибов, также может изменить популяцию микроорганизмов в районе растения в выгодную сторону, или селективно воздействовать на ключевые грибковые патогены.
Пример 18. Использование рекомбинантных представителей семейства Bacillus cereus, выводящих пептиды или белки, стимулирующие иммунную систему растений, для защиты растений от патогенов.
[00262] Система ВЭВ также может быть использована для выведения пептидов и белков, усиливающих иммунную систему растений. Эти белки могут экспрессироваться на внешней стороне споры ВЭВ доставляться в среду для роста растений, для стимуляции иммунной системы растений, чтобы позволить растению, защищать себя от фитопатогенов. Белки и пептиды-примеры включают гарпин, α-эластин, β-эластин, системин, фенилаланин аммиак-лиазу, элиситин, дефензин, криптогеин и белок и пептид флагеллина. Воздействие этих белков и пептидов на растение будет стимулировать устойчивость ко многим растительным патогенам в растениях.
[00263] Любой из этих белков или пептидов может быть включен в систему ВЭВ для выведения на спорах ВЭВ с помощью способов, аналогичных тем, которые описаны выше в примере 1. Также может быть получена гибридная конструкция, включающая фермент и сигнальную последовательность, которая транспортирует фермент в экзоспорий, если гибридная конструкция экспрессируется в представителе семейства Bacillus cereus. Данная гибридная конструкция затем экспрессируется в представителе семейства Bacillus cereus, и представитель семейства Bacillus cereus вносится в почву или другую среду для роста растений для защиты растений от патогенов.
Пример 19. Использование рекомбинантных представителей семейства Bacillus cereus, выводящих белок или пептид, связывающийся с корнем или листом, для иммобилизации рекомбинантного представителя семейства Bacillus cereus на корневой системе растения или листьях растения.
[00264] Белки или пептиды, связывающиеся с корнем или листом, могут также быть включены в систему ВЭВ, чтобы иммобилизировать споры ВЭВ на корневой системе или на листьях растения. Выведение на ВЭВ таких лигандов, связывающихся с корнем или листом, позволяет транспортировать споры на корневую систему растения или субструктуру корневой системы, или на листья, или на субструктуру листьев для сохранения споры ВЭВ в месте, оптимальном для того, чтобы другие выведенные биологические молекулы и ферменты были эффективными.
[00265] Например, rhicadhesin представляет собой лиганд, связывающийся с корнем, который связывается с корневыми волосками. Таким образом, выведение rhicadhesin на спорах ВЭВ приводит к транспортировке спор на корневые волоски. Дополнительные белки, которые можно использовать для избирательного связывания с корнем или листьями растений, включают адгезины, флагеллины, омптины, лектины, нитевидные белки, белки curlus, интимины, инвазины, агглютинин, нефибриальные белки, TasA или YuaB.
[00266] Такие белки или пептиды, связывающиеся с корнем или листом, могут быть включены в систему ВЭВ с использованием способов, аналогичных описанным выше в примере 1. Также может быть получена гибридная конструкция, включающая белок или пептид, связывающиеся с корнем или листом, и сигнальную последовательность, которая транспортирует белок или пептид в экзоспорий, если гибридная конструкция экспрессируется в представителе семейства Bacillus cereus. После этого гибридная конструкция, содержащая лиганд, связывающийся с корнем или листом, экспрессируется в представителе семейства Bacillus cereus. Такие гибридные конструкции могут экспрессироваться совместно с одной или более дополнительной гибридной конструкцией, включающей любой из полезных ферментов, описанных в данном документе (например, фермент, участвующий в синтезе растительного гормона, фермент, разрушающий источник питательных веществ, или протеазы, защищающие растение от патогена). Рекомбинантный представитель семейства Bacillus cereus вносится в почву или другую среду для роста растений или применяется к листьям растения. Лиганд, связывающийся с корнем или листом, транспортирует представителя семейства Bacillus cereus на корневую систему растения или на листья растения и иммобилизует его там, позволяя таким образом дополнительно экспрессированной гибридной конструкции оказывать воздействие в непосредственной близости к корневой системе или листьям.
Пример 20. Использование рекомбинантных представителей семейства Bacillus cereus, выводящих ферменты для повышения устойчивости растений к стрессу.
[00267] Белки, пептиды и ферменты, которые повышают устойчивость к стрессу в растении могут быть включены в систему ВЭВ и доставлены в целевые растения путем введения в корни, листья или среду для роста растений. В периоды стресса, растения выделяют соединения, связанные со стрессом, в том числе аминоциклопропан-1 карбоновую кислоту (АКК), активные формы кислорода и другие, что отрицательно влияет на рост растения. Система ВЭВ может быть использована для выведения ферментов, которые расщепляют такие связанные со стрессом соединения, такие как дезаминаза аминоциклопропан-1-карбоновой кислоты, супероксиддисмутазы, оксидазы, каталазы и другие ферменты, которые действуют на реактивные формы кислорода. Эти ферменты снижают количество этих вызванных стрессом соединений и позволяют растениям расти и даже развиваться при стрессовых условиях.
[00268] Любой из этих белков или пептидов может быть включен в систему ВЭВ для выведения на спорах ВЭВ с помощью способов, аналогичных тем, которые описаны выше в примере 1. Может быть получена гибридная конструкция, содержащая фермент и сигнальную последовательность, которая направляет фермент в экзоспорий, если гибридная конструкция экспрессируется в представителе семейства Bacillus cereus. Затем гибридная конструкция экспрессируется в представителе семейства Bacillus cereus, и представитель семейства Bacillus cereus добавляется в почву или другую среду для роста растений или применяется к листьям растения для повышения устойчивости растения к стрессу.
Пример 21. Получение спор ВЭВ, экспрессирующих защитный фермент каталазу.
[00269] Синтезировали ген, который кодировал защитный фермент каталазу из Bacillus cereus, связанный с сигнальной последовательностью BetA (SEQ ID NO: 61), под контролем промотора BetA (SEQ ID NO: 86). Этот ген был введен в Bacillus Thuringiensis ВТ013А. Споры были получены путем выращивания культур трансформированного Bacillus и штамма дикого типа в сердечно-мозговым бульоне в течение ночи, высаживания на питательные чашки с агаром при 30°С, после чего их оставляли расти в течение 3 дней. Споры смывались с чашек и промывались 3 раза в натрий-фосфатном буфере. Было добавлено 3 капли перекиси водорода в каждую гранулу спор. Фермент каталаза преобразует пероксид водорода на воду и газ О2. Контрольные спор не пенились, в то время как ВЭВ споры с каталазой активно это делали, демонстрируя активность фермента на поверхности спор. Другие защитные ферменты могут выводиться аналогичным образом и доставляться в растение для влияния на свободные радикалы, образующиеся во растениями во время стресса.
Пример 22. Использование рекомбинантных представителей семейства Bacillus cereus, выводящих белки или ферменты, которые защищают семена или растения от стрессовой среды.
[00270] Белки, пептиды и ферменты, которые защищают растение от воздействия окружающей среды, могут быть включены в систему ВЭВ и доставлены в целевые растения путем введения в корни, листья, плоды или в среду роста растений. В периоды замерзания растения могут быть повреждены действием льда. Система ВЭВ может быть использована для выведения пептидов, белков или ферментов, которые защищают растения от таких эффектов. Например, система ВЭВ может быть использована для выведения холин дегидрогеназ, которые действуют путем создания защитных продуктов, которые защищают растения или семена от мороза. Субстраты для этих ферментов (например, холин и/или производные холина) также могут быть добавлены в среду роста растений. Добавление таких субстратов может увеличить количество защитного вещества (бетаин и подобные соединения), образованного в растении ферментами, экспрессированными в ВЭВ. Известно, что производные бетаина защищают семена от холодового стресса.
[00271] Любой из этих белков или пептидов может быть включен в систему ВЭВ для выведения на ВЭВ спорах, используя способы, аналогичные описанным выше в примере 1. Гибридная конструкция может быть сделана так, чтобы включать фермент и сигнальную последовательность, которая направляет фермент в экзоспорий, при условии, что гибридная конструкция экспрессируется в представителе семейства Bacillus cereus. Затем гибридная конструкция экспрессируется в представителе семейства Bacillus cereus, и представитель семейства Bacillus cereus добавляется в почву или другую среду для роста растений или применяется к листьям растения для защиты растения от воздействий и факторов окружающей среды.
Пример 23. Усиленная экспрессия гибридных конструкций в системе ВЭВ с использованием усиленых или альтернативных элементов промотора.
[00272] Система ВЭВ может выявлять широкий спектр белков, пептидов и ферментов, используя одну или более сигнальных последовательностей, описанных в данном документе. Некоторые из этих сигнальных последовательностей имеют высокое сродство к экзоспорию, что было бы полезным для экспрессии гибридного белка, но низкий уровень экспрессии гибридного белка ограничивает их использование в системе ВЭВ. Для таких гибридных белков и последовательностей могут быть использованы альтернативные сильные промоторы споруляции вместо нативных промоторов.
[00273] Например, SEQ ID №: 13 (аминокислоты 1-39 из гена 3572 В. weihenstephensis КВАВ4) обеспечивает очень эффективную N-концевую последовательность для доставки белков в экзоспорий представителей семейства Bacillus cereus, как показано ниже в таблице 13. Все гены были синтезированы в полноразмерной форме (включая промоторные области и области, кодирующие гибридные белки), как описано в данном документе. При использовании нативных элементов промотора гена 3572 В. weihenstephensis КВАВ4 (SEQ ID №: 88) для экспрессии гибридного белка, содержащего сигнальную последовательность из SEQ ID №: 13 слитую с ферментом β-галактозидазой (из Е. coli), наблюдали низкий уровень экспрессии гибридного белка, что приводило к снижению ферментативной активности на поверхности спор. Активность фермента измеряли по превращению 0,5 М о-нитрофенилгалактозида в растворе в течение 10 минут.Ферментативное превращение измеряли с помощью спектрофотометра при ABS540. Замена нативных элементов промотора гена 3572 В. weihenstephensis КВАВ4 на сильные промоторы SEQ ID №: 86 (В. anthracis BetA/BAS3290) или SEQ ID №: 89 (YVTN β-пропеллер белок В. weihenstephensis КВАВ4) привела к значительному увеличению ферментативной активности спор. С другой стороны, замена нативных элементов промотора гена 3572 В. weihenstephensis КВАВ4 на нативный промотор Sterne BAS1882 В. anthracis (SEQ ID №: 87) привела к снижению ферментативной активности спор. Уровень экспрессии сигнальной последовательности SEQ ID №: 13, слитой с β-галактозидазой, был значительно ниже (0,38х), когда контролировался промотором BAS1882 (SEQ ID №: 87), и был значительно улучшен, когда контролировался промотором BetA (SEQ ID №: 86) или промотором белка YVTN (SEQ ID №: 89).
Пример 24. Изолирование и идентификация бактериальных штаммов, усиливающих рост растений.
[00274] Были отобраны образцы грунта из ризосфер наиболее здоровых и наиболее устойчивых растений картофеля (Solanum tuberosum), тыквы обыкновенной (Cucurbita реро), томата (Solarium lycopersicum) и фасоли огненно-красной (Phaseolus coccineus), разведены в стерильной воде и нанесены на чашки с агаризированной питательной средой. Бактериальные изоляты, показавшие высокие темпы роста и которые можно было пассировать и размножать, были отобраны для дальнейшего изучения. Выбранные штаммы выращивали на минимальной среде (KH2PO4 3 г, Na2HPO4 6 г, NH4Cl 1 г, NaCl 0,50 г, MgSO4 7Н2О 0,15 г, CaCl2 2Н2О 0,013 г и глюкоза 1 г на л сухого веса). Ночные культуры (30°С) выбранных штаммов осаждали, удаляли среду и ресуспендировали в равном количестве дистиллированной воды. Для одной обработки десять семян салата латука были посажены на глубину 1 см в суглинистый верхний слой почвы (Колумбия, МО), который просеивали для удаления крупных частиц. При посадке в 4 см горшки семена инокулировали 0,5 мкл бактерий, ресуспендированных в воде, смешанными с 10 мл Н2О. Десять мл Н2О было достаточно для разнесения бактерий в 3 дюймах3 (7,62 см3) почвы, а также для насыщения почвы для надлежащего прорастания семян. Растения выращивали при температуре 65-75°F (18-24°С) при 11-часовом световом дне и с поливом по 5 мл каждые 3 дня. Через неделю данные по высоте растений и диаметру листьев, а также по общему физиологическому состоянию растений были собраны. Предварительный скрининг ризосферных изолятов привел в результате к получению более чем 200 различных видов бактерий и грибков из ризосферы четырех растений. Некоторые из видов бактерий описаны в таблице 14. Идентифицированные штаммы указаны под своими присущими бактериальными названиями. Другие штаммы указаны под неизвестным идентификационным номером. Инокулянты, давшие результаты вблизи контроля (±2%), не были включены в таблицу.
[00275] Бактериальные штаммы, произведшие наибольшее влияние на общее физиологическое состояние растения и высоту растения в предварительном испытании на салате латуке, в дальнейшем идентифицировались. Бактериальные штаммы выращивали в течение ночи в бульоне Лурии-Бертани при 37°С, и ночные культуры осаждали в центрифуге. Среду удаляли, а из оставшегося бактериального осадка выделяли хромосомную ДНК с помощью набора Qiagen Bacterial Chromosomal DNA Isolation. Хромосомную ДНК подвергали ПЦР-амплификации 16S рРНК кодирующих областей с использованием праймеров E338F 5'- ACT ССТ ACG GGA GGC AGC AGT -3' (SEQ ID №: 122), E1099R А 5'- GGG TTG CGC TCG TTG С -3' (SEQ ID №: 123) и E1099R В 5'-GGG TTG CGC TCG ТТА С-3' (SEQ ID №: 124). ПЦР ампликоны очищали, используя набор Promega PCR purification, и полученные ампликоны разводили и отправляли в университет Миссури (DNA Core) для секвенирования ДНК. Последовательности ДНК сравнивали с базой данных NCBI BLAST бактериальных изолятов, и род и вид идентифицировали путем непосредственного сравнения с известными штаммами. Наиболее хорошо идентифицированные виды приведены в таблице 14. Во многих случаях по последовательностям ДНК 16S рРНК можно было лишь определить род выбранного бактериального штамма. В тех случаях, когда прямая идентификация не удалась, проводили дополнительные биохимические анализы с использованием стандартных в данной области техники способов для дифференцирования штаммов на видовом и штаммовом уровнях, и они приведены в таблице 15.
Пример 25. Изолирование и идентификация дополнительных бактериальных штаммов, усиливающих рост растений.
[00276] Были отобраны образцы грунта из сельскохозяйственных полей вблизи г. Газа, штат Канзас, разбавлены в стерильной воде и нанесены на чашки с агаризированной питательной средой. Бактериальные изоляты, продемонстрировавшие высокие темпы роста и которые можно было пассировать и размножать, были отобраны для дальнейшего изучения. Выбранные штаммы выращивали на минимальной среде (КН2РО4 3 г, Na2HPO4 6 г, NH4Cl 1 г, NaCl 0,50 г, MgSO4 7H2O 0,15 г, CaCl2 2H2O 0,013 г и глюкоза 1 г на л сухого веса). Ночные культуры (30°С) выбранных штаммов осаждали, удаляли среду и ресуспендировали в равном количестве дистиллированной воды. Семена кукурузы покрывали коммерческим полимером для семян, смешанным только с водой (1,6 мкл на все семена), или коммерческим полимером для семян, содержащим выбранные бактериальные штаммы (1,6 мкл на все семена). Покрытые семена сажали в 3-дюймовые (7,62 см в диаметре) горшки на глубину 1 дюйм (2,54 см) в суглинистый верхний слой почвы (Колумбия, МО), который просеивали для удаления крупных частиц. Растения выращивали при температуре 18-24°С (65-75°F) при 11-часовом световом дне и с поливом по 50 мл каждые 3 дня. Через две недели данные по высоте растений и диаметру листьев, а также по общему физиологическому состоянию растений были собраны. Для анализа прорастания и определения длины 3-дневного корня, семена покрывали так, как указано ранее, и равномерно распределяли по 10 семян на бумажное полотенце. Бумажные полотенца смачивали 10 мл воды, скручивали, помещали в небольшой пластиковый пакет и инкубировали при 30°С или помещали на подогреваемый коврик для прорастания при 27-30°С (80-85°F). Измерения корней регистрировали после 3 дней. Предварительный скрининг ризосферных изолятов привел в результате к получению более чем 100 различных видов бактерий и грибков из ризосферы. Некоторые из бактериальных видов описаны в таблице 16. Идентифицированные штаммы указаны под своими присущими бактериальными названиями.
[00277] Бактериальные штаммы, произведшие наибольшее влияние на общее физиологическое состояние растения, описаны в таблице 16. Бактериальные штаммы выращивали в течение ночи в бульоне Лурии-Бертани при 37°С, и ночные культуры осаждали в центрифуге. Среду удаляли, а из оставшегося бактериального осадка выделяли хромосомную ДНК с помощью набора Qiagen Bacterial Chromosomal DNA Isolation. Хромосомную ДНК подвергали ПЦР-амплификации 16S рРНК кодирующих областей с использованием праймеров E338F 5'-АСТ ССТ ACG GGA GGC AGC AGT-3' (SEQ ID №: 122), E1099R A 5'-GGG TTG CGC TCG TTG С-3' (SEQ ID №: 123) и E1099R В 5'-GGG TTG CGC TCG ТТА С-3' (SEQ ID №: 124). ПЦР ампликоны очищали, используя набор Promega PCR purification, и полученные ампликоны разводили и отправляли в университет Миссури (DNA Core) для секвенирования ДНК. Последовательности ДНК сравнивали с базой данных NCBI BLAST бактериальных изолятов, и род и вид идентифицировали путем непосредственного сравнения с известными штаммами. Наиболее хорошо идентифицированные виды приведены в таблице 16. Во многих случаях по последовательностям ДНК 16S рРНК можно было лишь определить род выбранного бактериального штамма. В тех случаях, когда прямая идентификация не удалась, проводили дополнительные биохимические анализы с использованием стандартных в данной области техники способов для дифференцирования штаммов на видовом и штаммовом уровнях, и дифференцированные штаммы приведены в таблице 17.
Пример 26. Тестирование бактериальных штаммов, усиливающих рост растений, на люцерне.
[00278] Выбранные штаммы выращивали на минимальной среде (КН2РО4 3 г, Na2HPO4 6 г, NH4Cl 1 г, NaCl 0,50 г, MgSO4 7Н2О 0,15 г, CaCl2 2Н2О 0,013 г и глюкоза 1 г на л сухого веса). Ночные культуры (30°С) выбранных штаммов осаждали, удаляли среду и ресуспендировали в равном количестве дистиллированной воды. Для каждой обработки десять семян люцерны, покрытые Zeba полимером, были посажены на глубину 0,6 см в суглинистый верхний слой почвы (Колумбия, МО), который просеивали для удаления крупных частиц. При посадке семена инокулировали 0,5 мкл бактерий, ресуспендированных в воде, смешанными с 10 мл Н2О. Десять мл Н2О было достаточно для разнесения бактерий в 3 дюймах3 (7,62 см3) почвы, а также для насыщения почвы для надлежащего прорастания семян. Растения выращивали при температуре 65-75°F (18-24°С) при 11-часовом световом дне и с поливом по 5 мл каждые 3 дня. Люцерну растили в течение 1 недели для анализирования появления и начального прироста растений в описанных условиях. Идентифицированные штаммы, указанные под своими присущими бактериальными названиями, и конечные данные о высоте приведены в таблице 18.
Пример 27. Тестирование бактериальных штаммов, усиливающих рост растений, на огурцах.
[00279] Выбранные штаммы выращивали на минимальной среде (КН2РО4 3 г, Na2HPO4 6 г, NH4Cl 1 г, NaCl 0,50 г, MgSO4 7Н2О 0,15 г, CaCl2 2H2O 0,013 г и глюкоза 1 г на л сухого веса). Ночные культуры (30°С) выбранных штаммов осаждали, удаляли среду и ресуспендировали в равном количестве дистиллированной воды. Для каждой обработки десять семян огурцов были посажены на глубину 1 см в суглинистый верхний слой почвы (Колумбия, МО), который просеивали для удаления крупных частиц. При посадке семена инокулировали 0,5 мкл бактерий, ресуспендированных в воде, смешанными с 10 мл Н2О. Десять мл Н2О было достаточно для разнесения бактерий в 3 дюймах3 (7,62 см3) почвы, а также для насыщения почвы для надлежащего прорастания семян. Растения выращивали при температуре 65-75°F (18-24°С) при 11-часовом световом дне и с поливом по 5 мл каждые 3 дня. Огурцы растили в течение 2 недель для анализирования появления и начального прироста растений в описанных условиях. Идентифицированные штаммы, указанные под своими присущими бактериальными названиями, и конечные данные о высоте приведены в таблице 19.
Пример 28. Тестирование бактериальных штаммов, усиливающих рост растений, на тыкве.
[00280] Выбранные штаммы выращивали на минимальной среде (KH2PO4 3 г, Na2HPO4 6 г, NH4Cl 1 г, NaCl 0,50 г, MgSO4 7H2O 0,15 г, CaCl2 2Н2О 0,013 г и глюкоза 1 г на л сухого веса). Ночные культуры (30°С) выбранных штаммов осаждали, удаляли среду и ресуспендировали в равном количестве дистиллированной воды. Для каждой обработки десять семян тыквы были посажены на глубину 1 см в суглинистый верхний слой почвы (Колумбия, МО), который просеивали для удаления крупных частиц. При посадке семена инокулировали 0,5 мкл бактерий, ресуспендированных в воде, смешанными с 10 мл Н2О. Десять мл Н2О было достаточно для разнесения бактерий в 3 дюймах3 (7,62 см3) почвы, а также для насыщения почвы для надлежащего прорастания семян. Растения выращивали при температуре 65-75°F (18-24°С) при 11-часовом световом дне и с поливом по 5 мл каждые 3 дня. Тыкву растили в течение 2 недель для анализирования появления и начального прироста растений в описанных условиях. Идентифицированные штаммы, указанные под своими присущими бактериальными названиями, и конечные данные о высоте и конечном диаметре листа (по ширине двух листьев) приведены в таблице 20.
Пример 29. Тестирование бактериальных штаммов, усиливающих рост растений, на плевеле.
[00281] Выбранные штаммы выращивали на минимальной среде (КН2РО4 3 г, Na2HPO4 6 г, NH4Cl 1 г, NaCl 0,50 г, MgSO4 7Н2О 0,15 г, CaCl2 2Н2О 0,013 г и глюкоза 1 г на л сухого веса). Ночные культуры (30°С) выбранных штаммов осаждали, удаляли среду и ресуспендировали в равном количестве дистиллированной воды. Для каждой обработки тридцать семян плевела были посажены на глубину 0,3 см в суглинистый верхний слой почвы (Колумбия, МО), который просеивали для удаления крупных частиц. При посадке семена инокулировали 0,5 мкл бактерий, ресуспендированных в воде, смешанными с 10 мл Н2О. Десять мл Н2О было достаточно для разнесения бактерий в 3 дюймах3 (7,62 см3) почвы, а также для насыщения почвы для надлежащего прорастания семян. Растения выращивали при температуре 65-75°F (18-24°С) при 11-часовом световом дне и с поливом по 5 мл каждые 3 дня. Плевел растили в течение 1,5 недели для анализирования появления и начального прироста растений в описанных условиях. Идентифицированные штаммы, указанные под своими присущими бактериальными названиями, и конечные данные о высоте приведены в таблице 21.
Пример 30. Тестирование бактериальных штаммов, усиливающих рост растений, на кукурузе.
[00282] Выбранные штаммы выращивали на минимальной среде (КН2РО4 3 г, Na2HPO4 6 г, NH4Cl 1 г, NaCl 0,50 г, MgSO4 7Н2О 0,15 г, CaCl2 2H2O 0,013 г и глюкоза 1 г на л сухого веса). Ночные культуры (30°С) выбранных штаммов осаждали, удаляли среду и ресуспендировали в равном количестве дистиллированной воды. Для каждой обработки десять семян кукурузы были посажены на глубину 2,5 см в суглинистый верхний слой почвы (Колумбия, МО), который просеивали для удаления крупных частиц. При посадке семена инокулировали 0,5 мкл бактерий, ресуспендированными в воде, смешанными с 10 мл Н2О. Десять мл Н2О было достаточно для разнесения бактерий в 3 дюймах3 (7,62 см3) почвы, а также для насыщения почвы для надлежащего прорастания семян. Растения выращивали при температуре 65-75°F (18-24°С) при 11-часовом световом дне и с поливом по 5 мл каждые 3 дня. Кукурузу растили в течение 2 недель для анализирования появления и начального прироста растений в описанных условиях. Идентифицированные штаммы, указанные под своими присущими бактериальными названиями, и конечные данные о высоте приведены в таблице 22.
Пример 31. Тестирование бактериальных штаммов, усиливающих рост растений, на сое.
[00283] Выбранные штаммы выращивали на минимальной среде (КН2РО4 3 г, Na2HPO4 6 г, NH4Cl 1 г, NaCl 0,50 г, MgSO4 7H2O 0,15 г, CaCl2 2Н2О 0,013 г и глюкоза 1 г на л сухого веса или для Bradyrhizobium или Rhizobium на дрожжевой среде с маннитолом). Ночные культуры (30°С) выбранных штаммов осаждали, удаляли среду и ресуспендировали в равном количестве дистиллированной воды. Для каждой обработки десять семян сои были посажены на глубину 2,5 см в суглинистый верхний слой почвы (Колумбия, МО), который просеивали для удаления крупных частиц. При посадке семена инокулировали 0,5 мкл бактерий, ресуспендированных в воде, смешанными с 10 мл Н2О. При тестировании двух бактериальных штаммов 0,5 мкл каждой суспензии бактерий смешивали с 10 мл Н2О. Десять мл Н2О было достаточно для разнесения бактерий в 3 дюймах3 (7,62 см3) почвы, а также для насыщения почвы для надлежащего прорастания семян. Растения выращивали при температуре 65-75°F (18-24°С) при 11-часовом световом дне и с поливом по 5 мл каждые 3 дня. Сою растили в течение 2 недель для анализирования появления и начального прироста растений в описанных условиях. Идентифицированные штаммы указаны под своими присущими бактериальными названиями и конечные данные о высоте приведены в таблице 23. Ко-инокуляция бактериальных штаммов по данному изобретению с представителями Bradyrhizobium sp.или Rhizobium sp.привела к увеличению роста растений по сравнению с любым единичным инокулянтом.
Пример 32. Члены семейства Bacillus cereus, обладающие свойствами усиления роста растений.
[00284] Bacillus mycoides штамм ВТ155, Bacillus mycoides штамм ЕЕ118, Bacillus mycoides штамм EE141, Bacillus mycoides штамм BT46-3, член семейства Bacillus cereus штамм EE349, Bacillus thuringiensis штамм BT013A и Bacillus megaterium штамм EE281 выращивали в бульоне Лурии-Бертани при 37°С, и ночные культуры осаждали, удаляли среду и ресуспендировали в равном количестве дистиллированной воды. Для каждой обработки 20 семян кукурузы были посажены на глубину 2,5 см в суглинистый верхний слой почвы (Колумбия, МО), который просеивали для удаления крупных частиц. При посадке семена инокулировали 0,5 мкл бактерий, ресуспендированных в воде, смешанными с 50 мл Н2О. Пятьдесят мл Н2О было достаточно для разнесения бактерий в 29 дюймах3 (442,5 см3) почвы, а также для насыщения почвы для надлежащего прорастания семян. Растения выращивали при температуре 65-72°F при 13-часовом световом дне и с поливом по 5 мл каждые 3 дня. Саженцы растили в течение 2 недель для анализирования появления и начального прироста растений в описанных условиях. Идентифицированные штаммы указаны под своими присущими бактериальными названиями и конечные данные о высоте приведены в таблице 24.
Все протестированные бактерии, усиливающие рост растений, оказали благоприятное влияние на высоту кукурузы на вторую неделю в описанных условиях. Член семейства Bacillus cereus штамм ЕЕ128 имел наибольший эффект в этом испытании, давая более чем 14% прироста высоты кукурузы.
Пример 33. Повышенный отбор членов семейства Bacillus cereus для скрининга на усиленный рост растений и другие полезные изменения, как хозяина для ВЭВ экспрессии.
[00285] Система ВЭВ может быть использована для выявления широкого спектра белков, пептидов и ферментов с использованием любой из сигнальных последовательностей, описанных в данном документе, для обеспечения полезных сельскохозяйственных эффектов. Дополнительные полезные эффекты могут быть получены путем отбора хозяина для экспрессии (члена семейства Bacillus cereus), имеющего присущие полезные свойства. Многие штаммы членов семейства Bacillus cereus имеют преимущества по улучшению роста растений. Кроме того, многие штаммы членов семейства Bacillus cereus обеспечивают наличие защитных эффектов, посредством прямых фунгицидных, инсектицидных, нематоцидных или других защитных действий. При использовании таких штаммов в качестве хозяина для экспрессии в системе ВЭВ, конечный споровый продукт будет иметь комбинацию положительных преимуществ для сельского хозяйства.
[00286] Таблица 25 предоставляет результаты экспериментов, в которых гибридный белок экспрессировался в различных штаммах членов семейства Bacillus cereus. Все штаммы экспрессировали гибридный белок, содержащий аминокислоты 1-35 из SEQ ID №: 1, и фосфатазу PhoA4 из Bacillus subtilis, фермент, полезный для интенсивного поглощение фосфата, в кукурузе. Ген был синтезирован, клонирован в вектор рМК4 и введен в каждый из Bacillus spp., указанный ниже в таблице 25. Штаммы вводили в споруляцию путем инкубации при 30°С на чашках с питательной агаризированной средой, содержащей 10 мкг/мл хлорамфеникола, в течение трех дней. Споры собирали, промывали и применяли к кукурузе при посадке с показателем 1×105 КОЕ/мл в 50 мл воды на горшок с диаметром 7,62 см с 5 мг полифосфата на горшок. Кукурузу выращивали в иловой суглинистой почве в течение двух недель. Растения выращивали при идеальном освещении, используя лампы Т5, 54 Вт, и 13-часовой световой экспозиции в день, при контролируемых температурных условиях в пределах 15,5-25,5°С. Растения поливали до насыщения каждые три дня в течение двухнедельного испытания. По окончанию двух недель измеряли высоту каждого растения, и измерения были нормированы по контролю спор Bacillus thuringiensis. Экспрессия гибридного белка SEQ ID №: 1-фосфатаза привела к увеличению высоты кукурузы на 2-ю неделю, независимо от выбранного для экспрессии штамма хозяина. Как показано в таблице 25, использование члена семейства Bacillus cereus, усиливающего рост растений, дополнительно увеличивало высоту кукурузы.
Пример 34. Использование различных сигнальных последовательностей для экспрессии β-галактозидазы на поверхности Bacillus thuringiensis.
[00287] Широкое разнообразие сигнальных последовательностей, имеющих высокую степень гомологии с аминокислотами 20-35 из BclA (аминокислоты 20-35 из SEQ ID №: 1), может быть использовано для выявления ферментов, белков и пептидов на поверхности членов семейства Bacillus cereus. Несколько сигнальных последовательностей сравнивали путем создания гибридных белков, содержащих сигнальные последовательности, связанные с липазой Bacillus subtilis. Гибридные конструкции синтезировали, используя нативные для сигнальных последовательностей промоторы, клонировали в репликативную плазмиду рМК4 и вводили в Bacillus thuringiensis ВТ013А. Штаммы вводили в споруляцию путем инкубации при 30°С на чашках с питательной агаризированной средой, содержащей 10 мкг/мл хлорамфеникола, в течение трех дней. Споры собирали, промывали и ресуспендировали в натрий-фосфатном буфере до показателя 1×108/мл. Использовали 1×105 спор для каждой гибридной конструкции, споры суспендировали в 400 мкл дистилированной Н2О. Реакционные смеси нагревались реакционными компонентами до желаемой температуры реакции (40°С). Добавляли 200 мкл рабочего буфера (9:1 раствор А: раствор Б). Раствор А содержал 50 мМ Трис рН 10 и 13,6 мМ деоксихолевую кислоту, а раствор Б содержал 3 мг/мл р-нитрофенил пальмитат в изопропаноле. Реакционную смесь инкубировали при 40°С в течение 10 минут и помещали в лед, центрифугировали для удаления спор, и регистрировали оптическую плотность при 420 нм. Результаты показаны ниже в таблице 26. Активность была нормирована по контрольному гибридному белку, содержащему аминокислоты 1-35 из SEQ ID №: 1, слитые с липазой Bacillus subtilis.
[00288] Связывание нескольких сигнальных последовательностей с липазой приводит к более высоким уровням экспрессии и активности фермента на поверхности спор. В частности, SEQ ID №№60, 62 и 64, каждый из которых содержит более короткую сигнальную последовательность, приводило в результате к усиленной гибридной экспрессии на поверхности ВЭВ спор. Все гибридные белки, содержащие тестированные сигнальные последовательности, приводили к выявлению на поверхностности липазы.
Пример 35. Использование различных последовательностей экзоспория для экспрессии липазы на поверхности Bacillus thuringiensis и демонстрация локализации гибридного белка на поверхности экзоспория.
[00289] Широкое разнообразие белков экзоспория может быть использовано для выявления ферментов, белков и пептидов на поверхности членов семейства Bacillus cereus. Несколько различных белков экзоспория сравнивали путем создания гибридных белков, содержащих белки экзоспория, связанные с липазой Bacillus subtilis, как описано в примере 34. Гибридные конструкции синтезировали, используя нативный для белка экзоспория промотор, указанный ниже в таблице 27, клонировали в репликативную плазмиду рМК4 и вводили в Bacillus thuringiensis ВТ013А. Споры, выявляющие различные гибриды белка экзоспория-липазы Bacillus subtilis 168, были получены путем выращивания трансформированных бактерий в бульоне с сердечно-мозговой вытяжкой при селективном давлении 10 мкг/мл хлорамфеникола, высеванием на чашки с питательной агаризированной средой и инкубированием при 30°С в течение 3 дней. После 3 дней споры смывали с чашек, очищали центрифугированием и ресуспендировали в натрий-фосфатном буфере до 1×108 КОЕ/мл.
[00290] 1×105 спор для каждой гибридной конструкции суспендировали в 400 мкл дистилированной Н2О. Реакционные смеси нагревались реакционными компонентами до желаемой температуры реакции (40°С). Добавляли 200 мкл рабочего буфера (9:1 раствор А: раствор Б). Раствор А содержал 50 мМ Трис рН 10 и 13,6 мМ деоксихолевую кислоту, а раствор Б содержал 3 мг/мл р-нитрофенил пальмитат в изопропаноле. Реакционную смесь инкубировали при 40°С в течение 10 минут и помещали в лед, центрифугировали для удаления спор, и регистрировали оптическую плотность при 420 нм. Результаты показаны ниже в таблице 27. Активность была нормирована по SEQ ID №: 72, связанному с липазой.
[00291] Использование белков экзоспория из SEQ ID №№72 и 73 привело в результате к самой высокой активности фермента на споре. Все гибридные белки, содержащие белки экзоспория, в результате выявляли на поверхности активную липазу Bacillus subtilis 168, хотя на различных уровнях.
[00292] С использованием флуоресцентного репортера mCherry было показано, что дополнительные белки экзоспория в результате направляли гибридные белки в экзоспорий. Были созданы гибридные конструкции, включающие белки экзоспория из SEQ ID №№74, 83 и 73, присоединенные к репортеру mCherry. Споры выращивали в течение 1,5 дня, собирали и ресуспендировали, как описано ранее. 7 мкл флуоресцентных спор клали под микроскоп Nikon E1000 и делали изображения во время поздней споруляции. Круговая локализация в кольце указывает на локализацию внешнего слоя споры, а проявление соответствует белку экзоспория. Результаты флуоресцентной микроскопии проиллюстрированы на фигуре 2. Фиг. 2А, 2Б и 2В представляют собой изображения флуоресцентной микроскопии спор, экспрессирующих гибридные белки, содержащие белки экзоспория из SEQ ID №№74, 83 и 73, соответственно, и репортер mCherry. Все три гибрида продемонстрировали высокий уровень флуоресценции и локализации на экзоспорий, демонстрируя свою потенциальную полезность для экспрессии чужеродных белков на поверхности экзоспория.
Пример 36. Использование различных сигнальных последовательностей и белков экзоспория для экспрессии фосфатазы в спорах Bacillus subtilis, и воздействия спор, содержащих фосфатазу, в сое.
[00293] ВЭВ споры, экспрессирующие фосфатазу А4 (PhoA4) Bacillus subtilis ЕЕ148, были созданы путем генного синтеза генов, кодирующих различные сигнальные последовательности и белки экзоспория под контролем нативных промоторов, связанных с PhoA4. Синтезированные гены были клонированы в рМК4 и введены в Bacillus thuringiensis ВТ013А. Споры, выявляющие различные гибриды белка экзоспория-PhoA4 Bacillus subtilis ЕЕ148, были получены путем выращивания трансформированных бактерий в бульоне с сердечно-мозговой вытяжкой при селективном давлении 10 мкг/мл хлорамфеникола, высеванием на чашки с питательной агаризированной средой и инкубированием при 30°С в течение 3 дней. После 3 дней споры смывали с чашек, очищали центрифугированием и ресуспендировали в натрий-фосфатном буфере до 1×108 КОЕ/мл.
[00294] Сою сажали на глубину 2,54 см в горшки глубиной 10 см, наполненные стандартным суглинистым верхним слоем почвы. ВЭВ споры, экспрессирующие PhoA4, разводили до концентрации 1×104/мл в 50 мл воды и применяли к каждому растению при посадке. Также включали контроль только с водой. Полифосфат добавляли в горшки в форме жидкости в рассчете 0,5 мг/горшок. Растения выращивали при идеальном освещении, используя лампы Т5, 54 Вт, и 13-часовой световой экспозиции в день, при контролируемых температурных условиях в пределах 15,5-25,5°С. Растения поливали до насыщения каждые три дня в течение двухнедельного испытания. По окончанию двух недель измеряли высоту каждого растения, и измерения были нормированы по контролю растения только с водой.
[00295] Результаты приведены в таблице 28. Сою выращивали в присутствии ВЭВ спор, экспрессирующих гибридные белки, содержащие PhoA4, связанную с различными сигнальными последовательностями, и белки экзоспория с различными партнерами слияния, с PhoA4 все демонстрировали усиленный рост, но продолжительность влияния варьировала в зависимости от используемой сигнальной последовательности или белка экзоспория.
Пример 37. Совместное применение ВЭВ спор с обработками семян, жидкими удобрениями и другими добавками.
[00296] ВЭВ споры, экспрессирующие гибридные белки, тестировали на совместимость с различными обработками семян. ВЭВ споры экспрессировали гибридные белки, содержащие сигнальную последовательность аминокислот 1-35 SEQ ID №: 1, связанную с фосфатазой (PhoA4) из Bacillus subtilis ЕЕ148 или пептидом POLARIS. Синтезированные гены клонировали в рМК4 и вводили в Bacillus thuringiensis ВТ013А. Споры, выявляющие различные гибриды белка экзоспория-РhоА4 Bacillus subtilis ЕЕ148 или POLARIS, были получены путем выращивания трансформированных бактерий в бульоне с сердечно-мозговой вытяжкой при селективном давлении от 10 мкг/мл хлорамфеникола, высеванием на чашки с питательной агаризированной средой и инкубированием при 30°С в течение 3 дней. После 3 дней споры смывали с чашек, очищали центрифугированием и ресуспендировали в натрий-фосфатном буфере до 1×108 КОЕ/мл.
[00297] Растения выращивали при идеальном освещении, используя лампы Т5, 54 Вт, и 13-часовой световой экспозиции в день, при контролируемых температурных условиях в пределах 15,5-25,5°С. Растения поливали до насыщения каждые три дня в течение двухнедельного испытания. По окончанию двух недель измеряли высоту каждого растения, и измерения были нормированы по контролю растений только с водой. Результаты показаны ниже в таблице 29. Смачивание = применялось к почве по 50 мл на горшок. Полимер = только полимер ACCELERON для покрытия семян. ВЭВ споры в количестве 1×104 клеток/50 мл добавляли для смачивания. ВЭВ споры в количестве 1,3×104/клетки/семя добавляли для покрытия семян. 10-34-0 и 6-24-6 представляют собой стандартные коммерческие стартовые композиции удобрений. 10-34-0 представляет собой жидкий фосфат аммония. 6-24-6 представляет собой слабосолевое жидкбе фосфатное удобрение с орто/поли композицией. Краситель = Becker Underwood, красный, краситель для покрытия семян. MACHO, APRON и CRUISER представляют собой коммерческие фунгициды, используемые для семян. МАСНО содержит активный ингредиент имидаклоприд, APRON содержит активный ингредиент мефеноксам, и CRUISER содержит смесь активных ингредиентов тиаметоксама, мефеноксама и флудиоксонила. Было обнаружено, что споры совместимы со многими обработками семян и сохраняли способность стимулировать рост растений кукурузы.
[00298] Было обнаружено, что ВЭВ споры совместимы со всеми тестируемыми веществами для покрытия семян. Показано незначительное снижение активности, когда ВЭВ PhA4 споры сочетались только с красителем и полимером, но споры восстанавливали полноценную активность с красителем в комбинации с другими фунгицидами. ВЭВ споры также хорошо работали с жидкими удобрениями. Наиболее вероятно, что стартовые удобрения способствовали росту растений через непосредственное дополнение питательных веществ. ВЭВ споры работали с обоими стартовыми удобрениями, предполагая, что активность фосфатазы все еще может приводить к увеличению роста растений в присутствии избытка питательных веществ. Комбинации ВЭВ спор с фунгицидами представляли большее увеличение роста растений, чем только ВЭВ споры, что, похоже, связано с защитой, обеспечиваемой молодым растениям кукурузы на ранних этапах роста.
Пример 38. Использование ВЭВ спор, как добавку для листьев для уменьшения ингибирования роста во время стресса, на кукурузе.
[00299] Система выявления ВЭВ спор может быть использована для доставки ферментов, способных облегчать воздействие некоторых стрессовых факторов на растущие в поле или теплице растения. Для достижения этого выбирали ферменты, избирательно действующие на активные формы кислорода в почве. Активные формы кислорода являются основными маркерами стресса у растений.
[00300] Были получены ВЭВ споры, экспрессирующие гибридные белки, содержащие сигнальную последовательность аминокислот 1-35 из SEQ ID №: 1, связанную с хитозиназой, супероксиддисмутазой, каталазой или β-1,3-глюканазой из Bacillus thuringiensis ВТ013А. Синтезированные гены клонировали в рМК4 и вводили в Bacillus thuringiensis ВТ013А. Споры, выявляющие различные гибридные белки, были получены путем выращивания трансформированных бактерий в бульоне с сердечно-мозговой вытяжкой при селективном давлении 10 мкг/мл хлорамфеникола, высеванием на чашки с питательной агаризированной средой и инкубированием при 30°С в течение 3 дней. После 3 дней споры смывали с чашек, очищали центрифугированием и ресуспендировали в натрий-фосфатном буфере до 1×108 КОЕ/мл.
[00301] Трехнедельные растения кукурузы на стадии V5 выращивали при идеальном освещении, используя лампы Т5, 54 Вт, и 13-часовой световой экспозиции в день, при контролируемых температурных условиях в пределах 15,5-25,5°С. Растения поливали до насыщения каждые три дня в течение всего испытания. Когда растения достигали стадии V5, ВЭВ споры или положительные контрольные химикаты распыляли на листья либо 1×105 ВЭВ спор/мл, либо в рекомендуемых дозах для химических реагентов. Для каждого индивидуального растения применяли 1 мл расплытеля. Высоту растений измеряли непосредственно перед нанесением листовых распылителей. Затем растения кукурузы подвергали тепловому стрессу при 32,2°С и уменьшали полив до одного раза в неделю. Растения содержали в стрессовых условиях в течение двух недель. По окончанию двух недель снова измеряли высоту растений и регистрировали внешние проявления. В этих стрессовых условиях рост растений при контрольных обработках был минимальным. Способность расти в стрессовых условиях оценивали по увеличению высоты растения в течение двухнедельного промежутка по сравнению с контролем, обработанным только водой. Результаты показаны ниже в таблице 30.
[00302] Несколько противострессовых ферментов применяли для кукурузы, используя систему ВЭВ, как показано ранее в таблице 30. Контольные споры не оказали существенного влияния (снижение высоты растений -1,6%). ВЭВ фермент хитозиназа оказал положительное влияние в сочетании со своим субстратом хитозаном. Двумя наиболее показательными ферментами были ВЭВ β-1,3-глюканаза и ВЭВ супероксиддисмутаза. ВЭВ β-1,3-глюканаза обладает, в первую очередь, противогрибковой активностью, но также может непосредственно влиять на растения. Салициловая кислота и БТД служили положительными контролями анализа листьев и положительные ответы были отмечены для обоих. Этот способ переноса на листья может быть использован для доставки противострессовых ферментов растениям в разное сезонное время.
Пример 39. Уровни экспрессии гибридных белков с использованием различных промоторов, содержащих сигма-К.
[00303] Как показано ранее в примере 23, замена нативного промотора сигнальной последовательности, белка экзоспория или фрагмента белка экзоспория может существенно повлиять на уровень гибридного белка, экспрессируемого на экзоспории споры семейства Bacillus cereus. Например, замена нативного промотора BclA на промотор BclB значительно снижает уровень гибридного белка на поверхности спор члена семейства Bacillus cereus. В альтернативном варианте замена нативного промотор BclB на промотор BclA существенно повышает уровни гибридного белка на экзоспории.
[00304] Относительные уровни экспрессионной активности промотора для различных белков экзоспория под контролем нативных промоторов споруляции были получены по данным микрочипов из Bergman et al., 2008. Относительные уровни экспрессии определяли во время поздней стадии споруляции (300 минут после начала эксперимента), когда сигма К промоторы наиболее активны. Сигма К промоторы являются основными промоторами при экспрессии генов локализации в экзоспорий и ассоциированных белков. Относительная экспрессия представляет собой увеличение уровня экспрессии гена по сравнению со средним показателем всех других генов хромосомы на всех заданных временных точках. Таблица 31 ниже показывает относительные уровни экспрессии различных генов под контролем сигма К у членов семейства Bacillus cereus.
[00305] В свете вышеизложенного, будет видно, что достигнуто несколько объектов изобретения и достигнуты другие полезные результаты.
[00306] Поскольку различные изменения могут быть произведены в указанных ранее гибридных белках, членах семейства Bacillus cereus, препаратах и способах, без отклонения от объема изобретения, поразумевается, что весь материал, содержащийся в приведенном ранее описании и проиллюстрированный в прилагаемых графических материалах, должен быть интерпретирован в иллюстративном, а не в ограничивающем смысле.
Claims (798)
1. Способ стимулирования роста растений, включающий введение рекомбинантной бактерии группы Bacillus cereus, экспрессирующей гибридный белок в среде для роста растений, или применение рекомбинантной бактерии группы Bacillus cereus, экспрессирующей гибридный белок, к растению, семени растения или области, окружающей растение или семя растения, причем гибридный белок включает:
белок или пептид, стимулирующий рост растения, где белок или пептид, стимулирующий рост растения, включает:
пептидный гормон, включающий фитосульфокин, clavata 3 (CLV3), системин, ZmlGF или SCR/SP11;
негормональный пептид, включающий RKN 16D10, Hg-Syv46, eNOD40 пептид, мелиттин, мастопаран, Mas7, RHPP, POLARIS или ингибитор трипсина Кунитца (ИТК);
фермент, участвующий в продуцировании или активации соединения, стимулирующего рост растения, где фермент включает ацетоинредуктазу, индол-3-ацетамидгидролазу, триптофанмонооксигеназу, ацетолактатсинтетазу, α-ацетолактатдекарбоксилазу, пируватдекарбоксилазу, диацетилредуктазу, бутандиолдегидрогеназу, аминотрансферазу, триптофандекарбоксилазу, аминоксидазу, индол-3-пируватдекарбоксилазу, индол-3-ацетальдегид-дегидрогеназу, триптофан боковой цепи-оксидазу, нитрилгидролазу, нитрилазу, пептидазу, протеазу, аденозинфосфат-изопентилтрансферазу, фосфатазу, аденозинкиназу, аденин-фосфорибозилтрансферазу, CYP735A, 5’-рибонуклеотид-фосфогидролазу, аденозин-нуклеозидазу, зеатин-цис-транс-изомеразу, зеатин-О-глюкозилтрансферазу, β-глюкозидазу, цис-гидроксилазу, ЦK-цис-гидроксилазу, ЦК-N-глюкозилтрансферазу, 2,5-рибонуклеотид-фосфогидролазу, аденозин-нуклеозидазу, пурин-нуклеозидфосфорилазу, зеатинредуктазу, гидроксиламинредуктазу, 2-оксоглутаратдиоксигеназу, гибберелловую-2В/3В-гидролазу, гиббереллин-3-оксидазу, гиббереллин-20-оксидазу, хитозаназу, хитиназу, β-1,3-глюканазу, β-1,4-глюканазу, β-1,6-глюканазу или аминоциклопропан-1-карбоновой кислоты-деаминазу;
фермент, разрушающий или модифицирующий бактериальный, грибковый или растительный источник питательных веществ, включающий целлюлазу, липазу, лигниноксидазу, протеазу, гликозидгидролазу, фосфатазу, нитрогеназу, нуклеазу, амидазу, нитратредуктазу, нитритредуктазу, амилазу, аммоний-оксидазу, лигниназу, глюкозидазу, фосфолипазу, фитазу, пектиназу, глюканазу, сульфатазу, уреазу или ксиланазу; или
белок флагеллин или пептид флагеллина; и
сигнальную последовательность, белок экзоспория или фрагмент белка экзоспория, где сигнальную последовательность, белок экзоспория или фрагмент белка экзоспория выбирают из группы, состоящей из:
(a) сигнальной последовательности, содержащей аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере примерно 43% идентичность аминокислотам 20–35 последовательности SEQ ID NO: 1, где идентичность аминокислотам 25–35 составляет по меньшей мере примерно 54%;
(b) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–35 последовательности SEQ ID NO: 1;
(c) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 20–35 последовательности SEQ ID NO: 1;
(d) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 1;
(e) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 2;
(f) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–27 последовательности SEQ ID NO: 3;
(g) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 12–27 последовательности SEQ ID NO: 3;
(h) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 3;
(i) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 4;
(j) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–38 последовательности SEQ ID NO: 5;
(k) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 23–38 последовательности SEQ ID NO: 5;
(l) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 5;
(m) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 6;
(n) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–28 последовательности SEQ ID NO: 7;
(o) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 13–28 последовательности SEQ ID NO: 7;
(p) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 7;
(q) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 8;
(r) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–24 последовательности SEQ ID NO: 9;
(s) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 9–24 последовательности SEQ ID NO: 9;
(t) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 9;
(u) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 10;
(v) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–33 последовательности SEQ ID NO: 11;
(w) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 18–33 последовательности SEQ ID NO: 11;
(x) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 11;
(y) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 12;
(z) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–33 последовательности SEQ ID NO: 13;
(aa) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 18–33 последовательности SEQ ID NO: 13;
(ab) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 13;
(ac) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 14;
(ad) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–43 последовательности SEQ ID NO: 15;
(ae) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 28–43 последовательности SEQ ID NO: 15;
(af) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 15;
(ag) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 16;
(ah) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–27 последовательности SEQ ID NO: 17;
(ai) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 12–27 последовательности SEQ ID NO: 17;
(aj) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 17;
(ak) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 18;
(al) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–33 последовательности SEQ ID NO: 19;
(am) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 18–33 последовательности SEQ ID NO: 19;
(an) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 19;
(ao) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 20;
(ap) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–33 последовательности SEQ ID NO: 21;
(aq) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 18–33 последовательности SEQ ID NO: 21;
(ar) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 21;
(as) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 22;
(at) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–24 последовательности SEQ ID NO: 23;
(au) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 9–24 последовательности SEQ ID NO: 23;
(av) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 23;
(aw) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 24;
(ax) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–24 последовательности SEQ ID NO: 25;
(ay) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 9–24 последовательности SEQ ID NO: 25;
(az) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 25;
(ba) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 26;
(bb) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–30 последовательности SEQ ID NO: 27;
(bc) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 15–30 последовательности SEQ ID NO: 27;
(bd) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 27;
(be) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 28;
(bf) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–33 последовательности SEQ ID NO: 29;
(bg) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 18–33 последовательности SEQ ID NO: 29;
(bh) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 29;
(bi) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 30;
(bj) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–24 последовательности SEQ ID NO: 31;
(bk) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 9–24 последовательности SEQ ID NO: 31;
(bl) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 31;
(bm) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 32;
(bn) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–15 последовательности SEQ ID NO: 33;
(bo) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 33;
(bp) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 34;
(bq) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–16 последовательности SEQ ID NO: 35;
(br) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 35;
(bs) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 36;
(bt) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–29 последовательности SEQ ID NO: 43;
(bu) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 14–29 последовательности SEQ ID NO: 43;
(bv) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 43;
(bw) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 44;
(bx) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–35 последовательности SEQ ID NO: 45;
(by) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 20–35 последовательности SEQ ID NO: 45;
(bz) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 45;
(ca) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 46;
(cb) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–43 последовательности SEQ ID NO: 47;
(cc) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 28–43 последовательности SEQ ID NO: 47;
(cd) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 47;
(ce) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 48;
(cf) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–32 последовательности SEQ ID NO: 49;
(cg) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 17–32 последовательности SEQ ID NO: 49;
(ch) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 49;
(ci) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 50;
(cj) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–33 последовательности SEQ ID NO: 51;
(ck) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 18–33 последовательности SEQ ID NO: 51;
(cl) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 51;
(cm) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 52;
(cn) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–33 последовательности SEQ ID NO: 53;
(co) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 18–33 последовательности SEQ ID NO: 53;
(cp) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 53;
(cq) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 54;
(cr) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–30 последовательности SEQ ID NO: 55;
(cs) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 15–30 последовательности SEQ ID NO: 55;
(ct) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 55;
(cu) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 56;
(cv) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–130 последовательности SEQ ID NO: 57;
(cw) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 115–130 последовательности SEQ ID NO: 57;
(cx) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 57;
(cy) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 58;
(cz) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 59;
(da) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 60;
(db) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 61;
(dc) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 62;
(dd) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 63;
(de) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 64;
(df) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 65;
(dg) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 66;
(dh) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 67;
(di) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 68;
(dj) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 69;
(dk) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 70;
(dl) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 71;
(dm) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 72;
(dn) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 73;
(do) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 74;
(dp) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 76;
(dq) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 77;
(dr) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 80;
(ds) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 81;
(dt) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 83;
(du) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 84;
(dv) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 22–31 последовательности SEQ ID NO: 1;
(dw) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 22–33 последовательности SEQ ID NO: 1;
(dx) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 20–31 последовательности SEQ ID NO: 1;
(dy) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 14–23 последовательности SEQ ID NO: 3;
(dz) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 14–25 последовательности SEQ ID NO: 3; или
(ea) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 12–23 последовательности SEQ ID NO: 3.
2. Семя растения, покрытое препаратом для покрытия семян, содержащим рекомбинантную бактерию группы Bacillus cereus и сельскохозяйственно-приемлемый носитель, где указанное семя применяют для получения растения, имеющего повышенный рост по сравнению с ростом растения, выращенного из семени, не покрытого препаратом для покрытия семян, и где рекомбинантная бактерия группы Bacillus cereus содержит вектор или модифицированную хромосомную ДНК, кодирующую гибридный белок, где рекомбинантная бактерия группы Bacillus cereus экспрессирует гибридный белок, и гибридный белок включает:
белок или пептид, стимулирующий рост растения, где белок или пептид, стимулирующий рост растения, включает:
пептидный гормон, включающий фитосульфокин, clavata 3 (CLV3), системин, ZmlGF или SCR/SP11;
негормональный пептид, включающий RKN 16D10, Hg-Syv46, eNOD40 пептид, мелиттин, мастопаран, Mas7, RHPP, POLARIS или ингибитор трипсина Кунитца (ИТК);
фермент, участвующий в продуцировании или активации соединения, стимулирующего рост растения, где фермент включает ацетоинредуктазу, индол-3-ацетамидгидролазу, триптофанмонооксигеназу, ацетолактатсинтетазу, α-ацетолактатдекарбоксилазу, пируватдекарбоксилазу, диацетилредуктазу, бутандиолдегидрогеназу, аминотрансферазу, триптофандекарбоксилазу, аминоксидазу, индол-3-пируватдекарбоксилазу, индол-3-ацетальдегид-дегидрогеназу, триптофан боковой цепи-оксидазу, нитрилгидролазу, нитрилазу, пептидазу, протеазу, аденозинфосфат-изопентилтрансферазу, фосфатазу, аденозинкиназу, аденин-фосфорибозилтрансферазу, CYP735A, 5’-рибонуклеотид-фосфогидролазу, аденозин-нуклеозидазу, зеатин-цис-транс-изомеразу, зеатин-О-глюкозилтрансферазу, β-глюкозидазу, цис-гидроксилазу, ЦK-цис-гидроксилазу, ЦК-N-глюкозилтрансферазу, 2,5-рибонуклеотид-фосфогидролазу, аденозин-нуклеозидазу, пурин-нуклеозидфосфорилазу, зеатинредуктазу, гидроксиламинредуктазу, 2-оксоглутаратдиоксигеназу, гибберелловую-2В/3В-гидролазу, гиббереллин-3-оксидазу, гиббереллин-20-оксидазу, хитозаназу, хитиназу, β-1,3-глюканазу, β-1,4-глюканазу, β-1,6-глюканазу или аминоциклопропан-1-карбоновой кислоты-деаминазу;
фермент, разрушающий или модифицирующий бактериальный, грибковый или растительный источник питательных веществ, включающий целлюлазу, липазу, лигниноксидазу, протеазу, гликозидгидролазу, фосфатазу, нитрогеназу, нуклеазу, амидазу, нитратредуктазу, нитритредуктазу, амилазу, аммоний-оксидазу, лигниназу, глюкозидазу, фосфолипазу, фитазу, пектиназу, глюканазу, сульфатазу, уреазу или ксиланазу;
белок флагеллин или пептид флагеллина; и
сигнальную последовательность, белок экзоспория или фрагмент белка экзоспория, где сигнальную последовательность, белок экзоспория или фрагмент белка экзоспория выбирают из группы, состоящей из:
(a) сигнальной последовательности, содержащей аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере примерно 43% идентичность аминокислотам 20–35 последовательности SEQ ID NO: 1, где идентичность аминокислотам 25–35 составляет по меньшей мере примерно 54%;
(b) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–35 последовательности SEQ ID NO: 1;
(c) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 20–35 последовательности SEQ ID NO: 1;
(d) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 1;
(e) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 2;
(f) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–27 последовательности SEQ ID NO: 3;
(g) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 12–27 последовательности SEQ ID NO: 3;
(h) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 3;
(i) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 4;
(j) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–38 последовательности SEQ ID NO: 5;
(k) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 23–38 последовательности SEQ ID NO: 5;
(l) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 5;
(m) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 6;
(n) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–28 последовательности SEQ ID NO: 7;
(o) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 13–28 последовательности SEQ ID NO: 7;
(p) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 7;
(q) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 8;
(r) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–24 последовательности SEQ ID NO: 9;
(s) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 9–24 последовательности SEQ ID NO: 9;
(t) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 9;
(u) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 10;
(v) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–33 последовательности SEQ ID NO: 11;
(w) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 18–33 последовательности SEQ ID NO: 11;
(x) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 11;
(y) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 12;
(z) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–33 последовательности SEQ ID NO: 13;
(aa) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 18–33 последовательности SEQ ID NO: 13;
(ab) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 13;
(ac) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 14;
(ad) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–43 последовательности SEQ ID NO: 15;
(ae) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 28–43 последовательности SEQ ID NO: 15;
(af) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 15;
(ag) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 16;
(ah) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–27 последовательности SEQ ID NO: 17;
(ai) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 12–27 последовательности SEQ ID NO: 17;
(aj) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 17;
(ak) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 18;
(al) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–33 последовательности SEQ ID NO: 19;
(am) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 18–33 последовательности SEQ ID NO: 19;
(an) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 19;
(ao) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 20;
(ap) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–33 последовательности SEQ ID NO: 21;
(aq) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 18–33 последовательности SEQ ID NO: 21;
(ar) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 21;
(as) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 22;
(at) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–24 последовательности SEQ ID NO: 23;
(au) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 9–24 последовательности SEQ ID NO: 23;
(av) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 23;
(aw) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 24;
(ax) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–24 последовательности SEQ ID NO: 25;
(ay) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 9–24 последовательности SEQ ID NO: 25;
(az) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 25;
(ba) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 26;
(bb) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–30 последовательности SEQ ID NO: 27;
(bc) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 15–30 последовательности SEQ ID NO: 27;
(bd) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 27;
(be) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 28;
(bf) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–33 последовательности SEQ ID NO: 29;
(bg) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 18–33 последовательности SEQ ID NO: 29;
(bh) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 29;
(bi) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 30;
(bj) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–24 последовательности SEQ ID NO: 31;
(bk) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 9–24 последовательности SEQ ID NO: 31;
(bl) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 31;
(bm) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 32;
(bn) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–15 последовательности SEQ ID NO: 33;
(bo) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 33;
(bp) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 34;
(bq) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–16 последовательности SEQ ID NO: 35;
(br) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 35;
(bs) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 36;
(bt) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–29 последовательности SEQ ID NO: 43;
(bu) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 14–29 последовательности SEQ ID NO: 43;
(bv) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 43;
(bw) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 44;
(bx) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–35 последовательности SEQ ID NO: 45;
(by) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 20–35 последовательности SEQ ID NO: 45;
(bz) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 45;
(ca) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 46;
(cb) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–43 последовательности SEQ ID NO: 47;
(cc) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 28–43 последовательности SEQ ID NO: 47;
(cd) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 47;
(ce) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 48;
(cf) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–32 последовательности SEQ ID NO: 49;
(cg) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 17–32 последовательности SEQ ID NO: 49;
(ch) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 49;
(ci) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 50;
(cj) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–33 последовательности SEQ ID NO: 51;
(ck) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 18–33 последовательности SEQ ID NO: 51;
(cl) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 51;
(cm) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 52;
(cn) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–33 последовательности SEQ ID NO: 53;
(co) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 18–33 последовательности SEQ ID NO: 53;
(cp) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 53;
(cq) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 54;
(cr) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–30 последовательности SEQ ID NO: 55;
(cs) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 15–30 последовательности SEQ ID NO: 55;
(ct) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 55;
(cu) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 56;
(cv) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–130 последовательности SEQ ID NO: 57;
(cw) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 115–130 последовательности SEQ ID NO: 57;
(cx) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 57;
(cy) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 58;
(cz) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 59;
(da) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 60;
(db) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 61;
(dc) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 62;
(dd) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 63;
(de) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 64;
(df) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 65;
(dg) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 66;
(dh) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 67;
(di) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 68;
(dj) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 69;
(dk) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 70;
(dl) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 71;
(dm) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 72;
(dn) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 73;
(do) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 74;
(dp) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 76;
(dq) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 77;
(dr) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 80;
(ds) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 81;
(dt) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 83;
(du) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 84;
(dv) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 22–31 последовательности SEQ ID NO: 1;
(dw) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 22–33 последовательности SEQ ID NO: 1;
(dx) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 20–31 последовательности SEQ ID NO: 1;
(dy) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 14–23 последовательности SEQ ID NO: 3;
(dz) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 14–25 последовательности SEQ ID NO: 3; или
(ea) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 12–23 последовательности SEQ ID NO: 3.
3. Рекомбинантная бактерия группы Bacillus cereus для стимулирования роста растения, где рекомбинантная бактерия группы Bacillus cereus, содержащая вектор или модифицированную хромосомную ДНК, кодирующую гибридный белок, где рекомбинантная бактерия группы Bacillus cereus экспрессирует гибридный белок и где гибридный белок включает:
эндоглюканазу, фосфолипазу, хитозаназа, протеазу, гликозидгидролазу, фосфатазу, нитрогеназу, нуклеазу, амидазу, нитратредуктазу, нитритредуктазу, аммоний-оксидазу, глюкозидазу, фитазу, пектиназу, глюканазу, сульфатазу, уреазу или ксиланазу и сигнальную последовательность, белок экзоспория или фрагмент белка экзоспория, где сигнальную последовательность, белок экзоспория или фрагмент белка экзоспория выбирают из группы, состоящей из:
(a) сигнальной последовательности, содержащей аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере примерно 43% идентичность аминокислотам 20–35 последовательности SEQ ID NO: 1, где идентичность аминокислотам 25–35 составляет по меньшей мере примерно 54%;
(b) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–35 последовательности SEQ ID NO: 1;
(c) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 20–35 последовательности SEQ ID NO: 1;
(d) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 1;
(e) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 2;
(f) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–27 последовательности SEQ ID NO: 3;
(g) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 12–27 последовательности SEQ ID NO: 3;
(h) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 3;
(i) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 4;
(j) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–38 последовательности SEQ ID NO: 5;
(k) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 23–38 последовательности SEQ ID NO: 5;
(l) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 5;
(m) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 6;
(n) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–28 последовательности SEQ ID NO: 7;
(o) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 13–28 последовательности SEQ ID NO: 7;
(p) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 7;
(q) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 8;
(r) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–24 последовательности SEQ ID NO: 9;
(s) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 9–24 последовательности SEQ ID NO: 9;
(t) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 9;
(u) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 10;
(v) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–33 последовательности SEQ ID NO: 11;
(w) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 18–33 последовательности SEQ ID NO: 11;
(x) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 11;
(y) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 12;
(z) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–33 последовательности SEQ ID NO: 13;
(aa) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 18–33 последовательности SEQ ID NO: 13;
(ab) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 13;
(ac) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 14;
(ad) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–43 последовательности SEQ ID NO: 15;
(ae) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 28–43 последовательности SEQ ID NO: 15;
(af) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 15;
(ag) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 16;
(ah) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–27 последовательности SEQ ID NO: 17;
(ai) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 12–27 последовательности SEQ ID NO: 17;
(aj) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 17;
(ak) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 18;
(al) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–33 последовательности SEQ ID NO: 19;
(am) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 18–33 последовательности SEQ ID NO: 19;
(an) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 19;
(ao) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 20;
(ap) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–33 последовательности SEQ ID NO: 21;
(aq) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 18–33 последовательности SEQ ID NO: 21;
(ar) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 21;
(as) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 22;
(at) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–24 последовательности SEQ ID NO: 23;
(au) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 9–24 последовательности SEQ ID NO: 23;
(av) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 23;
(aw) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 24;
(ax) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–24 последовательности SEQ ID NO: 25;
(ay) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 9–24 последовательности SEQ ID NO: 25;
(az) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 25;
(ba) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 26;
(bb) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–30 последовательности SEQ ID NO: 27;
(bc) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 15–30 последовательности SEQ ID NO: 27;
(bd) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 27;
(be) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 28;
(bf) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–33 последовательности SEQ ID NO: 29;
(bg) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 18–33 последовательности SEQ ID NO: 29;
(bh) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 29;
(bi) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 30;
(bj) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–24 последовательности SEQ ID NO: 31;
(bk) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 9–24 последовательности SEQ ID NO: 31;
(bl) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 31;
(bm) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 32;
(bn) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–15 последовательности SEQ ID NO: 33;
(bo) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 33;
(bp) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 34;
(bq) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–16 последовательности SEQ ID NO: 35;
(br) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 35;
(bs) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 36;
(bt) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–29 последовательности SEQ ID NO: 43;
(bu) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 14–29 последовательности SEQ ID NO: 43;
(bv) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 43;
(bw) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 44;
(bx) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–35 последовательности SEQ ID NO: 45;
(by) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 20–35 последовательности SEQ ID NO: 45;
(bz) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 45;
(ca) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 46;
(cb) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–43 последовательности SEQ ID NO: 47;
(cc) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 28–43 последовательности SEQ ID NO: 47;
(cd) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 47;
(ce) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 48;
(cf) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–32 последовательности SEQ ID NO: 49;
(cg) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 17–32 последовательности SEQ ID NO: 49;
(ch) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 49;
(ci) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 50;
(cj) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–33 последовательности SEQ ID NO: 51;
(ck) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 18–33 последовательности SEQ ID NO: 51;
(cl) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 51;
(cm) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 52;
(cn) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–33 последовательности SEQ ID NO: 53;
(co) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 18–33 последовательности SEQ ID NO: 53;
(cp) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 53;
(cq) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 54;
(cr) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–30 последовательности SEQ ID NO: 55;
(cs) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 15–30 последовательности SEQ ID NO: 55;
(ct) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 55;
(cu) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 56;
(cv) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–130 последовательности SEQ ID NO: 57;
(cw) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 115–130 последовательности SEQ ID NO: 57;
(cx) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 57;
(cy) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 58;
(cz) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 59;
(da) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 60;
(db) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 61;
(dc) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 62;
(dd) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 63;
(de) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 64;
(df) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 65;
(dg) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 66;
(dh) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 67;
(di) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 68;
(dj) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 69;
(dk) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 70;
(dl) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 71;
(dm) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 72;
(dn) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 73;
(do) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 74;
(dp) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 76;
(dq) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 77;
(dr) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 80;
(ds) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 81;
(dt) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 83;
(du) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 84;
(dv) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 22–31 последовательности SEQ ID NO: 1;
(dw) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 22–33 последовательности SEQ ID NO: 1;
(dx) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 20–31 последовательности SEQ ID NO: 1;
(dy) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 14–23 последовательности SEQ ID NO: 3;
(dz) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 14–25 последовательности SEQ ID NO: 3; или
(ea) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 12–23 последовательности SEQ ID NO: 3.
4. Гибридный белок для стимуляции роста растения, где гибридный белок включает
белок или пептид, стимулирующий рост растения, где белок или пептид, стимулирующий рост растения, включает:
пептидный гормон, включающий фитосульфокин, clavata 3 (CLV3), системин, ZmlGF или SCR/SP11;
негормональный пептид, включающий RKN 16D10, Hg-Syv46, eNOD40 пептид, мелиттин, мастопаран, Mas7, RHPP, POLARIS или ингибитор трипсина Кунитца (ИТК);
фермент, участвующий в продуцировании или активации соединения, стимулирующего рост растения, где фермент включает ацетоинредуктазу, индол-3-ацетамидгидролазу, триптофанмонооксигеназу, ацетолактатсинтетазу, α-ацетолактатдекарбоксилазу, пируватдекарбоксилазу, диацетилредуктазу, бутандиолдегидрогеназу, аминотрансферазу, триптофандекарбоксилазу, аминоксидазу, индол-3-пируватдекарбоксилазу, индол-3-ацетальдегид-дегидрогеназу, триптофан боковой цепи-оксидазу, нитрилгидролазу, нитрилазу, пептидазу, протеазу, аденозинфосфат-изопентилтрансферазу, фосфатазу, аденозинкиназу, аденин-фосфорибозилтрансферазу, CYP735A, 5’-рибонуклеотид-фосфогидролазу, аденозин-нуклеозидазу, зеатин-цис-транс-изомеразу, зеатин-О-глюкозилтрансферазу, β-глюкозидазу, цис-гидроксилазу, ЦK-цис-гидроксилазу, ЦК-N-глюкозилтрансферазу, 2,5-рибонуклеотид-фосфогидролазу, аденозин-нуклеозидазу, пурин-нуклеозидфосфорилазу, зеатинредуктазу, гидроксиламинредуктазу, 2-оксоглутаратдиоксигеназу, гибберелловую-2В/3В-гидролазу, гиббереллин-3-оксидазу, гиббереллин-20-оксидазу, хитозаназу, хитиназу, β-1,3-глюканазу, β-1,4-глюканазу, β-1,6-глюканазу или аминоциклопропан-1-карбоновой кислоты-деаминазу; или
белок флагеллин или пептид флагеллина; и
сигнальную последовательность, белок экзоспория или фрагмент белка экзоспория, где сигнальную последовательность, белок экзоспория или фрагмент белка экзоспория выбирают из группы, состоящей из:
(a) сигнальной последовательности, содержащей аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере примерно 43% идентичность аминокислотам 20–35 последовательности SEQ ID NO: 1, где идентичность аминокислотам 25–35 составляет по меньшей мере примерно 54%;
(b) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–35 последовательности SEQ ID NO: 1;
(c) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 20–35 последовательности SEQ ID NO: 1;
(d) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 1;
(e) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 2;
(f) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–27 последовательности SEQ ID NO: 3;
(g) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 12–27 последовательности SEQ ID NO: 3;
(h) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 3;
(i) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 4;
(j) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–38 последовательности SEQ ID NO: 5;
(k) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 23–38 последовательности SEQ ID NO: 5;
(l) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 5;
(m) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 6;
(n) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–28 последовательности SEQ ID NO: 7;
(o) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 13–28 последовательности SEQ ID NO: 7;
(p) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 7;
(q) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 8;
(r) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–24 последовательности SEQ ID NO: 9;
(s) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 9–24 последовательности SEQ ID NO: 9;
(t) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 9;
(u) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 10;
(v) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–33 последовательности SEQ ID NO: 11;
(w) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 18–33 последовательности SEQ ID NO: 11;
(x) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 11;
(y) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 12;
(z) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–33 последовательности SEQ ID NO: 13;
(aa) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 18–33 последовательности SEQ ID NO: 13;
(ab) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 13;
(ac) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 14;
(ad) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–43 последовательности SEQ ID NO: 15;
(ae) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 28–43 последовательности SEQ ID NO: 15;
(af) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 15;
(ag) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 16;
(ah) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–27 последовательности SEQ ID NO: 17;
(ai) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 12–27 последовательности SEQ ID NO: 17;
(aj) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 17;
(ak) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 18;
(al) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–33 последовательности SEQ ID NO: 19;
(am) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 18–33 последовательности SEQ ID NO: 19;
(an) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 19;
(ao) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 20;
(ap) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–33 последовательности SEQ ID NO: 21;
(aq) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 18–33 последовательности SEQ ID NO: 21;
(ar) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 21;
(as) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 22;
(at) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–24 последовательности SEQ ID NO: 23;
(au) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 9–24 последовательности SEQ ID NO: 23;
(av) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 23;
(aw) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 24;
(ax) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–24 последовательности SEQ ID NO: 25;
(ay) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 9–24 последовательности SEQ ID NO: 25;
(az) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 25;
(ba) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 26;
(bb) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–30 последовательности SEQ ID NO: 27;
(bc) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 15–30 последовательности SEQ ID NO: 27;
(bd) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 27;
(be) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 28;
(bf) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–33 последовательности SEQ ID NO: 29;
(bg) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 18–33 последовательности SEQ ID NO: 29;
(bh) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 29;
(bi) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 30;
(bj) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–24 последовательности SEQ ID NO: 31;
(bk) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 9–24 последовательности SEQ ID NO: 31;
(bl) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 31;
(bm) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 32;
(bn) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–15 последовательности SEQ ID NO: 33;
(bo) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 33;
(bp) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 34;
(bq) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–16 последовательности SEQ ID NO: 35;
(br) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 35;
(bs) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 36;
(bt) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–29 последовательности SEQ ID NO: 43;
(bu) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 14–29 последовательности SEQ ID NO: 43;
(bv) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 43;
(bw) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 44;
(bx) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–35 последовательности SEQ ID NO: 45;
(by) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 20–35 последовательности SEQ ID NO: 45;
(bz) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 45;
(ca) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 46;
(cb) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–43 последовательности SEQ ID NO: 47;
(cc) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 28–43 последовательности SEQ ID NO: 47;
(cd) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 47;
(ce) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 48;
(cf) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–32 последовательности SEQ ID NO: 49;
(cg) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 17–32 последовательности SEQ ID NO: 49;
(ch) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 49;
(ci) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 50;
(cj) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–33 последовательности SEQ ID NO: 51;
(ck) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 18–33 последовательности SEQ ID NO: 51;
(cl) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 51;
(cm) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 52;
(cn) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–33 последовательности SEQ ID NO: 53;
(co) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 18–33 последовательности SEQ ID NO: 53;
(cp) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 53;
(cq) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 54;
(cr) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–30 последовательности SEQ ID NO: 55;
(cs) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 15–30 последовательности SEQ ID NO: 55;
(ct) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 55;
(cu) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 56;
(cv) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–130 последовательности SEQ ID NO: 57;
(cw) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 115–130 последовательности SEQ ID NO: 57;
(cx) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 57;
(cy) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 58;
(cz) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 59;
(da) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 60;
(db) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 61;
(dc) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 62;
(dd) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 63;
(de) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 64;
(df) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 65;
(dg) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 66;
(dh) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 67;
(di) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 68;
(dj) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 69;
(dk) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 70;
(dl) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 71;
(dm) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 72;
(dn) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 73;
(do) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 74;
(dp) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 76;
(dq) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 77;
(dr) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 80;
(ds) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 81;
(dt) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 83;
(du) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 84;
(dv) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 22–31 последовательности SEQ ID NO: 1;
(dw) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 22–33 последовательности SEQ ID NO: 1;
(dx) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 20–31 последовательности SEQ ID NO: 1;
(dy) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 14–23 последовательности SEQ ID NO: 3;
(dz) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 14–25 последовательности SEQ ID NO: 3; или
(ea) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 12–23 последовательности SEQ ID NO: 3.
5. Способ по п. 1, семя растения по п. 2, рекомбинантная бактерия группы Bacillus cereus по п. 3 или гибридный белок по п. 4, где сигнальная последовательность содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере примерно 62% идентичность аминокислотам 20–35 последовательности SEQ ID NO: 1, где идентичность аминокислотам 25–35 составляет по меньшей мере примерно 72%.
6. Способ по п. 1, семя растения по п. 2, рекомбинантная бактерия группы Bacillus cereus по п. 3 или гибридный белок по п. 4, где сигнальная последовательность содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере примерно 81% идентичность аминокислотам 20–35 последовательности SEQ ID NO: 1, где идентичность аминокислотам 25–35 составляет по меньшей мере примерно 90%.
7. Способ по п. 1, семя растения по п. 2, рекомбинантная бактерия группы Bacillus cereus по п. 3 или гибридный белок по п. 4, отличающиеся тем, что сигнальная последовательность состоит из:
a) аминокислот 1–35 из SEQ ID №: 1;
b) аминокислот 20–35 из SEQ ID №: 1;
c) SEQ ID №: 1;
d) SEQ ID №: 60; или
(e) аминокислотной последовательности, состоящей из 16 аминокислот и имеющей по меньшей мере примерно 43% идентичность аминокислотам 20–35 последовательности SEQ ID NO: 1, где идентичность аминоксилотам 25–35 составляет по меньшей мере примерно 54%.
8. Способ по п. 1, семя растения по п. 2, рекомбинантная бактерия группы Bacillus cereus по п. 3 или гибридный белок по п. 4, отличающиеся тем, что гибридный белок включает белок экзоспория или фрагмент белка экзоспория, который включает аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или 100% идентичности с SEQ ID №: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26 , 28, 30, 32, 34, 36, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 59.
9. Гибридный белок для стимуляции роста растения, включающий белок или пептид, стимулирующий рост растения, где белок или пептид, стимулирующий рост растения, включает:
пептидный гормон, включающий фитосульфокин, clavata 3 (CLV3), системин, ZmlGF или SCR/SP11;
негормональный пептид, включающий RKN 16D10, Hg-Syv46, eNOD40 пептид, мелиттин, мастопаран, Mas7, RHPP, POLARIS или ингибитор трипсина Кунитца (ИТК);
фермент, участвующий в продуцировании или активации соединения, стимулирующего рост растения, где фермент включает ацетоинредуктазу, индол-3-ацетамидгидролазу, триптофанмонооксигеназу, ацетолактатсинтетазу, α-ацетолактатдекарбоксилазу, пируватдекарбоксилазу, диацетилредуктазу, бутандиолдегидрогеназу, аминотрансферазу, триптофандекарбоксилазу, аминоксидазу, индол-3-пируватдекарбоксилазу, индол-3-ацетальдегид-дегидрогеназу, триптофан боковой цепи-оксидазу, нитрилгидролазу, нитрилазу, пептидазу, протеазу, аденозинфосфат-изопентилтрансферазу, фосфатазу, аденозинкиназу, аденин-фосфорибозилтрансферазу, CYP735A, 5’-рибонуклеотид-фосфогидролазу, аденозин-нуклеозидазу, зеатин-цис-транс-изомеразу, зеатин-О-глюкозилтрансферазу, β-глюкозидазу, цис-гидроксилазу, ЦK-цис-гидроксилазу, ЦК-N-глюкозилтрансферазу, 2,5-рибонуклеотид-фосфогидролазу, аденозин-нуклеозидазу, пурин-нуклеозидфосфорилазу, зеатинредуктазу, гидроксиламинредуктазу, 2-оксоглутаратдиоксигеназу, гибберелловую-2В/3В-гидролазу, гиббереллин-3-оксидазу, гиббереллин-20-оксидазу, хитозаназу, хитиназу, β-1,3-глюканазу, β-1,4-глюканазу, β-1,6-глюканазу или аминоциклопропан-1-карбоновой кислоты-деаминазу;
фермент, разрушающий или модифицирующий бактериальный, грибковый или растительный источник питательных веществ, включающий целлюлазу, липазу, лигниноксидазу, протеазу, гликозидгидролазу, фосфатазу, нитрогеназу, нуклеазу, амидазу, нитратредуктазу, нитритредуктазу, амилазу, аммоний-оксидазу, лигниназу, глюкозидазу, фосфолипазу, фитазу, пектиназу, глюканазу, сульфатазу, уреазу или ксиланазу; или
белок флагеллин или пептид флагеллина; и
белок экзоспория, где белок экзоспория содержит:
а) аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 95% идентичности с SEQ ID №: 71;
b) аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 95% идентичности с SEQ ID №: 72;
c) аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 95% идентичности с SEQ ID №: 73;
d) аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 95% идентичности с SEQ ID №: 74;
e) аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 95% идентичности с SEQ ID №: 76;
f) аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 95% идентичности с SEQ ID №: 77
g) аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 95% идентичности с SEQ ID №: 80;
h) аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 95% идентичности с SEQ ID №: 81;
i) аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 95% идентичности с SEQ ID №: 83; или
j) аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 95% идентичности с SEQ ID №: 84.
10. Гибридный белок по п. 9, включающий белок экзоспория, содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или 100% идентичности с SEQ ID №: 71, 72, 73, 74, 76, 77, 80, 81, 83 или 84.
11. Способ по п. 1, семя растения по п. 2, рекомбинантная бактерия группы Bacillus cereus по п. 3 или гибридный белок по любому из пп. 4, 9 и 10, отличающиеся тем, что гибридный белок включает аминокислотный линкер между сигнальной последовательностью, белком экзоспория или фрагментом белка экзоспория и белком или пептидом, стимулирующим рост растения, причем данный линкер необязательно включает:
полиаланиновый линкер, полиглициновый линкер или линкер, содержащий смесь как аланиновых, так и глициновых остатков; и/или
сайт узнавания протеазы.
12. Способ по п. 1, семя растения по п. 2 или гибридный белок по любому из пп. 4, 9 и 10, отличающиеся тем, что фермент, участвующий в продуцировании или активации соединения, стимулирующего рост растения, включает протеазу или пептидазу, расщепляющую белки, пептиды, пробелки или препробелки для получения биологически активного пептида, причем:
протеаза или пептидаза необязательно включает субтилизин, кислую протеазу, щелочную протеазу, протеиназу, эндопептидазу, экзопептидазу, термолизин, папаин, пепсин, трипсин, проназу, карбоксилазу, сериновую протеазу, глутаминовую протеазу, аспартатную протеазу, цистеиновую протеазу, треониновую протеазу или металлопротеазу;
биоактивный пептид необязательно включает RKN 16D10 или RHPP; и/или
протеаза или пептидаза необязательно расщепляет белки в пище, богатой белком.
13. Способ по п. 1, семя растения по п. 2 или слитый белок по п. 9 или 10, отличающиеся тем, что:
целлюлаза включает эндоцеллюлазу, экзоцеллюлазу или β-глюкозидазу;
липаза включает липазу Bacillus subtilis, липазу Bacillus thuringiensis, липазу Bacillus cereus или липазу Bacillus clausii; или
лигниноксидаза включает лигнинпероксидазу, лакказу, глиоксальоксидазу, лигниназу или марганецпероксидазу.
14. Способ по п. 1, семя растения по п. 2, рекомбинантная бактерия группы Bacillus cereus по п. 3 или гибридный белок по п. 9 или 10, где
протеаза включает субтилизин, кислую протеазу, щелочную протеазу, протеиназу, пептидазу, эндопептидазу, экзопептидазу, термолизин, папаин, пепсин, трипсин, проназу, карбоксилазу, сериновую протеазу, глутаминовую протеазу, аспартатную протеазу, цистеиновую протеазу, треониновую протеазу или металлопротеазу;
фосфатаза включает фосфорный моноэфир-гидролазу, фосфомоноэстеразу, фосфорный диэфир-гидролазу, фосфодиэстеразу, трифосфорный моноэфир-гидролазу, фосфорил ангидрид-гидролазу, пирофосфатазу, фитазу, триметафосфатазу или трифосфатазу; или
нитрогеназа включает нитрогеназу из Nif семейства.
15. Способ, семя растения или гибридный белок по п. 13, отличающиеся тем, что:
целлюлаза включает эндоцеллюлазу и эндоцеллюлаза включает эндоглюканазу;
целлюлаза включает экзоцеллюлазу и экзоцеллюлаза включает экзоцеллюлазу Trichoderma reesei;
целлюлаза включает β-глюкозидазу и β-глюкозидаза включает β-глюкозидазу Bacillus subtilis, β-глюкозидазу Bacillus thuringiensis, β-глюкозидазу Bacillus cereus или β-глюкозидазу Bacillus clausii;
фосфатаза включает фосфомоноэстеразу и фосфомоноэстераза включает PhoA4;
фосфатаза включает фитазу и фитаза включает фитазу Bacillus subtilis EE148 или фитазу Bacillus thuringiensis BT013A.
16. Рекомбинантная бактерия группы Bacillus cereus по п. 3, где:
фосфатаза включает фосфомоноэстеразу и фосфомоноэстераза включает PhoA4; или
фосфатаза включает фитазу и фитаза включает фитазу Bacillus subtilis EE148 или фитазу Bacillus thuringiensis BT013A.
17. Способ, семя растения или гибридный белок по п. 15, где эндоцеллюлаза включает эндоглюканазу и эндоглюканаза включает эндоглюканазу Bacillus subtilis, эндоглюканазу Bacillus thuringiensis, эндоглюканазу Bacillus cereus или эндоглюканазу Bacillus clausii.
18. Рекомбинантная бактерия группы Bacillus cereus по п. 3, где эндоглюканаза включает эндоглюканазу Bacillus subtilis, эндоглюканазу Bacillus thuringiensis, эндоглюканазу Bacillus cereus или эндоглюканазу Bacillus clausii.
19. Способ по п. 1, семя растения по п. 2 или гибридный белок по любому из пп. 4, 9 и 10, где пептид флагеллина включает flg22.
20. Рекомбинантная бактерия группы Bacillus cereus, экспрессирующая гибридный белок по любому из пп. 4, 9 и 10.
21. Рекомбинантная бактерия группы Bacillus cereus, коэкспрессирующая по меньшей мере один гибридный белок, содержащий белок или пептид, стимулирующий рост растения, по любому из пп. 4, 9 и 10 и по меньшей мере один гибридный белок, содержащий
белок или пептид, связывающийся с растением, где белок или пептид, связывающийся с растением, включает адгезин, флагеллин, омптин, лектин, экспансин, структурный белок биопленки, белок пилуса, белок curlus, интимин, инвазин, агглютинин, нефимбриальный белок; и
сигнальную последовательность, белок экзоспория или фрагмент белка экзоспория, где сигнальную последовательность, белок экзоспория или фрагмент белка экзоспория выбирают из группы, состоящей из:
(a) сигнальной последовательности, содержащей аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере примерно 43% идентичность аминокислотам 20–35 последовательности SEQ ID NO: 1, где идентичность аминокислотам 25–35 составляет по меньшей мере примерно 54%;
(b) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–35 последовательности SEQ ID NO: 1;
(c) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 20–35 последовательности SEQ ID NO: 1;
(d) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 1;
(e) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 2;
(f) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–27 последовательности SEQ ID NO: 3;
(g) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 12–27 последовательности SEQ ID NO: 3;
(h) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 3;
(i) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 4;
(j) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–38 последовательности SEQ ID NO: 5;
(k) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 23–38 последовательности SEQ ID NO: 5;
(l) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 5;
(m) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 6;
(n) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–28 последовательности SEQ ID NO: 7;
(o) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 13–28 последовательности SEQ ID NO: 7;
(p) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 7;
(q) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 8;
(r) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–24 последовательности SEQ ID NO: 9;
(s) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 9–24 последовательности SEQ ID NO: 9;
(t) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 9;
(u) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 10;
(v) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–33 последовательности SEQ ID NO: 11;
(w) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 18–33 последовательности SEQ ID NO: 11;
(x) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 11;
(y) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 12;
(z) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–33 последовательности SEQ ID NO: 13;
(aa) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 18–33 последовательности SEQ ID NO: 13;
(ab) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 13;
(ac) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 14;
(ad) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–43 последовательности SEQ ID NO: 15;
(ae) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 28–43 последовательности SEQ ID NO: 15;
(af) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 15;
(ag) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 16;
(ah) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–27 последовательности SEQ ID NO: 17;
(ai) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 12–27 последовательности SEQ ID NO: 17;
(aj) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 17;
(ak) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 18;
(al) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–33 последовательности SEQ ID NO: 19;
(am) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 18–33 последовательности SEQ ID NO: 19;
(an) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 19;
(ao) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 20;
(ap) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–33 последовательности SEQ ID NO: 21;
(aq) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 18–33 последовательности SEQ ID NO: 21;
(ar) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 21;
(as) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 22;
(at) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–24 последовательности SEQ ID NO: 23;
(au) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 9–24 последовательности SEQ ID NO: 23;
(av) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 23;
(aw) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 24;
(ax) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–24 последовательности SEQ ID NO: 25;
(ay) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 9–24 последовательности SEQ ID NO: 25;
(az) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 25;
(ba) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 26;
(bb) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–30 последовательности SEQ ID NO: 27;
(bc) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 15–30 последовательности SEQ ID NO: 27;
(bd) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 27;
(be) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 28;
(bf) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–33 последовательности SEQ ID NO: 29;
(bg) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 18–33 последовательности SEQ ID NO: 29;
(bh) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 29;
(bi) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 30;
(bj) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–24 последовательности SEQ ID NO: 31;
(bk) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 9–24 последовательности SEQ ID NO: 31;
(bl) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 31;
(bm) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 32;
(bn) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–15 последовательности SEQ ID NO: 33;
(bo) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 33;
(bp) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 34;
(bq) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–16 последовательности SEQ ID NO: 35;
(br) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 35;
(bs) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 36;
(bt) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–29 последовательности SEQ ID NO: 43;
(bu) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 14–29 последовательности SEQ ID NO: 43;
(bv) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 43;
(bw) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 44;
(bx) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–35 последовательности SEQ ID NO: 45;
(by) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 20–35 последовательности SEQ ID NO: 45;
(bz) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 45;
(ca) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 46;
(cb) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–43 последовательности SEQ ID NO: 47;
(cc) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 28–43 последовательности SEQ ID NO: 47;
(cd) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 47;
(ce) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 48;
(cf) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–32 последовательности SEQ ID NO: 49;
(cg) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 17–32 последовательности SEQ ID NO: 49;
(ch) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 49;
(ci) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 50;
(cj) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–33 последовательности SEQ ID NO: 51;
(ck) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 18–33 последовательности SEQ ID NO: 51;
(cl) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 51;
(cm) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 52;
(cn) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–33 последовательности SEQ ID NO: 53;
(co) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 18–33 последовательности SEQ ID NO: 53;
(cp) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 53;
(cq) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 54;
(cr) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–30 последовательности SEQ ID NO: 55;
(cs) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 15–30 последовательности SEQ ID NO: 55;
(ct) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 55;
(cu) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 56;
(cv) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 1–130 последовательности SEQ ID NO: 57;
(cw) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 115–130 последовательности SEQ ID NO: 57;
(cx) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 57;
(cy) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 58;
(cz) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 59;
(da) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 60;
(db) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 61;
(dc) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 62;
(dd) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 63;
(de) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 64;
(df) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 65;
(dg) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 66;
(dh) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 67;
(di) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 68;
(dj) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 69;
(dk) сигнальной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 70;
(dl) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 71;
(dm) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 72;
(dn) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 73;
(do) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 74;
(dp) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 76;
(dq) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 77;
(dr) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 80;
(ds) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 81;
(dt) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 83;
(du) белка экзоспория, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичность последовательности SEQ ID NO: 84;
(dv) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 22–31 последовательности SEQ ID NO: 1;
(dw) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 22–33 последовательности SEQ ID NO: 1;
(dx) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 20–31 последовательности SEQ ID NO: 1;
(dy) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 14–23 последовательности SEQ ID NO: 3;
(dz) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 14–25 последовательности SEQ ID NO: 3; или
(ea) сигнальной последовательности, содержащей аминокислоты 12–23 последовательности SEQ ID NO: 3.
22. Рекомбинантная бактерия группы Bacillus cereus по п. 21, где
адгезин включает рикадгезин; или
структурный белок биопленки включает TasA или YuaB.
23. Способ по п. 1, семя растения по п. 2 или рекомбинантная бактерия группы Bacillus cereus по п. 3, отличающиеся тем, что рекомбинантная бактерия группы Bacillus cereus включает Bacillus anthracis, Bacillus cereus, Bacillus thuringiensis, Bacillus mycoides, Bacillus pseudomycoides, Bacillus samanii, Bacillus gaemokensis, Bacillus weihenstephensis или их комбинацию.
24. Способ по п. 1, семя растения по п. 2 или рекомбинантная бактерия группы Bacillus cereus по п. 3, отличающиеся тем, что рекомбинантная бактерия группы Bacillus cereus включает штамм бактерий, стимулирующий рост растения, причем штамм бактерий, стимулирующий рост растения, необязательно: продуцирует инсектицидный токсин, продуцирует фунгицидное соединение, продуцирует нематоцидное соединение, продуцирует бактерицидное соединение, является устойчивым к одному или более антибиотикам, содержит одну или более самостоятельно реплицирующихся плазмид, прикрепляется к корням растений, колонизирует корни растений, формирует биопленки, растворяет питательные вещества, секретирует органические кислоты или их комбинации.
25. Способ, семя растения или рекомбинантная бактерия группы Bacillus cereus по п. 24, где
инсектицидный токсин включает Cry токсин;
фунгицидное соединение включает β-1,3-глюканазу, хитозаназу, литиказу или их комбинацию; и/или
нематоцидное соединение включает Cry токсин.
26. Способ по п. 1, семя растения по п. 2 или 3 или рекомбинантная бактерия группы Bacillus cereus по п. 4, отличающиеся тем, что рекомбинантная бактерия группы Bacillus cereus включает Bacillus mycoides BT155, имеющий номер доступа NRRL No. B-50921; Bacillus mycoides EE118, имеющий номер доступа NRRL No. B-50918; Bacillus mycoides EE141, имеющий номер доступа NRRL No. B-50916; Bacillus mycoides BT46-3, имеющий номер доступа NRRL No. B-50922; член группы Bacillus cereus EE128, имеющий номер доступа NRRL No. B-50917; Bacillus thuringiensis BT013A, имеющий номер доступа NRRL No. B-50924, или член группы Bacillus cereus EE349, имеющий номер доступа NRRL No. B-50928.
27. Способ, семя растения или рекомбинантная бактерия группы Bacillus cereus по п. 26, отличающиеся тем, что гибридный белок включает сигнальную последовательность из SEQ ID №: 60.
28. Способ, семя растения или рекомбинантная бактерия группы Bacillus cereus по п. 27, отличающиеся тем, что белок или пептид, стимулирующий рост растения, включает негормональный пептид, негормональный пептид, включающий ингибитор трипсина Кунитца (ИТК); или где белок или пептид, стимулирующий рост растения, включает фермент, участвующий в продуцировании или активации соединения, стимулирующего рост растения, где фермент включает хитозаназу.
29. Способ по п. 1, семя растения по п. 2 или рекомбинантная бактерия группы Bacillus cereus по п. 3, где гибридный белок включает сигнальную последовательность, содержащую SEQ ID NO: 60, и эндоглюканазу или фосфатазу, где фосфатаза необязательно включает PhoA4 или фитазу.
30. Способ по п. 1, семя растения по п. 2 или рекомбинантная бактерия группы Bacillus cereus по п. 3, отличающиеся тем, что гибридный белок экспрессируется под контролем споруляционного промотора, нативного по отношению к сигнальной последовательности, белку экзоспория или фрагменту белка экзоспория в гибридном белке, и/или отличающиеся тем, что гибридный белок экспрессируется под контролем сильного споруляционного промотора; причем:
сильный споруляционный промотор необязательно включает промоторную последовательность сигма-K, специфическую для полимеразы споруляции, промоторную последовательность или последовательности сигма-K, специфические для полимеразы споруляции, необязательно имеющие 100% идентичности с соответствующими нуклеотидами из SEQ ID №: 85, 86, 87, 88, 89 , 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102 или 103; и/или
промотор споруляции необязательно включает нуклеотидную последовательность, имеющую по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или 100% идентичности с нуклеотидной последовательностью любой из SEQ ID №№: 85–103.
31. Препарат для стимуляции роста растения, где препарат содержит рекомбинантную бактерию группы Bacillus cereus по п. 3 или рекомбинантную бактерию группы Bacillus cereus, которая экспрессирует гибридный белок по любому из пп. 4, 9, и 10 и сельскохозяйственно-приемлемый носитель, причем:
сельскохозяйственно-приемлемый носитель необязательно включает диспергирующее вещество, сурфактант, добавку, воду, загуститель, противослеживающий агент, противоосадочное вещество, компостирующий препарат, гранулированную подкормку, диатомит, масло, краситель, стабилизатор, консервант, полимер, пленку или их комбинацию;
указанный препарат необязательно включает препарат для покрытия семян, жидкий препарат, применяемый для растений или растительных ростовых сред, или твердый препарат, применяемый для растений или растительных ростовых сред;
указанный препарат необязательно дополнительно включает удобрение, материал микроэлементов удобрения, инсектицид, гербицид, вещество, улучшающее рост растений, фунгицид, инсектицид, моллюскоцид, альгицид, бактериальный инокулянт, грибковый инокулянт или их комбинацию; и/или
сельскохозяйственно-приемлемый носитель включает вермикулит, древесный уголь, отходы сатурационного пресса сахарного завода, рисовую шелуху, карбоксиметилцеллюлозу, торф, перлит, мелкий песок, карбонат кальция, муку, квасцы, крахмал, тальк, поливинилпирролидон или их комбинацию.
32. Препарат по п. 31, где:
сурфактант включает тяжелое нефтяное масло, тяжелый нефтяной дистиллят, сложный эфир полиола жирной кислоты, полиэтоксилированный эфир жирной кислоты, арилалкил полиоксиэтиленгликоля, алкиламин ацетат, алкиларилсульфонат, многоатомный спирт, алкилфосфат или их комбинацию;
добавка включает масло, камедь, смолу, глину, полиоксиэтиленгликоль, терпен, вязкую органику, сложный эфир жирной кислоты, сульфатированный спирт, алкилсульфонат, нефтяной сульфонат, сульфат спирта, алкилбутандиамат натрия, полиэфир тиобутандиоата натрия, производное бензол-ацетонитрила, белковый материал или их комбинацию;
загуститель включает алкилсульфонат полиэтиленгликоля с длинной цепью, полиоксиэтиленолеат или их комбинацию;
противослеживающий агент включает соль натрия, карбонат кальция, диатомит или их комбинацию;
препарат для покрытия семян включает раствор на водной или масляной основе, применяемый для семян, или порошок или гранулированный препарат, применяемый для семян;
жидкий препарат, применяемый для растений или растительных ростовых сред, включает концентрированный препарат или препарат, готовый для использования; и/или
твердый препарат, применяемый для растений или растительных ростовых сред, включает гранулированный препарат или порошковое вещество.
33. Препарат по п. 31, отличающийся тем, что бактериальный инокулянт включает штамм бактерий, стимулирующий рост растения, причем штамм бактерий, стимулирующий рост растения, необязательно: продуцирует инсектицидный токсин, продуцирует фунгицидное соединение, продуцирует нематоцидное соединение, продуцирует бактерицидное соединение, является устойчивым к одному или более антибиотикам, содержит одну или более самостоятельно реплицирующихся плазмид, прикрепляется к корням растений, колонизирует корни растений, формирует биопленки, растворяет питательные вещества, секретирует органические кислоты или их комбинации.
34. Препарат по п. 33, где
инсектицидный токсин включает Cry токсин;
фунгицидное соединение включает β-1,3-глюканазу, хитозаназу, литиказу или их комбинацию; и/или
нематоцидное соединение включает Cry токсин.
35. Препарат по п. 33, отличающийся тем, что бактериальный инокулянт включает Bacillus aryabhattai CAP53, имеющий номер доступа NRRL No. B-50819; Bacillus aryabhattai CAP56, имеющий номер доступа NRRL No. B-50817; Bacillus flexus BT054, имеющий номер доступа NRRL No. B-50816; Paracoccus kondratievae NC35, имеющий номер доступа NRRL No. B-50820; Bacillus mycoides BT155, имеющий номер доступа NRRL No. B-50921; Enterobacter cloacae CAP12, имеющий номер доступа NRRL No. B-50822; Bacillus nealsonii BOBA57, имеющий номер доступа NRRL No. B-50821; Bacillus mycoides EE118, имеющий номер доступа NRRL No. B-50918; Bacillus subtilis EE148, имеющий номер доступа NRRL No. B-50927; Alcaligenes faecalis EE107, имеющий номер доступа NRRL No. B-50920; Bacillus mycoides EE141, имеющий номер доступа NRRL No. B-50916; Bacillus mycoides BT46-3, имеющий номер доступа NRRL No. B-50922; член группы Bacillus cereus EE128, имеющий номер доступа NRRL No. B-50917; Bacillus thuringiensis BT013A, имеющий номер доступа NRRL No. B-50924; Paenibacillus massiliensis BT23, имеющий номер доступа NRRL No. B-50923; член группы Bacillus cereus EE349, имеющий номер доступа NRRL No. B-50928; Bacillus subtilis EE218, имеющий номер доступа NRRL No. B-50926; Bacillus megaterium EE281, имеющий номер доступа NRRL No. B-50925, или их комбинацию.
36. Способ стимулирования роста растений, включающий следующие этапы:
введение рекомбинантной бактерии группы Bacillus cereus по п. 20 в среду для роста растений; или
применение рекомбинантной бактерии группы Bacillus cereus по п. 20 к растению, семени растения или области, окружающей растение или семя растения.
37. Способ для стимулирования роста растений по п. 1, отличающийся тем, что растения, выращенные в присутствии рекомбинантной бактерии группы Bacillus cereus, демонстрируют усиленный рост по сравнению с растениями, выращенными в отсутствие рекомбинантной бактерии группы Bacillus cereus в тех же условиях.
38. Способ по п. 37, где
растения, выращенные на среде для роста растений, содержащей рекомбинантную бактерию группы Bacillus cereus, демонстрируют усиленный рост по сравнению с ростом растений, выращенных в той же среде, которая не содержит рекомбинантную бактерию группы Bacillus cereus, в тех же условиях;
растения, на которых нанесли рекомбинантную бактерию группы Bacillus cereus, демонстрируют усиленный рост по сравнению с ростом растений, на которых не наносили рекомбинантную бактерию группы Bacillus cereus, в тех же условиях;
растения, выращенные из семян растений, на которые нанесли рекомбинантную бактерию группы Bacillus cereus, демонстрируют усиленный рост по сравнению с ростом растений, выращенных из семян растений, на которые не наносили рекомбинантную бактерию группы Bacillus cereus, в тех же условиях; или
растения, выращенные в области, на которую нанесли рекомбинантную бактерию группы Bacillus cereus, демонстрируют усиленный рост по сравнению с ростом растений, выращенных в области, на которую не наносили рекомбинантную бактерию группы Bacillus cereus, в тех же условиях.
39. Способ по п. 1, дополнительно включающий инактивацию рекомбинантной бактерии группы Bacillus cereus до введения в среду для роста растений или применения к растению, семени растения или области, окружающей растение или семя растения; причем рекомбинантная бактерия группы Bacillus cereus необязательно инактивируется термической обработкой; гамма-облучением; рентгеновским облучением; УФ-А-облучением; УФ-В-облучением; обработкой глютаровым альдегидом, формальдегидом, перекисью водорода, уксусной кислотой, отбеливателем или их комбинацией.
40. Способ по п. 1, отличающийся тем, что:
среда для роста растений включает почву, воду, водный раствор, песок, гравий, полисахарид, мульчу, компост, торф, солому, необработанный лесоматериал, глину, соевый шрот, дрожжевой экстракт или их комбинацию; и/или
среда для роста растений дополнена субстратом для фермента, при этом субстрат необязательно включает триптофан, аденозинмонофосфат, аденозиндифосфат, аденозинтрифосфат, индол, триметафосфат, ферродоксин, ацетоин, диацетил, пируват, ацетолактат, пектин, целлюлозу, метилцеллюлозу, крахмал, хитин, пектин, шрот, производное целлюлозы, фосфат, ацетоин, хитозан, неактивное производное индол-3-уксусной кислоты, неактивное производное гибберелловой кислоты, ксилан, арабиноксилан, жир, воск, масло, фитиновую кислоту, лигнин, гуминовую кислоту, холин, производное холина, пролин, полипролин, белок, богатый пролином, муку, богатую пролином, фенилаланин, хоризмат или их комбинацию.
41. Способ по п. 1, включающий покрытие семян рекомбинантной бактерией группы Bacillus cereus или препаратом, содержащим рекомбинантную бактерию группы Bacillus cereus, до посадки.
42. Способ по п. 1, включающий применение рекомбинантной бактерии группы Bacillus cereus или препарата к надземной части растения.
43. Способ по п. 1, отличающийся тем, что введение рекомбинантной бактерии группы Bacillus cereus в среду для роста растений включает применение жидкого или твердого препарата, содержащего рекомбинантную бактерию группы Bacillus cereus, для среды.
44. Способ по п. 1, дополнительно включающий введение по меньшей мере одного агрохимиката в среду для роста растений или применение по меньшей мере одного агрохимиката к растениям или семенам, причем агрохимикат включает удобрение, материал микроэлементов удобрения, инсектицид, гербицид, фунгицид, моллюскоцид, альгицид, вещество, улучшающее рост растений, бактериальный инокулянт, грибковый инокулянт или их комбинацию, причем:
удобрение включает жидкое удобрение;
материал микроэлементов удобрения включает борную кислоту, борат, борную фритту, сульфат меди, медную фритту, хелат меди, декагидрат тетрабората натрия, сульфат железа, оксид железа, сульфат железа-аммония, железную фритту, хелат железа, сульфат марганца, оксид марганца, хелат марганца, хлорид марганца, марганцевую фритту, молибдат натрия, молибденовую кислоту, сульфат цинка, оксид цинка, карбонат цинка, цинковую фритту, фосфат цинка, хелат цинка или их комбинацию;
инсектицид включает органофосфат, карбамат, пиретроид, акарицид, алкил-фталат, борную кислоту, борат, фторид, серу, мочевину, замещенную ароматическим галоидом, эфир насыщенного спирта, инсектицид на биологической основе или их комбинацию;
гербицид включает хлорфенокси соединение, нитрофенольное соединение, соединение нитрокрезола, соединение дипиридила, ацетамид, алифатическую кислоту, анилид, бензамид, бензойную кислоту, производное бензойной кислоты, анисовую кислоту, производное анисовой кислоты, бензонитрил, бензотиадиазинона диоксид, тиокарбамат, карбамат, карбанилат, хлорпиридинил, производное циклогексенона, производное динитроаминобензола, соединение фтор-динитро-толуидин, изоксазолидинон, никотиновую кислоту, изопропиламин, производные изопропиламина, оксадиазолинон, фосфат, фталат, соединение пиколиновой кислоты, триазин, триазол, урацил, производное мочевины, эндотал, хлорат натрия или их комбинацию;
фунгицид включает замещенный бензол, тиокарбамат, этилен-бис-дитиокарбамат, тиофталид амид, соединение меди, ртутьорганическое соединение, оловоорганическое соединение, соединение кадмия, анилазин, беномил, циклогексамид, додин, этридиазол, ипродион, металаксил, тиамимефон, трифорин или их комбинацию;
грибковый инокулянт включает грибковый инокулянт из семейства Glomeraceae, грибковый инокулянт из семейства Claroidoglomeraceae, грибковый инокулянт из семейства Gigasporaceae, грибковый инокулянт из семейства Acaulosporaceae, грибковый инокулянт из семейства Sacculosporaceae, грибковый инокулянт из семейства Entrophosporaceae, грибковый инокулянт из семейства Pacidsporaceae, грибковый инокулянт из семейства Diversisporaceae, грибковый инокулянт из семейства Paraglomeraceae, грибковый инокулянт из семейства Archaeosporaceae, грибковый инокулянт из семейства Geosiphonaceae, грибковый инокулянт из семейства Ambisporaceae, грибковый инокулянт из семейства Scutellosporaceae, грибковый инокулянт из семейства Dentiscultataceae, грибковый инокулянт из семейства Racocetraceae, грибковый инокулянт из типа Basidiomycota, грибковый инокулянт из типа Ascomycota, грибковый инокулянт из типа Zygomycota или их комбинацию;
бактериальный инокулянт включает бактериальный инокулянт из рода Rhizobium, бактериальный инокулянт из рода Bradyrhizobium, бактериальный инокулянт из рода Mesorhizobium, бактериальный инокулянт из рода Azorhizobium, бактериальный инокулянт из рода Allorhizobium, бактериальный инокулянт из рода Sinorhizobium, бактериальный инокулянт из рода Kluyvera, бактериальный инокулянт из рода Azotobacter, бактериальный инокулянт из рода Pseudomonas, бактериальный инокулянт из рода Azospirillium, бактериальный инокулянт из рода Bacillus, бактериальный инокулянт из рода Streptomyces, бактериальный инокулянт из рода Paenibacillus, бактериальный инокулянт из рода Paracoccus, бактериальный инокулянт из рода Enterobacter, бактериальный инокулянт из рода Alcaligenes, бактериальный инокулянт из рода Mycobacterium, бактериальный инокулянт из рода Trichoderma, бактериальный инокулянт из рода Gliocladium, бактериальный инокулянт из рода Glomus, бактериальный инокулянт из рода Klebsiella или их комбинацию; и/или
удобрение включает сульфат аммония, нитрат аммония, сульфат-нитрат аммония, хлорид аммония, бисульфат аммония, полисульфид аммония, тиосульфат аммония, водный раствор аммиака, безводный аммиак, полифосфат аммония, сульфат алюминия, нитрат кальция, известково-аммиачную селитру, сульфат кальция, обожжённый магнезит, кальцитовый известняк, оксид кальция, нитрат кальция, доломитовый известняк, гашеную известь, карбонат кальция, диаммонийфосфат, моноаммонийфосфат, нитрат магния, сульфат магния, нитрат калия, хлорид калия, сульфат калия-магния, сульфат калия, нитраты натрия, магнезиальный известняк, оксид магния, мочевину, карбамидоформальдегидные смолы, мочевино-аммониевый нитрат, покрытую серой мочевину, мочевину с полимерным покрытием, изобутилиден димочевину, K2SO4–2MgSO4, каинит, сильвинит, кизерит, эпсомскую соль, элементарную серу, мергель, измельченные устричные раковины, рыбную муку, жмыхи, рыбный тук, кровяную муку, фосфорит, суперфосфат, шлак, костную муку, древесную золу, навоз, гуано летучих мышей, торф, компост, зеленый песок, муку из семян хлопчатника, муку из перьев, муку из крабов, рыбную эмульсию, гуминовую кислоту или их комбинацию.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201361799262P | 2013-03-15 | 2013-03-15 | |
US61/799,262 | 2013-03-15 | ||
PCT/US2014/030824 WO2014145964A1 (en) | 2013-03-15 | 2014-03-17 | Fusion proteins and methods for stimulating plant growth, protecting plants, and immobilizing bacillus spores on plants |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2019114030A Division RU2815587C2 (ru) | 2013-03-15 | 2014-03-17 | Гибридные белки и способы стимуляции роста растений, защиты растений и иммобилизации спор bacillus на растениях |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2015144152A RU2015144152A (ru) | 2017-04-27 |
RU2688832C2 true RU2688832C2 (ru) | 2019-05-22 |
Family
ID=51529789
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2015144152A RU2688832C2 (ru) | 2013-03-15 | 2014-03-17 | Гибридные белки и способы стимуляции роста растений, защиты растений и иммобилизации спор bacillus на растениях |
Country Status (11)
Country | Link |
---|---|
US (8) | US9573980B2 (ru) |
EP (1) | EP2970507B1 (ru) |
JP (2) | JP6693865B2 (ru) |
CN (1) | CN105263965A (ru) |
AU (1) | AU2014232376B2 (ru) |
BR (1) | BR122022017521B1 (ru) |
CA (1) | CA2907369A1 (ru) |
IL (3) | IL241565B (ru) |
MX (1) | MX371129B (ru) |
RU (1) | RU2688832C2 (ru) |
WO (1) | WO2014145964A1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN112335508A (zh) * | 2020-11-06 | 2021-02-09 | 中国科学院成都生物研究所 | 含壳聚糖/葡聚糖的苔藓孢子体悬浮液在裸地覆绿的应用方法 |
Families Citing this family (111)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US9573980B2 (en) | 2013-03-15 | 2017-02-21 | Spogen Biotech Inc. | Fusion proteins and methods for stimulating plant growth, protecting plants from pathogens, and immobilizing Bacillus spores on plant roots |
US9392796B2 (en) * | 2013-03-15 | 2016-07-19 | Spogen Biotech Inc. | Plant growth-promoting bacteria and methods of use |
WO2015095625A1 (en) * | 2013-12-19 | 2015-06-25 | Rhizoflora, Inc. | Plant activator composition |
CA2883596A1 (en) * | 2014-02-26 | 2015-08-26 | Bioponix Technologies Inc. | Continuous bioprocess for organic greenhouse agriculture |
US10131863B2 (en) * | 2014-04-11 | 2018-11-20 | Novozymes A/S | Detergent composition |
WO2016044563A1 (en) * | 2014-09-17 | 2016-03-24 | Bayer Cropscience Lp | Compositions comprising recombinant bacillus cells and a fungicide |
WO2016044548A1 (en) * | 2014-09-17 | 2016-03-24 | Bayer Cropscience Lp | Compositions comprising recombinant bacillus cells and another biological control agent |
WO2016044575A1 (en) * | 2014-09-17 | 2016-03-24 | Bayer Cropscience Lp | Compositions comprising recombinant bacillus cells and an insecticide |
US10448647B2 (en) * | 2014-09-17 | 2019-10-22 | Basf Corporation | Compositions comprising recombinant bacillus cells and an insecticide |
IL295968A (en) * | 2014-09-17 | 2022-10-01 | Spogen Biotech Inc | Fusion proteins, recombinant bacteria, and methods for using recombinant bacteria |
MX2017003610A (es) * | 2014-09-17 | 2017-07-13 | Bayer Cropscience Lp | Composiciones que comprenden celulas recombinantes de bacillus y un fungicida. |
MX2017003452A (es) * | 2014-09-17 | 2017-07-28 | Bayer Cropscience Lp | Composiciones que comprenden celulas recombinantes de bacillus y otro agente de control biologico. |
EP3310172A1 (en) * | 2015-06-16 | 2018-04-25 | BASF Agrochemical Products B.V. | Method for managing flea beetles of the family chrysomelidae in brassica crops |
CN105063066A (zh) * | 2015-08-10 | 2015-11-18 | 华南理工大学 | 一种蜡样芽孢杆菌亚硝酸盐还原酶及基因和应用 |
ES2722323T3 (es) * | 2015-08-14 | 2019-08-09 | Fertinagro Biotech Sl | Composición fertilizante que incluye un inhibidor de la actividad de la ureasa |
BR112018008456B1 (pt) * | 2015-10-27 | 2022-04-05 | Ch Biotech R&D Co., Ltd | Método para tratar ou prevenir o huanglongbing (hlb) em plantas cítricas |
CN105399466A (zh) * | 2015-11-12 | 2016-03-16 | 安徽裕民生态农业有限公司 | 一种无土栽培使用的无刺激性营养液 |
CN105399492A (zh) * | 2015-11-12 | 2016-03-16 | 安徽裕民生态农业有限公司 | 一种提高油用牡丹光合作用的营养液 |
CN105399564A (zh) * | 2015-11-12 | 2016-03-16 | 安徽裕民生态农业有限公司 | 一种抗病毒的无公害植物营养液 |
CN105367224A (zh) * | 2015-11-12 | 2016-03-02 | 安徽裕民生态农业有限公司 | 一种提高油牡丹抗生物病害能力的营养液 |
CN105399491A (zh) * | 2015-11-12 | 2016-03-16 | 安徽裕民生态农业有限公司 | 一种减少植物冻害的营养液 |
CN105399490A (zh) * | 2015-11-12 | 2016-03-16 | 安徽裕民生态农业有限公司 | 一种提高油用牡丹盐碱抗性的营养液 |
CN105565962A (zh) * | 2015-11-12 | 2016-05-11 | 安徽裕民生态农业有限公司 | 一种提高土壤肥力的油用牡丹营养液 |
CN105399489A (zh) * | 2015-11-12 | 2016-03-16 | 安徽裕民生态农业有限公司 | 一种养分均衡释放的油用牡丹植物营养液 |
CN105367251A (zh) * | 2015-11-27 | 2016-03-02 | 刘启勇 | 一种提高果实品质的植物营养液 |
CN105503392A (zh) * | 2015-12-21 | 2016-04-20 | 淮南市焦岗湖水产旅游开发有限公司 | 一种改善水生植物生长环境的营养液 |
CN105461445A (zh) * | 2015-12-21 | 2016-04-06 | 淮南市焦岗湖水产旅游开发有限公司 | 一种能加快植被恢复的营养液 |
US20170347664A1 (en) * | 2016-03-16 | 2017-12-07 | Spogen Biotech Inc. | Fusion proteins, recombinant bacteria, and exosporium fragments for animal health and aquaculture |
EP3429347A4 (en) * | 2016-03-16 | 2020-07-29 | Spogen Biotech Inc. | PROCESSES FOR PROMOTING PLANT HEALTH USING FREE ENZYMES AND MICRO-ORGANISMS OVEREXPRESSING ENZYMES |
CN105851067B (zh) * | 2016-03-30 | 2018-12-18 | 中国科学院测量与地球物理研究所 | 一种茴香提取液及制备方法并将其用于控制浮萍的生长 |
CN106083459A (zh) * | 2016-06-15 | 2016-11-09 | 安徽菲扬农业科技有限公司 | 一种苗木栽培专用肥料及其制备工艺 |
CN106135278A (zh) * | 2016-07-01 | 2016-11-23 | 安徽徽大农业有限公司 | 一种辣椒种子萌发的促进剂及其制备方法 |
CN106244496B (zh) * | 2016-09-06 | 2019-02-19 | 山东农业大学 | 一种茶树专用无机磷分解菌wp2及其菌剂制备方法 |
CN106754600A (zh) * | 2016-12-14 | 2017-05-31 | 上海科技大学 | 枯草芽孢杆菌、生物膜及其构建和应用 |
US20180208938A1 (en) * | 2017-01-23 | 2018-07-26 | Innate Immunity LLC | Compositions and Methods for Protecting Plants Against Bacterial Infections |
CN107114369B (zh) * | 2017-03-24 | 2020-01-21 | 浙江大学 | 植物磺肽素-α在提高植物灰霉病抗性中的应用 |
CN107119000B (zh) * | 2017-04-19 | 2019-04-12 | 山东大学 | 荧光假单胞菌突变菌株的筛选方法及其在生物防治中的应用 |
CN107318579A (zh) * | 2017-06-20 | 2017-11-07 | 松桃苗族自治县继梅养殖专业合作社 | 一种葡萄的育苗方法 |
CN107467074A (zh) * | 2017-06-26 | 2017-12-15 | 浦江县昂宝生物技术有限公司 | 促生长用植物生长调节剂 |
CN107494599A (zh) * | 2017-06-26 | 2017-12-22 | 浦江县昂宝生物技术有限公司 | 促进植物生根的调节剂及其制备方法 |
KR20200031144A (ko) | 2017-07-20 | 2020-03-23 | 스포겐 바이오테크 인코포레이티드 | 식물 보호, 성장 및 생산성 향상을 위한 생물활성 폴리펩타이드 |
CN107382507B (zh) * | 2017-08-17 | 2021-04-13 | 山东天鹿生物科技有限公司 | 一种促进植物根际有益微生物繁殖的大量元素肥及其应用 |
CN107698672B (zh) * | 2017-09-01 | 2020-12-11 | 北京市农林科学院 | 一种水稻雄性不育相关蛋白及其编码基因与应用 |
MX2020005127A (es) | 2017-11-16 | 2020-07-27 | Bayer Cropscience Lp | Plataforma de presentacion en endosporas basadas en paenibacillus, productos y metodos relacionados. |
CN108018307B (zh) * | 2017-12-08 | 2021-05-11 | 杭州师范大学 | AtNIA1基因在提高杭白菊苗抗重金属污染和抗氧化活性中的应用 |
CN107881121B (zh) * | 2017-12-15 | 2021-11-09 | 北京工商大学 | 一株控制水果采后病害的酿酒酵母by23及其制备与使用方法 |
CN108719336B (zh) * | 2018-05-18 | 2020-12-08 | 中国林业科学研究院林业研究所 | 角担菌属真菌促进兰科植物生长的方法 |
US11541105B2 (en) | 2018-06-01 | 2023-01-03 | The Research Foundation For The State University Of New York | Compositions and methods for disrupting biofilm formation and maintenance |
CN108795814B (zh) * | 2018-06-25 | 2021-08-27 | 信阳师范学院 | 一种可降解废弃羽毛的菌株、筛选方法及其应用 |
KR102222761B1 (ko) | 2018-07-10 | 2021-03-03 | 한국생명공학연구원 | 마이크로스트로마 파일로플라눔(Microstroma phylloplanum)AmE-3 균주 및 이의 용도 |
CN109055231B (zh) * | 2018-07-26 | 2021-04-27 | 云南大学 | 一种真菌发酵液及其应用 |
CN109182145B (zh) * | 2018-09-29 | 2021-05-11 | 武汉友芹种苗技术有限公司 | 一种棘孢曲霉菌株及其应用 |
CN109182589A (zh) * | 2018-11-01 | 2019-01-11 | 海南大学 | 一种检测槟榔细菌性叶斑病菌的方法 |
BR112021008927A2 (pt) * | 2018-11-15 | 2021-08-17 | Bayer Cropscience Lp | plataformas de exibição de endósporo, produtos e métodos |
CN109468333A (zh) * | 2018-11-30 | 2019-03-15 | 福建省农业科学院果树研究所 | 柑橘漆酶家族基因CsiLAC4及其应用 |
CN109652432A (zh) * | 2018-12-25 | 2019-04-19 | 华中科技大学鄂州工业技术研究院 | 一种高纯度隐地蛋白的制备方法 |
CN110616164A (zh) * | 2019-01-22 | 2019-12-27 | 暨南大学 | 一种可活化难溶性磷、镉的阴沟肠杆菌y16及其应用 |
EP3941931A1 (en) | 2019-03-19 | 2022-01-26 | Bayer CropScience LP | Fusion proteins, recombinant bacteria, and exosporium fragments for plant health |
EP3941204A1 (en) | 2019-03-19 | 2022-01-26 | Bayer CropScience LP | Fusion proteins, recombinant bacteria, and exosporium fragments for pest control and plant health |
CN109762778B (zh) * | 2019-04-11 | 2019-07-19 | 鲁东大学 | 类芽孢杆菌及其生物防治制剂的制备方法 |
CN110106116B (zh) * | 2019-05-14 | 2022-03-04 | 江苏省农业科学院 | 一株阴沟肠杆菌及其在降解噻虫嗪中的应用 |
CN110184244A (zh) * | 2019-06-20 | 2019-08-30 | 福清市火麒麟食用菌技术开发有限公司 | 一种绣球菌产漆酶的制备方法 |
CN111172170A (zh) * | 2019-09-01 | 2020-05-19 | 天津大学 | 佛甲草抗旱基因SlAP2及其应用 |
CN110643615A (zh) * | 2019-09-01 | 2020-01-03 | 天津大学 | 佛甲草抗旱基因SlATHB-7及其应用 |
CN110607308A (zh) * | 2019-09-01 | 2019-12-24 | 天津大学 | 佛甲草抗旱基因SlERF及其应用 |
CN110577960B (zh) * | 2019-09-12 | 2022-09-13 | 南京农业大学 | 梨木质素合成基因PbMC1a/1b及其在果实品质遗传改良中的应用 |
CN110592056A (zh) * | 2019-09-19 | 2019-12-20 | 昆明理工大学 | 噬菌体裂解酶复合粉剂及其制备方法和应用 |
CN110408578B (zh) * | 2019-09-25 | 2020-02-14 | 中国农业科学院农业资源与农业区划研究所 | 一株皱纹假单胞菌及其应用 |
CN110628734A (zh) * | 2019-09-25 | 2019-12-31 | 内蒙古昆明卷烟有限责任公司 | 毛栓菌lccc50416在生产漆酶和烟叶发酵中的应用 |
CN110592107B (zh) * | 2019-10-08 | 2021-09-17 | 吉林大学 | 一种燕麦叶枯病菌基因CvDUF1及其应用 |
CN110749646B (zh) * | 2019-11-05 | 2022-03-01 | 中国检验检疫科学研究院 | 一种快速测定木质食品接触材料中菊酯类防腐剂的方法 |
WO2021102380A1 (en) | 2019-11-22 | 2021-05-27 | Bayer Cropscience Lp | Methods of fermentation of recombinant bacillus spores |
CN110881482B (zh) * | 2019-12-06 | 2020-09-25 | 广东红树林生态科技有限公司 | 一种红树植物快速生根液及其制备方法 |
CN111000876B (zh) * | 2019-12-10 | 2021-09-07 | 贵州大学 | 红棕毛筒腔菌在制备逆转肿瘤多药耐药性为敏感性的药物中的应用 |
CN110938570B (zh) * | 2019-12-13 | 2021-03-05 | 北京农业生物技术研究中心 | 一种多粘类芽孢杆菌Lla-02及其应用 |
CN111117920B (zh) * | 2020-01-07 | 2021-04-02 | 山东农业大学 | 一种产蛋白酶、产铁载体的蕈状芽孢杆菌及其应用 |
CN111826379B (zh) * | 2020-06-09 | 2021-03-19 | 扬州大学 | 芍药PlTDC基因在改变植物花色中的应用 |
CN111534472B (zh) * | 2020-06-11 | 2022-04-19 | 浙江工业大学 | 阿耶波多氏芽孢杆菌wzz10及在2-四氢糠酸手性拆分中的应用 |
CN111748497B (zh) * | 2020-07-07 | 2022-02-08 | 山东农业大学 | 一株大山芽孢杆菌及其在快速降解亚硝酸盐中的应用 |
CN111763663B (zh) * | 2020-07-09 | 2022-04-15 | 昆明理工大学 | 一种天麻葡糖基转移酶基因及应用 |
CN111826383B (zh) * | 2020-07-16 | 2022-08-02 | 昆明理工大学 | 丹波黑大豆超氧化物歧化酶基因在提高植物铝耐受性中的应用 |
CN111778195B (zh) * | 2020-07-31 | 2022-05-06 | 河北省农林科学院生物技术与食品科学研究所 | 一种阿氏芽孢杆菌、菌剂和制备方法与应用 |
CN111978388B (zh) * | 2020-09-02 | 2022-02-25 | 厦门大学 | 水稻UV-B光受体基因OsUVR8a及其应用 |
EP4214313A1 (en) | 2020-09-21 | 2023-07-26 | Bayer CropScience LP | Novel serine proteases |
CN112342170B (zh) * | 2020-11-25 | 2022-03-11 | 山东省科学院生态研究所(山东省科学院中日友好生物技术研究中心) | 一种生防细菌bc04及其菌剂、菌剂制备方法和应用 |
CN112553109B (zh) * | 2020-12-09 | 2023-05-09 | 云南省烟草公司昆明市公司 | 一株铜绿假单胞菌y12及其应用 |
RU2752927C1 (ru) * | 2020-12-15 | 2021-08-11 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Горский государственный аграрный университет" | Способ биологизированной технологии возделывания картофеля |
CN112625949B (zh) * | 2020-12-18 | 2022-03-25 | 青岛农业大学 | 一株马赛类芽孢杆菌及其在防治植物线虫病害中的应用 |
CN112553230B (zh) * | 2020-12-21 | 2021-08-24 | 山东省科学院生物研究所 | 高产iaa绿色木霉工程菌株及其构建方法与应用 |
CN112553114B (zh) * | 2020-12-22 | 2022-09-13 | 华中农业大学 | 阿耶波多氏芽胞杆菌1k02966及其应用 |
CN112795507A (zh) * | 2021-01-07 | 2021-05-14 | 河南省农业科学院植物保护研究所 | 一种能够防治丹参根腐病的多粘类芽孢杆菌及其应用 |
US20220256782A1 (en) * | 2021-02-18 | 2022-08-18 | Jiangxi Academy Of Eco-Environmental Sciences And Planning | Restoration Material, Restoration Method for Abandoned Ion-absorbed Rare Earth Tailings Area and Use Thereof |
CN112913969B (zh) * | 2021-03-16 | 2022-05-20 | 海南大学 | 一种非反刍动物用饲料及其制备方法 |
CN112877326B (zh) * | 2021-04-06 | 2022-07-08 | 浙江大学 | 一种调控植物抗铝性的铝离子受体alr1基因或蛋白的应用 |
CN113416669B (zh) * | 2021-06-10 | 2022-07-19 | 西北农林科技大学 | 一株产铁载体的产碱杆菌及其应用 |
EP4358847A1 (en) | 2021-06-23 | 2024-05-01 | Kimtron, Inc. | System and method for ultra-close proximity irradiation of rotating biomass |
CN113403209B (zh) * | 2021-07-30 | 2022-08-26 | 西南大学 | 天冬氨酸蛋白酶基因在改良球孢白僵菌菌株中的应用 |
CN113558070A (zh) * | 2021-08-04 | 2021-10-29 | 宁夏师范学院 | 一种绒毛栓菌发酵液乙酸乙酯提取物的制备及应用 |
CN113881669B (zh) * | 2021-09-14 | 2023-09-01 | 广东可普睿生物科技有限公司 | 一种水稻表达系统的诱导性启动子及合成生物平台和其应用 |
CN113875778A (zh) * | 2021-09-29 | 2022-01-04 | 季红进 | 含有植物免疫活性蛋白和5-氨基乙酰丙酸或其衍生物的生物刺激剂 |
WO2023092050A1 (en) | 2021-11-20 | 2023-05-25 | Bayer Cropscience Lp | Beneficial combinations with recombinant bacillus cells expressing a serine protease |
CN114045223B (zh) * | 2021-11-23 | 2023-09-05 | 广西壮族自治区药用植物园 | 来源于黄花梨的拟盘多毛孢属菌株p6、繁育方法和用途 |
CN114317569B (zh) * | 2021-12-15 | 2022-11-25 | 西北农林科技大学 | 苹果基因MdBGLU40及在苹果树抗腐烂病中的应用 |
CN114574384A (zh) * | 2022-01-25 | 2022-06-03 | 夏文杰 | 一种用微生物植物提取的生物农药及其应用 |
CN114804936B (zh) * | 2022-05-10 | 2023-08-11 | 北京沃土天地生物科技股份有限公司 | 一种有机固体废弃物生物干化处理方法 |
CN116286437B (zh) * | 2022-08-08 | 2023-08-18 | 河北农业大学 | 一种枯草芽孢杆菌2-20及其应用 |
CN116196257B (zh) * | 2023-03-28 | 2023-10-10 | 维怡美生物科技(广州)有限公司 | 一种含有绣球菌提取物的抗衰老组合物及其应用 |
CN116751689B (zh) * | 2023-06-12 | 2024-03-12 | 四川农业大学 | 一种浅囊状栓菌sicau-t41及其应用 |
CN116573970B (zh) * | 2023-07-12 | 2023-09-22 | 云南省农业科学院农业环境资源研究所 | 含有伯克霍尔德氏菌的组合物及其在植物病害中的应用 |
CN117050922B (zh) * | 2023-10-11 | 2023-12-08 | 江苏聚庚科技股份有限公司 | 一种含氟苯腈类化合物降解菌及其在环境治理中的应用 |
CN117603884B (zh) * | 2024-01-17 | 2024-03-26 | 广州同康生物科技有限公司 | 一种嗜黏蛋白阿克曼氏菌菌粉及其制备方法 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6333302B1 (en) * | 1997-09-03 | 2001-12-25 | Cornell Research Foundation, Inc. | Use of hypersensitive response elicitor protein or polypeptide from Clavibacter michiganensis for disease resistance, growth enhancement and insect control |
WO2002000232A2 (en) * | 2000-06-26 | 2002-01-03 | Maxygen, Inc. | Methods and compositions for developing spore display systems for medicinal and industrial applications |
WO2006012366A2 (en) * | 2004-07-20 | 2006-02-02 | Phyllom Llc | Methods for making and using recombinant bacillus thuringiensis spores |
RU2458132C2 (ru) * | 2007-08-10 | 2012-08-10 | Шанхай Инститьютс Фор Байолоджикал Сайенсиз, Чайниз Экедеми Оф Сайенсиз | Регулирующий высоту растений ген и его применения |
Family Cites Families (89)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5554521A (en) | 1984-03-26 | 1996-09-10 | Dna Plant Technology Corporation | Chitinase-producing plants |
US5858962A (en) | 1987-05-11 | 1999-01-12 | Ambi Inc. | Composition for treating mastitis and other staphylococcal infections |
US5290914A (en) * | 1988-04-28 | 1994-03-01 | Mycogen Corporation | Hybrid diphtheria-B.t. pesticidal toxins |
JPH0649659B2 (ja) | 1988-05-26 | 1994-06-29 | ニカヘルス プロダクツ,リミテッド | 抗ウイルス及び抗菌組成物並びに使用方法 |
PH30997A (en) | 1990-03-12 | 1997-12-23 | Ciba Geigy | Antipathologenically effective compositions comprising lytic peptides and hydrolytic enzymes. |
US5631007A (en) | 1990-03-12 | 1997-05-20 | Ciba-Geigy Corporation | Anti-pathogenically effective compositions comprising lytic peptides and hydrolytic enzymes |
US5849870A (en) | 1993-03-25 | 1998-12-15 | Novartis Finance Corporation | Pesticidal proteins and strains |
DE4412834A1 (de) | 1994-04-14 | 1995-10-19 | Bayer Ag | Insektizide Mischungen |
US5650372A (en) | 1995-05-30 | 1997-07-22 | Micro Flo Company | Plant treatment with bacillus strain ATCC |
IL121404A0 (en) | 1997-07-27 | 1998-01-04 | Yissum Res Dev Co | Transgenic higher plants of altered structural morphology |
US7432097B2 (en) | 1997-08-13 | 2008-10-07 | Verenium Corporation | Phytases, nucleic acids encoding them and methods of making and using them |
US5958104A (en) | 1997-09-11 | 1999-09-28 | Nonomura; Arthur M. | Methods and compositions for enhancing plant growth |
US6323023B1 (en) | 1998-01-13 | 2001-11-27 | Yissum Research Development Co., Ltd. | Vectors containing nucleic acids coding for Arabidopsis thaliana endo-1,4-β-glucanase secretion signal peptide |
WO2000009656A2 (en) | 1998-08-10 | 2000-02-24 | The General Hospital Corporation | Transgenic plants expressing a dual-specificity mapk phosphatase and uses thereof |
JP3140430B2 (ja) | 1999-03-09 | 2001-03-05 | 株式会社 バイテク | バチルス属微生物とその用途 |
US7033781B1 (en) | 1999-09-29 | 2006-04-25 | Diversa Corporation | Whole cell engineering by mutagenizing a substantial portion of a starting genome, combining mutations, and optionally repeating |
RU2160778C1 (ru) | 1999-11-10 | 2000-12-20 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Пермский завод им. С.М. Кирова" | Штамм бактерий bacillus сereus-продуцент нитрилгидратазы |
US6630340B2 (en) | 2000-03-01 | 2003-10-07 | Novozymes A/S | Family 5 xyloglucanases |
WO2002077170A2 (en) | 2001-03-22 | 2002-10-03 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Expansin protein and polynucleotides and methods of use |
KR20030015943A (ko) | 2001-08-18 | 2003-02-26 | 한국바이오비료 주식회사 | 섬유질 분해 효소를 분비하는 유전자, 유전자로부터분비된 효소, 유전자를 포함하는 미생물, 미생물을 이용한유기질 비료 |
CA2474939C (en) | 2002-02-05 | 2013-01-22 | National Research Council Of Canada | Methods for modifying plant responses to stress and correspondingly derived plants |
US20030228679A1 (en) | 2002-03-27 | 2003-12-11 | Smith Donald L. | Compositions and methods for increasing plant growth by inoculation with bacillus strains |
ES2193892B1 (es) | 2002-04-29 | 2005-05-16 | Biotecnologicos Y Mercados, S.L. | Fertilizante nitrogenado y procedimiento de obtencion del mismo. |
EP2298904B1 (en) | 2002-06-14 | 2017-05-24 | BP Corporation North America Inc. | Xylanases, nucleic acids encoding them and methods for making and using them |
EP1590466B1 (en) | 2003-02-06 | 2010-09-22 | CropDesign N.V. | Method for modifying plant growth characteristics |
US7960148B2 (en) | 2003-07-02 | 2011-06-14 | Verenium Corporation | Glucanases, nucleic acids encoding them and methods for making and using them |
KR100518953B1 (ko) | 2003-09-19 | 2005-10-12 | 주식회사 제노포커스 | 포자 외막단백질을 이용한 목적단백질의 표면발현 방법 |
RU2006139953A (ru) | 2004-04-13 | 2008-05-20 | Е.И. Дюпон Де Немур Энд Компани (Us) | Антраниламидные инсектициды |
GB0416629D0 (en) | 2004-07-27 | 2004-08-25 | Univ Sheffield | Crop spray |
WO2007086898A2 (en) | 2005-03-31 | 2007-08-02 | University Of South Carolina | Methods and compositions related to anthrax spore glycoproteins |
WO2006110508A2 (en) | 2005-04-07 | 2006-10-19 | The Samuel Roberts Noble Foundation, Inc. | Plants with increased phosphorous uptake |
CN101228277B (zh) | 2005-07-18 | 2013-11-27 | 巴斯福植物科学有限公司 | 过表达accdp基因的植物中的产量增加 |
JP2007117066A (ja) * | 2005-09-30 | 2007-05-17 | Techno Giken Kk | 植物種子の物理処理方法と育種、育苗方法 |
EP1948799A4 (en) | 2005-11-17 | 2009-09-30 | Univ Mcgill | USE OF BACTERIOCINS TO ENHANCE GROWTH AND RESISTANCE TO PLANT DISEASES |
KR100784261B1 (ko) * | 2006-01-02 | 2007-12-11 | 한국과학기술원 | 탄저균의 포자외막 단백질을 이용한 목적단백질의 미생물표면발현방법 |
CN105284792A (zh) | 2006-02-27 | 2016-02-03 | 西北大学 | 含有游离脂肪酸和/或游离脂肪酸衍生物的微乳液形式组合物 |
EP2049669A2 (en) * | 2006-08-09 | 2009-04-22 | DSMIP Assets B.V. | Spore surface displays of bioactive molecules |
WO2008071767A1 (en) | 2006-12-15 | 2008-06-19 | Cropdesign N.V. | Plants having enhanced seed yield-related traits and a method for making the same |
US8551751B2 (en) | 2007-09-07 | 2013-10-08 | Dyadic International, Inc. | BX11 enzymes having xylosidase activity |
GB0717911D0 (en) | 2007-09-14 | 2007-10-24 | Univ Stirling | Vaccine |
DE112008002456T5 (de) | 2007-09-21 | 2011-01-13 | Basf Plant Science Gmbh | Pflanzen mit erhöhtem Ertrag |
US9133251B2 (en) | 2008-02-22 | 2015-09-15 | The Curators Of The University Of Missouri | Bacillus based delivery system and methods of use |
EP2350289A1 (en) | 2008-10-23 | 2011-08-03 | BASF Plant Science GmbH | Plants with increased yield (nue) |
CN101481666B (zh) | 2008-11-19 | 2011-08-24 | 黄晓东 | 植物促生菌、含有植物促生菌的微生物制剂及其制备方法 |
AU2009327244B2 (en) | 2008-12-18 | 2017-01-19 | Versitech Limited | Method for speeding up plant growth and improving yield by introducing phosphatases in transgenic plant |
KR20110140128A (ko) * | 2009-03-27 | 2011-12-30 | 고조 인더스트리즈, 인크 | 포자-표면 상호작용을 길항하는 화합물을 스크리닝 및 사용하기 위한 조성물 및 방법 |
BR112012009566A2 (pt) | 2009-10-22 | 2017-05-09 | Basf Plant Science Co Gmbh | plantas que possuem caracteristicas relativas a rendimento aprimoradas e método de sua elaboração |
EP2501816A4 (en) | 2009-11-17 | 2013-07-03 | Basf Plant Science Co Gmbh | PLANTS WITH INCREASED PERFORMANCE |
MX355405B (es) | 2010-02-28 | 2018-04-18 | Los Alamos Nat Security Llc | Crecimiento de planta incrementado por modulacion de la expresion omega-amidasa en plantas. |
ES2378040B1 (es) * | 2010-03-31 | 2013-02-18 | Probelte, S.A | Un preparado biológico bionematicida y estimulador del crecimiento vegetal y cultivos puros de las cepas denominadas n11, sr11 y alo1, contenidas en el mismo. |
RU2439148C1 (ru) | 2010-05-21 | 2012-01-10 | Российская Федерация, От Имени Которой Выступает Министерство Промышленности И Торговли Российской Федерации | ШТАММ ГИБРИДНЫХ КУЛЬТИВИРУЕМЫХ КЛЕТОК ЖИВОТНЫХ Mus musculus 1E6 - ПРОДУЦЕНТ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ, СПЕЦИФИЧНЫХ К СПОРАМ Bacillus anthracis |
WO2012001000A1 (en) | 2010-06-30 | 2012-01-05 | Dsm Ip Assets B.V. | Spore surface display of bioactive molecules |
CN101919407A (zh) | 2010-07-21 | 2010-12-22 | 合肥工业大学 | 阿维菌素与苏云金芽孢杆菌复配的生物悬浮杀虫剂 |
CN103443278B (zh) | 2011-03-23 | 2017-07-04 | 诺维信公司 | 生产分泌型多肽的方法 |
US20120259101A1 (en) | 2011-04-11 | 2012-10-11 | Li Tan | Isopeptide Bond Formation in Bacillus Species and Uses Thereof |
JP5747625B2 (ja) | 2011-04-12 | 2015-07-15 | 住友化学株式会社 | マンデロニトリル化合物の製造方法 |
EP2702156A1 (en) | 2011-04-27 | 2014-03-05 | Aarhus Universitet | High expression cereal phytase gene |
CN103086784B (zh) | 2011-10-27 | 2014-06-25 | 胡茂森 | 一种氨基酸加酶生物肥及其制备方法 |
PL2790513T3 (pl) | 2011-12-13 | 2020-04-30 | Monsanto Technology Llc | Drobnoustroje promujące wzrost roślin i ich zastosowanie |
PL2806740T3 (pl) | 2012-01-25 | 2018-07-31 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Kombinacje związków czynnych zawierające fluopyram, Bacillus i środek do zwalczania biologicznego |
NZ742943A (en) | 2012-05-30 | 2019-04-26 | Bayer Cropscience Ag | Compositions comprising a biological control agent and a fungicide from the group consisting of inhibitors of the respiratory chain at complex i or ii |
EP3363289A3 (en) | 2012-05-30 | 2018-10-17 | Bayer CropScience Aktiengesellschaft | Compositions comprising a biological control agent and an insecticide |
PT2854547T (pt) | 2012-05-30 | 2018-11-16 | Bayer Cropscience Ag | Composição que compreende um agente de controlo biológico e trifloxistrobina |
JP2014001179A (ja) | 2012-06-20 | 2014-01-09 | Sumitomo Chemical Co Ltd | 有害生物の防除方法 |
MX2014015924A (es) | 2012-06-29 | 2015-08-20 | Pioneer Hi Bred Int | Manipulacion de fosfatasas de proteina de serina/treonina para mejora de cultivo. |
US9125419B2 (en) | 2012-08-14 | 2015-09-08 | Marrone Bio Innovations, Inc. | Bacillus sp. strain with antifungal, antibacterial and growth promotion activity |
GB2507760B (en) | 2012-11-08 | 2015-07-08 | Inst Of Food Res | Methods |
WO2014079814A1 (en) | 2012-11-22 | 2014-05-30 | Basf Se | Pesticidal mixtures |
BR112015011777B1 (pt) | 2012-11-22 | 2019-09-24 | Basf Corporation | Mistura sinérgica, kit para preparar uma composição pesticida útil, composição pesticida e método para proteger material de propagação vegetal |
US9775351B2 (en) | 2012-11-30 | 2017-10-03 | Bayer Cropscience Ag | Ternary fungicidal and pesticidal mixtures |
US9573980B2 (en) * | 2013-03-15 | 2017-02-21 | Spogen Biotech Inc. | Fusion proteins and methods for stimulating plant growth, protecting plants from pathogens, and immobilizing Bacillus spores on plant roots |
US9392796B2 (en) | 2013-03-15 | 2016-07-19 | Spogen Biotech Inc. | Plant growth-promoting bacteria and methods of use |
ES2759025T3 (es) | 2013-10-11 | 2020-05-07 | Suunil Sudhakar Chaudhry | Un proceso para producir un fertilizante de nitrógeno ecológico, biodisponible y muy nutritivo a partir de organismos no modificados genéticamente |
CL2013003780A1 (es) | 2013-12-30 | 2014-06-20 | Univ Concepcion | Biofertilizante y su proceso de elaboración. |
CN106164275A (zh) | 2014-02-04 | 2016-11-23 | 佛罗里达大学研究基金会公司 | 蜈蚣草植酸酶核苷酸和氨基酸序列及使用方法 |
HU231353B1 (hu) | 2014-02-10 | 2023-03-28 | BioFil Mikrobiológiai, Géntechnológiai és Biokémiai Kft | Stressztalajok oltására szolgáló talajbaktériumok |
WO2016044563A1 (en) | 2014-09-17 | 2016-03-24 | Bayer Cropscience Lp | Compositions comprising recombinant bacillus cells and a fungicide |
MX2017003610A (es) | 2014-09-17 | 2017-07-13 | Bayer Cropscience Lp | Composiciones que comprenden celulas recombinantes de bacillus y un fungicida. |
WO2016044575A1 (en) | 2014-09-17 | 2016-03-24 | Bayer Cropscience Lp | Compositions comprising recombinant bacillus cells and an insecticide |
WO2016044548A1 (en) | 2014-09-17 | 2016-03-24 | Bayer Cropscience Lp | Compositions comprising recombinant bacillus cells and another biological control agent |
MX2017003452A (es) | 2014-09-17 | 2017-07-28 | Bayer Cropscience Lp | Composiciones que comprenden celulas recombinantes de bacillus y otro agente de control biologico. |
US10448647B2 (en) | 2014-09-17 | 2019-10-22 | Basf Corporation | Compositions comprising recombinant bacillus cells and an insecticide |
IL295968A (en) * | 2014-09-17 | 2022-10-01 | Spogen Biotech Inc | Fusion proteins, recombinant bacteria, and methods for using recombinant bacteria |
KR102472312B1 (ko) | 2014-10-21 | 2022-11-29 | 헥시마 리미티드 | 치료 방법 |
US10851027B2 (en) | 2014-12-22 | 2020-12-01 | Biomineral Systems LLc | Phosphorus fertilizer bio-catalyst for sustainable crop production |
CN104945164A (zh) | 2015-07-07 | 2015-09-30 | 卞佳林 | 一种种植红薯用的肥料及其制备方法 |
EP3429347A4 (en) | 2016-03-16 | 2020-07-29 | Spogen Biotech Inc. | PROCESSES FOR PROMOTING PLANT HEALTH USING FREE ENZYMES AND MICRO-ORGANISMS OVEREXPRESSING ENZYMES |
US20170347664A1 (en) | 2016-03-16 | 2017-12-07 | Spogen Biotech Inc. | Fusion proteins, recombinant bacteria, and exosporium fragments for animal health and aquaculture |
AU2018337974A1 (en) | 2017-09-20 | 2020-05-07 | Spogen Biotech Inc. | Fusion proteins, recombinant bacteria, and exosporium fragments for plant health |
-
2014
- 2014-03-14 US US14/213,525 patent/US9573980B2/en active Active
- 2014-03-17 CN CN201480015271.2A patent/CN105263965A/zh active Pending
- 2014-03-17 EP EP14763028.9A patent/EP2970507B1/en active Active
- 2014-03-17 CA CA2907369A patent/CA2907369A1/en active Pending
- 2014-03-17 WO PCT/US2014/030824 patent/WO2014145964A1/en active Application Filing
- 2014-03-17 BR BR122022017521-0A patent/BR122022017521B1/pt active IP Right Grant
- 2014-03-17 MX MX2015013047A patent/MX371129B/es active IP Right Grant
- 2014-03-17 US US14/775,892 patent/US9850289B2/en active Active
- 2014-03-17 JP JP2016502564A patent/JP6693865B2/ja active Active
- 2014-03-17 RU RU2015144152A patent/RU2688832C2/ru not_active Application Discontinuation
- 2014-03-17 AU AU2014232376A patent/AU2014232376B2/en active Active
-
2015
- 2015-09-10 IL IL241565A patent/IL241565B/en active IP Right Grant
-
2017
- 2017-01-24 US US15/414,050 patent/US10092009B2/en active Active
- 2017-12-19 US US15/846,487 patent/US10349660B2/en active Active
-
2018
- 2018-09-28 US US16/145,628 patent/US10555534B2/en active Active
-
2019
- 2019-07-11 US US16/508,524 patent/US10779542B2/en active Active
-
2020
- 2020-02-10 US US16/785,870 patent/US11134681B2/en active Active
- 2020-04-16 JP JP2020073437A patent/JP2020143064A/ja active Pending
- 2020-09-18 US US17/025,483 patent/US11882829B2/en active Active
- 2020-10-01 IL IL277755A patent/IL277755B/en unknown
-
2021
- 2021-11-14 IL IL288066A patent/IL288066A/en unknown
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6333302B1 (en) * | 1997-09-03 | 2001-12-25 | Cornell Research Foundation, Inc. | Use of hypersensitive response elicitor protein or polypeptide from Clavibacter michiganensis for disease resistance, growth enhancement and insect control |
WO2002000232A2 (en) * | 2000-06-26 | 2002-01-03 | Maxygen, Inc. | Methods and compositions for developing spore display systems for medicinal and industrial applications |
WO2006012366A2 (en) * | 2004-07-20 | 2006-02-02 | Phyllom Llc | Methods for making and using recombinant bacillus thuringiensis spores |
RU2458132C2 (ru) * | 2007-08-10 | 2012-08-10 | Шанхай Инститьютс Фор Байолоджикал Сайенсиз, Чайниз Экедеми Оф Сайенсиз | Регулирующий высоту растений ген и его применения |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN112335508A (zh) * | 2020-11-06 | 2021-02-09 | 中国科学院成都生物研究所 | 含壳聚糖/葡聚糖的苔藓孢子体悬浮液在裸地覆绿的应用方法 |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11882829B2 (en) | Fusion proteins and methods for stimulating plant growth, protecting plants, and immobilizing bacillus spores on plants | |
US20220369650A1 (en) | Compositions comprising recombinant bacillus cells and another biological control agent | |
BR112015023407B1 (pt) | Métodos para estimular o crescimento de plantas | |
BR122023008196B1 (pt) | Bactéria bacillus recombinante, formulação e semente de planta revestida com as mesmas | |
BR122023008163B1 (pt) | Método para aumentar a resistência ao estresse em uma planta | |
BR122020000760B1 (pt) | Bactéria bacillus recombinante, sementes de plantas revestidas, e formulação | |
BR122022017524B1 (pt) | Bactérias bacillus recombinantes, sementes de plantas revestidas, e formulação | |
RU2815587C2 (ru) | Гибридные белки и способы стимуляции роста растений, защиты растений и иммобилизации спор bacillus на растениях | |
NZ713036B2 (en) | Fusion proteins and methods for stimulating plant growth, protecting plants, and immobilizing bacillus spores on plants |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
FA92 | Acknowledgement of application withdrawn (lack of supplementary materials submitted) |
Effective date: 20180518 |
|
FZ9A | Application not withdrawn (correction of the notice of withdrawal) |
Effective date: 20180609 |