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Estudio químico y de actividad biológica de compuestos extraidos de esponjas marinas colombianas View project
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Alejandro Martínez M.
Química de Productos Naturales
Alejandro Martínez M.
alejandro.martinez@udea.edu.co
Fotografías de interior
https://pxhere.com/
ISBN: 978-958-5596-93-1
Medellín, Colombia
2020
do de La Universidad Nacional de Colombia.
, Facultad de Ciencias Farmacéuticas y Alimentarias, vinculado a La Universidad de Antioquia desde 1985.
i
Agradecimientos
Este trabajo está dedicado a los estudiantes y colegas que durante este tiempo han tenido la
paciencia de leerme y escucharme. También a personas que por internet me han sugerido
algunas modificaciones. A todos ellos muchas gracias, y mi reconocimiento personal.
A La Universidad de Antioquia y a La Facultad de Ciencias Farmacéuticas y Alimentarias,
por acogerme en sus aulas, laboratorios, oficinas, y tantos sitios tan hermosos y personas
amables, que pudieron soportarme durante estos años, a mis profesores, a mis compañeros
de oficina, de la Facultad y a los miles de estudiantes con quienes traté de aprender acerca
de los productos naturales. Siempre los llevaré en mi corazón con mucha humildad y eterno
agradecimiento.
A la profesora Carmenza Duque Beltrán, profesora emérita y distinguida de la Universidad
Nacional de Colombia. Por su paciencia, por todo su apoyo y su ejemplo de trabajo
dedicado a la docencia en química y a la investigación de la química de los productos
naturales marinos, que me han servido de modelo para el desarrollo no solo como
investigador sino como docente y como persona.
A los profesores y estudiantes del grupo de investigación Productos Naturales Marinos, de
la Universidad de Antioquia.
A mi familia, por todo el apoyo que me han dado no solo para este proyecto, sino para
todos los trabajos realizados en medio de diferentes dificultades.
Al SDBS, National Institute of Advanced Industrial Science and Technology, Japan; por
permitir el uso de los datos espectrales referenciados dentro del texto.
Al sitio web NMRdb.org, por poner a libre disposición herramientas tan útiles para que más
personas puedan acceder a este campo inmenso de conocimiento como es el de la química
de los productos naturales, y la química orgánica en general.
A todas aquellas personas y entidades, que de alguna forma me animaron a desarrollar y
contribuyeron a cristalizar este proyecto.
Alejandro Martínez M.
Medellín, Colombia
2020
Presentación
Este texto es una recopilación actualizada de las notas y documentos que, durante más de
30 años, el autor ha desarrollado como profesor en la Facultad de Ciencias Farmacéuticas
y Alimentarias de La Universidad de Antioquia.
El texto está dirigido, especialmente, a los estudiantes del pregrado de química
farmacéutica quienes han cursado previamente las asignaturas: química orgánica,
bioquímica y análisis instrumental, y pretende que tengan un acercamiento al extenso
campo que es la química de los productos naturales, además trata de cubrir en parte la
poca existencia de textos en español sobre el tema. No pretende ser un tratado completo
sobre los diferentes temas presentados, pues queda limitado a las posibilidades y
experiencia del autor, y está dirigido a los estudiantes de las asignaturas Farmacognosia II
y Fitoquímica.
El énfasis es dado a los aspectos químicos de los productos naturales pero también se
mencionan el potencial farmacéutico y el uso aprobado de algunas sustancias, drogas
vegetales o plantas; pero solo a manera de referencia para mostrar las posibilidades de los
productos naturales desde lo académico y lo relacionado a la investigación científica,
nunca para su uso o aprovechamiento comercial ni para suplir información ante los entes
regulatorios oficiales ni para engañar al ciudadano común en los diferentes medios de
comunicación, aspectos estos que están por fuera del interés y el alcance de este texto.
A manera de aproximación, y desde la experiencia del autor, se relaciona la presencia en
las sustancias estudiadas, de grupos funcionales como los hidroxilos fenólicos
relacionándolos con su potencial actividad antioxidante, y de grupos como los anillos
lactónicos, los cuales están presentes en muchas sustancias naturales bioactivas, como los
cardiotónicos y las sesquiterpénlactonas. A lo largo de los diferentes capítulos se
referencia, preferiblemente mediante publicaciones indexadas recientes, el uso potencial
de los diferentes metabolitos contra diferentes enfermedades, citando en muchos casos los
nombres comunes y binomiales de diferentes plantas y organismos, en los cuales se han
encontrado y se investigan estas sustancias.
Debido a que esta área del conocimiento es muy extensa y en continuo desarrollo por
nuevos hallazgos, en este texto los capítulos tienen alcances diferentes. Los capítulos 1 al
4, en particular, incluyen temas generales sobre la fitoquímica de los metabolitos
secundarios y tienen un desarrollo más completo sobre aspectos y metodología
experimentales. Los demás capítulos cubren especialmente tópicos especiales sobre
algunos temas en los que el autor ha tenido experiencia docente e investigativa como los
productos naturales marinos, y otros temas que están emergiendo cada vez más como
fuentes de nuevas sustancias bioactivas como son los hongos. De estos tópicos algunos
tienen un desarrollo más extenso en cuanto a aspectos fitoquímicos, como son los
capítulos 5 y 7. Los demás capítulos resumen solo algunos aspectos generales que, a juicio
del autor, pueden motivar a los estudiantes y lectores a trabajar en esas áreas de
investigación.
En la introducción se realiza un ejercicio (o taller), en el cual se asignan a los estudiantes
diferentes tipos de estructuras químicas de metabolitos secundarios de estructura
relativamente simple. Con este ejercicio se pretende que el estudiante a partir de los
conocimientos previos de otras asignaturas, relacione lo allí aprendido con el caso de los
metabolitos secundarios que comienza a conocer. Además, se reafirman algunos conceptos
básicos de química orgánica, que son necesarios para el estudio y comprensión de la
química de los productos naturales.
El capítulo primero, trata de los métodos generales de extracción, aislamiento y
caracterización, y menciona tanto los métodos clásicos, y la evolución hacia el uso por
ejemplo con métodos de extracción más modernos, más eficientes y especialmente más
amigables con el medio ambiente y la salud. Inclusive se propone el remplazo en las
técnicas de extracción e identificación, de solventes tóxicos como cloroformo,
diclorometano y metanol, por unos menos dañosos para la salud y el medio ambiente
como son el acetato de etilo, y el etanol, y otros innovadores como son los solventes
eutécticos viscosos. En las técnicas de caracterización química se hace énfasis especial en
la resonancia magnética nuclear, para que el estudiante la aplique en la identificación y
caracterización de metabolitos secundarios.
El capítulo segundo trata sobre una gran clase de productos naturales como son los
compuestos fenólicos o aromáticos en general, y se enfatiza en dos grupos de sustancias
como son las antraquinonas y los flavonoides. Las primeras debido a su presencia en
muchas drogas vegetales aceptadas por diferentes farmacopeas, como laxantes; y las
segundas como antiinflamatorias de uso externo. Pero se menciona que más allá de su uso
aceptado, presentan grandes posibilidades para el desarrollo de nuevas terapias contra
diferentes enfermedades. Es de esperar que el estudiante con los diferentes aspectos
químicos y de actividad biológica mencionados para estas dos grandes clases de
compuestos fenólicos naturales, tenga herramientas para acercarse al conocimiento sobre
los compuestos fenólicos naturales en general. Se incluyen algunos ejercicios, con el fin
de que el estudiante sea capaz de resolver problemas de asignación de la estructura
química de algunos metabolitos con anillos aromáticos, haciendo uso especial de los
datos de
resonancia magnética nuclear, y predecir en algunos casos el origen biogenético y la
potencial actividad antioxidante, entre otras.
El capítulo tercero, está relacionado con otra gran cantidad de sustancias, que
generalmente no contienen en su estructura química el anillo aromático. El grupo más
representativo de estos son los terpenoides. Se profundiza en algunos aspectos de
compuestos tales como los esteroles, las saponinas y los cardiotónicos. Los esteroles y
saponinas son materias primas importantes en la industria farmacéutica para la producción
de una gran cantidad y diversidad de medicamentos esteroides. Los cardiotónicos, son
drogas aceptadas en diferentes farmacopeas y legislaciones porque estimulan la función
cardiaca. Además, recientemente se les han reportado otras actividades biológicas
interesantes. Se plantean algunos ejercicios sobre la determinación estructural de algunos
esteroides, a partir de datos de espectrometría de masas y resonancia magnética nuclear,
para que el estudiante afiance su conocimiento sobre la química de estas sustancias.
El capítulo cuarto, trata acerca de los compuestos nitrogenados como son los alcaloides.
Estos constituyen una gran cantidad de compuestos naturales nitrogenados, que presentan
diferentes actividades biológicas, particularmente sobre el sistema nervioso. Se dan
algunos aspectos químicos generales de esta clase de compuestos.
El capítulo cinco, cubre algunos aspectos generales sobre los aceites esenciales, los cuales
además de su uso como aromatizantes, presentan diferentes propiedades biológicas como
antimicrobianos y antioxidantes, inclusive con uso potencial en enfermedades
cardiovasculares. Por tratarse en muchos casos de mezclas de compuestos con anillos
aromáticos y otros no aromáticos como terpenoides, no se incluye este tema en los
capítulos precedentes.
El capítulo seis es una breve revisión sobre los productos naturales marinos, mostrando
especialmente la gran variedad estructural y la complejidad química de estas sustancias,
con algunos ejemplos representativos recientes.
El capítulo siete trata brevemente varios aspectos químicos y de actividad biológica de las
sesquiterpénlactonas, las cuales son sustancias interesantes farmacéuticamente por sus
propiedades sobre las células. Otra vez es bueno precisar, que estos compuestos no se
incluyen el capítulo 3, debido a que el anillo lactónico está relacionado con actividades
biológicas relativamente específicas como la citotoxicidad, lo cual no es una característica
general de los compuestos o metabolitos mencionados en dicho capítulo 3, ni con los
aceites esenciales.
El capítulo ocho, menciona algunos tópicos básicos relacionados con otros derivados de la
acetilcoenzima-A, como son las prostaglandinas, las cadenas policetídicas y su papel
como precursores de antibióticos como las tetraciclinas, y otros compuestos aromáticos.
Los capítulos 9 y 10, tratan algunos aspectos básicos generales de metabolitos interesantes
de hongos y los glicósidos cianogénicos.
El capítulo 11, trata algunos aspectos generales de los compuestos azufrados naturales,
especialmente sobre los que se han reportado estudios químicos y actividad biológica, y
haciendo énfasis especial en los glucosinolatos, por sus estudios básicos reportados sobre
su potencial para la prevención de cáncer y enfermedades neurodegenerativas, y en
general sobre el sistema inmune.
La bibliografía se escogió considerando especialmente la más reciente y que está
disponible en las bases de datos de La Universidad de Antioquia, en La Biblioteca Central
y en las del formato de acceso abierto (open Access), esto con el objetivo que los
estudiantes y demás interesados, puedan tener acceso a los documentos, con los menores
costos económicos. También es importante la disponibilidad actual de herramientas de
software en línea como nmrdb.org, que permiten al estudiante avanzar en las técnicas de
dilucidación estructural de los productos naturales.
Contenido
Introducción..........................................................................................................................................................1
Capítulo 1. Técnicas generales de aislamiento, separación, caracterización y cuantificación de metabolitos
secundarios.........................................................................................................................................................18
Técnicas generales de extracción de metabolitos secundarios.......................................................................21
Compuestos solubles en agua y solventes polares.....................................................................................21
Compuestos solubles en solventes orgánicos de mediana y baja polaridad...............................................22
Compuestos solubles en soluciones acuosas alcalinas...............................................................................23
Compuestos solubles en soluciones acuosas ácidas...................................................................................24
Extracción con solventes eutécticos viscosos (DES) y líquidos iónicos (IL)............................................24
Extracción en fase sólida............................................................................................................................28
Extracción Sohxlet......................................................................................................................................29
Extracción asistida con ultrasonido............................................................................................................30
Extracción con fluidos supercríticos y subcríticos.....................................................................................30
Extracción asistida con microondas...........................................................................................................31
Cromatografía en Capa Fina y en Columna (CCF y CC)...............................................................................32
Cromatografía Líquida de Alta Eficiencia (sigla inglesa HPLC)...................................................................33
Técnicas generales de caracterización de metabolitos secundarios...............................................................34
Espectroscopia Ultravioleta-Visible (UV-vis)...........................................................................................35
Espectroscopia infrarroja (IR)....................................................................................................................37
Espectrometría de Resonancia Magnética Nuclear....................................................................................38
Espectrometría de masas............................................................................................................................47
Técnicas generales de cuantificación de metabolitos secundarios.................................................................50
Análisis fitoquímico preliminar......................................................................................................................52
Ensayos de reconocimiento de alcaloides..................................................................................................52
Ensayos de reconocimiento para compuestos fenólicos.............................................................................53
Ensayo de reconocimiento de flavonoides.................................................................................................53
Ensayos de reconocimiento para terpenoides.............................................................................................54
Referencias bibliográficas..............................................................................................................................58
Capítulo 2. Metabolitos secundarios aromáticos................................................................................................66
Compuestos fenólicos derivados del ácido shikímico....................................................................................67
Biogénesis de fenilalanina y tirosina..........................................................................................................72
Biogénesis de compuestos C6.......................................................................................................................................................................................76
Biogénesis de compuestos C6C1.................................................................................................................................................................................77
Biogénesis de compuestos C6C2.................................................................................................................................................................................79
Biogénesis de compuestos C6C3 (Fenilpropanoides)..................................................................................79
Biogénesis de compuestos (C6C3)2 (Lignanos) y (C6C3)n Ligninas............................................................80
Biogénesis de cumarinas............................................................................................................................85
Antraquinonas y compuestos relacionados....................................................................................................87
Nomenclatura.............................................................................................................................................89
Clasificación...............................................................................................................................................90
Biogénesis..................................................................................................................................................91
Biogénesis vía MalonilCoA.......................................................................................................................91
Biogénesis vía ácido shikímico + ácido mevalónico..................................................................................93
Distribución y estado natural......................................................................................................................94
Hechos estructurales...................................................................................................................................95
Métodos de extracción y aislamiento.........................................................................................................95
Valoración de antraquinonas y compuestos relacionados..........................................................................97
Ensayo de Bornträger.................................................................................................................................98
Ensayo con Acetato de Magnesio alcohólico.............................................................................................98
Ensayo de reducción moderada..................................................................................................................98
Espectroscopia Ultravioleta........................................................................................................................98
Espectroscopia Infrarrojo...........................................................................................................................99
Espectrometría de Resonancia Magnética Nuclear..................................................................................100
Espectrometría de masas..........................................................................................................................101
Actividad biológica..................................................................................................................................102
Algunas drogas vegetales que contienen antraquinonas y compuestos relacionados..............................102
Naftoquinonas..........................................................................................................................................106
Problemas.................................................................................................................................................108
Flavonoides..................................................................................................................................................116
Aspectos químicos y de actividad biológica de las diferentes clases de flavonoides..............................116
Distribución y estado natural....................................................................................................................129
Propiedades físicas...................................................................................................................................129
Biogénesis................................................................................................................................................130
Extracción y aislamiento..........................................................................................................................131
Cuantificación de flavonoides totales.......................................................................................................133
Ensayo de Shinoda...................................................................................................................................133
Reconocimiento de antocianinas..............................................................................................................133
Espectroscopia ultravioleta-visible...........................................................................................................134
Espectrometría de Resonancia Magnética Nuclear..................................................................................136
Espectrometría de masas..........................................................................................................................140
Hidrólisis ácida y alcalina........................................................................................................................147
Relaciones Estructura-Actividad Biológica.............................................................................................147
Metabolismo.............................................................................................................................................149
Drogas aceptadas en Colombia y otras plantas que contienen flavonoides.............................................149
Fuentes de antocianinas............................................................................................................................151
Problemas.................................................................................................................................................152
Cannabis...................................................................................................................................................155
Referencias bibliográficas............................................................................................................................158
Capítulo 3. Metabolitos secundarios no aromáticos.........................................................................................170
Esteroles.......................................................................................................................................................172
Distribución y estado natural....................................................................................................................172
Nomenclatura...........................................................................................................................................173
Propiedades físicas...................................................................................................................................175
Biogénesis................................................................................................................................................176
Hechos estructurales.................................................................................................................................176
Extracción y aislamiento..........................................................................................................................179
Ensayo de Liebermann-Burchard.............................................................................................................181
Espectroscopia infrarroja..........................................................................................................................181
Espectrometría de Resonancia Magnética Nuclear..................................................................................181
Espectrometría de masas..........................................................................................................................185
Espectroscopia ultravioleta-visible...........................................................................................................191
Correlaciones estructura y rotación específica.........................................................................................191
Utilidad farmacéutica...............................................................................................................................192
Síntesis......................................................................................................................................................194
Ejercicio....................................................................................................................................................194
Saponinas y sapogeninas esteroides.............................................................................................................201
Biogénesis................................................................................................................................................202
Hidrólisis..................................................................................................................................................204
Nomenclatura...........................................................................................................................................204
Ensayos de reconocimiento......................................................................................................................205
Ensayo de la espuma................................................................................................................................205
Ensayo de hemólisis.................................................................................................................................205
Ensayo de Liebermann-Burchard.............................................................................................................206
Extracción y aislamiento..........................................................................................................................206
Espectroscopia infrarrojo.........................................................................................................................207
Espectrometría de masas..........................................................................................................................207
Espectrometría de Resonancia Magnética Nuclear..................................................................................209
Regla de Klyne.........................................................................................................................................211
Método de Hakomori................................................................................................................................211
Distribución natural..................................................................................................................................214
Importancia farmacéutica.........................................................................................................................214
Glicósidos cardiotónicos..............................................................................................................................218
Biogénesis................................................................................................................................................219
Distribución natural..................................................................................................................................219
Ensayos de reconocimiento......................................................................................................................219
Hidrólisis..................................................................................................................................................220
Hechos estructurales.................................................................................................................................220
Extracción y aislamiento..........................................................................................................................222
Espectroscopia infrarrojo.........................................................................................................................223
Espectroscopia ultravioleta.......................................................................................................................223
Espectrometría de masas..........................................................................................................................223
Espectrometría de Resonancia Magnética Nuclear..................................................................................225
Utilidad farmacéutica...............................................................................................................................225
Algunas drogas vegetales que contienen cardiotónicos...........................................................................226
Carotenoides.................................................................................................................................................228
Clasificación.............................................................................................................................................230
Biogénesis................................................................................................................................................230
Distribución y estado natural....................................................................................................................230
Nomenclatura...........................................................................................................................................231
Extracción y aislamiento..........................................................................................................................232
Ensayos de reconocimiento......................................................................................................................234
Características espectrales........................................................................................................................234
Actividad biológica..................................................................................................................................237
Alcaloides esteroidales.................................................................................................................................237
Referencias bibliográficas............................................................................................................................240
Capítulo 4. Alcaloides......................................................................................................................................246
Definición.....................................................................................................................................................247
Función biológica.........................................................................................................................................253
Clasificación.................................................................................................................................................254
Distribución y estado natural........................................................................................................................256
Ensayos de reconocimiento..........................................................................................................................256
Extracción.....................................................................................................................................................257
Técnicas de separación e identificación.......................................................................................................259
Biogénesis....................................................................................................................................................261
Interés farmacéutico de los alcaloides..........................................................................................................265
Referencias bibliográficas............................................................................................................................270
Capítulo 5. Aceites esenciales..........................................................................................................................274
Definición.....................................................................................................................................................275
Clasificación.................................................................................................................................................275
Distribución y estado natural........................................................................................................................276
Monoterpenos y sesquiterpenos...................................................................................................................277
Biogénesis de terpenos.................................................................................................................................278
Biogénesis del ácido mevalónico.................................................................................................................279
Biogénesis de IPP y DMAPP.......................................................................................................................280
Condensación cabeza-cola de IPP y DMAPP..............................................................................................280
Biogénesis de monoterpenos en Mentha piperita.........................................................................................281
Fenilpropanos...............................................................................................................................................286
Biogénesis de fenilpropanos.........................................................................................................................288
Extracción y aislamiento de componentes de aceites esenciales..................................................................288
Métodos de separación y análisis.................................................................................................................289
Ensayos de reconocimiento..........................................................................................................................291
Espectroscopia infrarrojo.............................................................................................................................291
Espectroscopia ultravioleta...........................................................................................................................291
Resonancia Magnética Nuclear....................................................................................................................292
Espectrometría de Masas..............................................................................................................................295
Ejemplos de drogas vegetales que contienen aceites esenciales..................................................................296
Referencias bibliográficas............................................................................................................................301
Capítulo 6. Productos naturales marinos..........................................................................................................308
Referencias bibliográficas............................................................................................................................315
Capítulo 7. Sesquiterpénlactonas......................................................................................................................317
Definición.....................................................................................................................................................318
Nomenclatura...............................................................................................................................................319
Clasificación.................................................................................................................................................320
Biogénesis....................................................................................................................................................320
Distribución y estado natural........................................................................................................................320
Extracción.....................................................................................................................................................321
Separación y análisis cromatográfico...........................................................................................................322
Espectrometría de Masas..............................................................................................................................325
Resonancia Magnética Nuclear....................................................................................................................327
Espectroscopía ultravioleta...........................................................................................................................330
Espectroscopía infrarroja..............................................................................................................................330
Ensayos de reconocimiento..........................................................................................................................330
Actividad biológica......................................................................................................................................331
Referencias bibliográficas............................................................................................................................334
Capítulo 8. Otros derivados de AcetilCoenzima-A..........................................................................................337
Ácidos grasos...............................................................................................................................................338
Prostaglandinas y tromboxanos....................................................................................................................343
Poliacetilenos................................................................................................................................................344
Tetraciclinas y anfotericinas.........................................................................................................................349
Compuestos aromáticos derivados de cadenas policetídicas.......................................................................351
Referencias bibliográficas............................................................................................................................354
Capítulo 9. Metabolitos de hongos...................................................................................................................356
Ciclosporinas................................................................................................................................................359
Metabolitos con potencial anti-cáncer..........................................................................................................360
Pigmentos.....................................................................................................................................................367
Hongos marinos............................................................................................................................................368
Técnicas de separación e identificación.......................................................................................................369
Referencias bibliográficas............................................................................................................................369
Capítulo 10. Glicósidos cianogénicos..............................................................................................................373
Biogénesis....................................................................................................................................................376
Función biológica.........................................................................................................................................378
Hidrólisis enzimática....................................................................................................................................378
Ensayo de reconocimiento (Ensayo de Guignard).......................................................................................379
Distribución natural......................................................................................................................................379
Introducción
índice
Taller 1
Parte 1 (Predecir con base en la estructura molecular)
Para la sustancia X, dibujar su estructura molecular 2D y 3D con un editor molecular,
además escoja la mejor opción y complete si es necesario:
1. Es un sólido?
Sí No
2. Es coloreada?
Sí No Color aprox.:
Sí No Cuál es?
11. Al analizarlo por cromatografía en capa fina y bajo la luz de una lámpara UV
254 nm se puede observar? Sí No
1. Es un sólido?
Sí No
2. Es coloreada?
Sí No Color aprox.:
Parte 2 (Predecir con la estructura y comparar con lo reportado en el artículo asignado para
el acompañamiento, justificar cada respuesta, no basta con decir Sí o No)
Para la sustancia Z dibujar sus estructuras 2D y 3D con el editor molecular y escoja la
mejor opción y/o complete:
1. Es un sólido? Sí No
3. Es térmicamente estable? Sí No
Para el desarrollo del taller, se asigna a cada estudiante un artículo de una revista
especializada (p. ej. Fitoterapia), y se le indican cuáles corresponden a sus compuestos X, Y
y Z.
A manera de ejemplo consideremos los compuestos mostrados a continuación:
COOH
OH
HO OH
OH
Mentol Acido gálico
O
O Glu
N HO
Higrina Arbutina
Estos cuatro compuestos, son representativos de diferentes tipos de sustancias naturales. El
mentol, es un monoterpeno presente en el aceite esencial de especies de plantas del género
Mentha como la yerbabuena. A condiciones normales de temperatura y presión atmosférica
es un aceite incoloro de aroma agradable. El ácido gálico por su parte es un sólido amarillo
que está presente en muchos vegetales y es un ejemplo de compuestos C 6C1. La higrina es
un alcaloide no aromático de aroma desagradable. La arbutina es un glicósido aromático
presente en especies vegetales del género Salix.
Vamos a responder las preguntas del taller para cada una de estas sustancias. Aquí se debe
considerar que el taller está dirigido a estudiantes de pregrado en un primer curso de
química de productos naturales.
Preguntas 7 y 8. Se puede analizar por Cromatografía de Gases? ¿Se puede analizar por
HPLC?
Para responder estas preguntas, nuevamente se debe considerar la estabilidad térmica de las
sustancias. Ya que las sustancias térmicamente estables en general pueden analizarse por
cromatografía de gases, porque se pueden vaporizar. Pero en cambio las sustancias
térmicamente inestables no se pueden analizar por cromatografía de gases, porque no se
pueden vaporizar o se descomponen al calentarlas. Por otro lado, la cromatografía líquida
HPLC permite analizar todo tipo de sustancias naturales, pues generalmente no requiere del
uso de altas temperaturas, y es una técnica de separación cromatográfica universal. No
obstante, lo anterior, más adelante se mencionará la utilidad de la cromatografía de gases en
el análisis de compuestos apolares como sustancias de tipo lipídico y en sustancias
presentes en aceites esenciales.
De acuerdo con lo anterior, las cuatro sustancias (mentol, ácido gálico, higrina y arbutina),
se pueden analizar por HPLC, pero por cromatografía de gases solamente el mentol, el
ácido gálico y la higrina.
COOH COOH
PEP PIR
PO O
PO
H
E4P HO
HO O SCoA OH
OH
O OP
OH
AcetilCoA
MEP
COOH
O SCoA OH
HOOC
HO OH OP Terpenoides C10n
HO O
OH
MVA
Acido shikímico MalonilCoA
Comp. aromáticos
Comp. aromáticos
orto-dioxigenados Comp. (C6C3)n
meta-dioxigenados
Alcaloides aromáticos
Comp. aromáticos
meta- y orto-dioxigenados (p. ej. flavonoides)
Terpenoides C15n
Figura 1. Cuadro general parcial del metabolismo secundario. PEP corresponde a fosfoenolpiruvato,
E4P es eritrosa-4-fosfato, PIR es ácido pirúvico, AcetilCoA corresponde a acetilcoenzima-A, MEP
corresponde a metileritritol-fosfato, MVA es ácido mevalónico, MalonilCoA es malonilcoenzima-
A.
Los compuestos que contienen anillos aromáticos tanto orto- como meta-dioxigenados, se
originan por una ruta biogenética mixta derivada del ácido shikímico y de la
acetilcoenzima- A via malonilcoenzima-A. Un ejemplo de esto son los flavonoides.
Para el caso de muchos compuestos sin anillos aromáticos (compuestos no aromáticos), se
dan dos rutas probables a partir de ácido pirúvico. Una de estas es la ruta via
acetilcoenzima- A y ácido mevalónico, la cual explica el origen biogenético de muchos
terpenoides C15n. La otra ruta es la del metileritritol que explica el origen de muchos
terpenoides C10n.
De acuerdo con lo anterior, el mentol es derivado biogenéticamente de la ruta del
metileritritol. El ácido gálico a su vez es derivado biogenéticamente del ácido shikímico.
Para el caso de los alcaloides, algunos de ellos derivan del ácido shikímico y aminoácidos
aromáticos, otros sin anillos aromáticos derivan de aminoácidos no-aromáticos. Por lo cual,
la higrina debe originarse a partir de un aminoácido no aromático.
En el caso de la arbutina, aunque posee un anillo aromático, al no tener sino un sustituyente
oxigenado no es posible inferir su origen biogenético a partir de su estructura química.
Para responder esta pregunta, se debe tener en cuenta que muchos compuestos líquidos de
bajo peso molecular y que solo contienen carbono, hidrógeno y oxígeno en su estructura,
generalmente son de aroma agradable. Son ejemplos los monoterpenos, los sesquiterpenos,
los ésteres de bajo peso molecular, y otros componentes de los aceites esenciales.
Las sustancias nitrogenadas tienden a un aroma amoniacal relativamente desagradable, por
ejemplo, ciertos alcaloides. Las sustancias azufradas también presentan un aroma azufrado
relativamente desagradable que se puede ejemplificar con el ajo y la cebolla. Finalmente, el
aroma característico se constituye en un comodín, cuando no es posible predecir algún
aroma probable.
De acuerdo con esto, se puede predecir que el mentol si es un líquido es de aroma
agradable, la higrina si es un líquido es de aroma amoniacal. El ácido gálico y la arbutina
son sólidos.
Preguntas 12 y 13. Es posiblemente antioxidante? ¿Es posiblemente citotóxica?
Para responder a estas preguntas se tiene como referencia que muchos compuestos
naturales fenólicos presentan actividad antioxidante, así mismo muchos compuestos
alifáticos que contienen un número apreciable de enlaces dobles C=C conjugados, como los
carotenoides, tienen la capacidad de captar especies reactivas de oxígeno. Por otro lado,
muchas sustancias naturales que contienen en su estructura un anillo lactónico, presentan
alguna actividad citotóxica, son ejemplo de estas las terpénlactonas. Aquí es importante
tener en cuenta que es generalmente aceptado que para que una sustancia sea
biológicamente activa, debe serlo a muy bajas concentraciones.
De acuerdo con lo anterior, para el mentol no se espera que a muy bajas concentraciones
sea ni antioxidante ni citotóxico. El ácido gálico debe ser antioxidante pero no citotóxico.
La higrina no sea ni antioxidante ni citotóxica. Finalmente, la arbutina puede ser
antioxidante debido a su grupo hidroxilo fenólico.
Sistema I Sistema II
En los anillos aromáticos los protones muestran señales entre 6 y 8 δ, y pueden presentar
acoplamientos con los protones vecinos en posición orto, en meta y en para. La constante
de acoplamiento orto es aprox. 8-9 Hz, la constante de acoplamiento meta es aprox. 2-3 Hz,
y la constante de acoplamiento para aprox. 0.5 Hz.
De acuerdo con esto, en el sistema I, el protón 2 acopla en orto con el protón 3, en meta con
el protón 6 y en para con el protón 5. Teóricamente su señal debe ser un doble-doble-
doblete (ddd), con constantes de acoplamiento orto, meta y para. Sin embargo, a nivel
práctico el acoplamiento para, por ser tan pequeña la constante, muchas veces no se
observa, y la señal se reduce a un doble-doblete (dd) con constantes de acoplamiento orto y
meta. En algunos casos se verá que muchos autores tampoco reportan el dd para el protón
2, sino solamente un doblete (d ancho) con constante de acoplamiento orto. Esto debido a
que en la práctica muchos experimentos de RMN no permiten observar el acoplamiento
meta.
En el caso de los protones 3, 5 y 6; si se realiza el mismo análisis anterior, y asumiendo que
X y Y son sustituyentes diferentes, a nivel práctico se observarán dobletes-orto(do) anchos
para todos estos protones, aunque teóricamente deben ser ddd.
Para el caso del sistema II, el protón 2 teóricamente es un doble-doblete meta-para, pero
nuevamente en la práctica no se observa en muchos casos el acoplamiento para, por lo cual
se debe observar solo como un doblete-meta (dm). A su vez, el protón 5, acopla con el
protón 6, para generar un doblete-orto y otro doblete-para por su acoplamiento con el
protón 2. En
resumen, se espera un dd-orto-para, pero experimentalmente se observa generalmente un
doblete-orto (do). Finalmente el protón 6, se acopla en orto con el protón 5, y en meta con
el protón 2, lo que genera un dd-orto,meta (ddo,m). A manera de ejemplo, la figura 2
muestra la región de protones aromáticos del espectro RMN-1H predicho para el compuesto
orgánico 2,4-dihidroximetoxibenceno, que muestra el patrón de protones aromáticos del
sistema II, con una señal doblete-meta en δ 6.53 correspondiente al protón 6. La señal del
protón 5 se observa como un doble-doblete orto-meta, en δ 6.58. Finalmente, la señal del
protón 2 se observa como un doblete-orto, centrada en δ 6.73.
do
do W
3 Y
2 dm Y
2
X 5 do 5
6 X do
do 6
ddo,m
Sistema I Sistema II
Figura 2. Región de protones aromáticos del espectro RMN-1H, predicho para el 2,4-
dihixidroximetoxibenceno con el software en-línea disponible en nmrdb.org
Con estos elementos, se les plantea a los estudiantes, hacer la predicción de las señales
teóricas y experimentales para metabolitos con anillos aromáticos como la quercetina, la
podofilotoxina, la arbutina y el ácido gálico; y comparar dichas predicciones con un
simulador RMN.
Capítulo 1
Técnicas generales de aislamiento,
separación, caracterización y
cuantificación de metabolitos secundarios
Introducción
Los procesos experimentales necesarios para la identificación, la cuantificación, el
aislamiento, y la caracterización de los metabolitos secundarios presentes en diversos
organismos vivos se han desarrollado y mejorado de una manera vertiginosa en los últimos
años. A finales del siglo XX, muchos de estos procesos requerían que se partiera de grandes
cantidades de muestras biológicas (del orden de varios kilogramos), con procesos largos de
fraccionamiento, purificación y caracterización. Estos procesos duraban inclusive años y se
requería de varias personas trabajando de manera colaborativa en diferentes universidades o
institutos de investigación. En cambio, actualmente, y gracias al avance de las técnicas de
análisis instrumentales, es posible realizar todos estos procesos con muestras más pequeñas
(del orden de los gramos), con separaciones más rápidas y eficientes, y hacer la
identificación y caracterización química mediante técnicas como la cromatografía líquida y
la resonancia magnética nuclear en dos dimensiones, y en tiempos comparativamente más
cortos que antes.
En algunos casos, y particularmente para los procesos de control de calidad de drogas, es
posible que se requiera de días u horas, es decir que se logran realizar análisis más rápidos,
y con el desarrollo de las técnicas acopladas de separación cromatográfica y análisis
espectral, como por ejemplo la cromatografía líquida de alta eficiencia (sigla inglesa
HPLC), acoplada a espectrometría de masas tándem, es posible realizar estudios de
metabolómica y estandarizar procesos de análisis de control de calidad de muestras
complejas como son las drogas naturales aceptadas en diferentes farmacopeas.
En este capítulo, se presentan en secuencia los procesos de extracción, separación,
identificación, caracterización y cuantificación. Para la caracterización química se utilizan a
manera de ejemplo las estructuras químicas de moléculas relativamente poco complejas
estructuralmente, esto con el fin de hacerlo de una forma didáctica y comprensible para el
lector. Se hace énfasis especial en el uso de la Resonancia Magnética Nuclear para la
caracterización de las sustancias, pues es la técnica analítica que da la información
estructural más fina de dichas sustancias.
Para una mejor comprensión, es importante considerar que los metabolitos secundarios, se
encuentran en los materiales biológicos, básicamente en dos formas: Una forma en la cual
una molécula no se encuentra ligada a carbohidratos, la cual se denomina aglicona o forma
libre; y la otra forma es en la que se encuentra una molécula ligada a una o varias unidades
de carbohidratos, denominada glicósido. Estas formas de aglicona y de glicósidos confieren
cada una a las sustancias naturales propiedades muy importantes en su estudio sistemático.
A manera de ejemplo mientras la gran mayoría de las formas libres (agliconas) son estables
al calentamiento moderado, a la hidrólisis ácida y son solubles en solventes o mezclas de
solventes de baja o media polaridad; las formas de glicósidos por el contrario, en su
mayoría
son inestables al calentamiento, a la hidrólisis ácida y son insolubles en solventes de poca
polaridad, pero en cambio solubles en solventes o mezclas de solventes de mayor polaridad.
La Figura 1.1. muestra ejemplos simples del mentol (una aglicona monoterpenoide), el
ácido gálico (una aglicona fenólica), la higrina (un alcaloide no aromático) y de la arbutina
(un glicósido aromático).
COOH
OH
HO OH
OH
Mentol Acido gálico
O Glu
O
N HO
Higrina Arbutina
Figura 1.1. Estructuras de algunas sustancias naturales. La abreviatura Glu corresponde a la glucosa.
Aquí es importante resaltar que, dependiendo de lo que se pretenda analizar en una matriz o
muestra biológica, bien sea agliconas o glicósidos, cada caso determina la metodología y
las técnicas de análisis a utilizar. Por ejemplo, en condiciones normales, los glicósidos en
general son sólidos polares, solubles en etanol y agua, son térmicamente inestables (se
descomponen al tratar de fundirlos), todos son ópticamente activos (debido a la presencia
de carbohidratos). Los glicósidos se pueden analizar por cromatografía líquida, por
espectrometría de masas de ionización suave, en cambio las agliconas se pueden analizar
directamente por cromatografía de gases; y por otras técnicas que no sirven para los
glicósidos por su inestabilidad térmica, como la espectrometría de masas de ionización
fuerte (impacto electrónico). Es importante precisar, sin embargo, que los
compuestos
térmicamente inestables pueden ser derivatizados químicamente, para obtener compuestos
que son térmicamente estables y se pueden analizar por las técnicas como cromatografía de
gases y la espectrometría de masas de impacto electrónico. En la práctica la derivatización
es una técnica muy útil con glicósidos de bajo peso molecular, pero no con los de alto peso
molecular como por ejemplo las saponinas terpenoides.
A continuación, se describen de manera general, las técnicas experimentales más utilizadas
para los procesos de extracción, separación, identificación, caracterización y cuantificación
de metabolitos secundarios.
La tabla 1.1, muestra algunas de los solventes DES más utilizados, junto con algunas de sus
características físico-químicas más importantes como son la temperatura de congelación, la
densidad y la viscosidad. Además, se les vienen determinando otras propiedades como el
índice de refracción, la tensión superficial, la capacidad calorífica, la conductividad
eléctrica, etc. La sal rotulada como ChCl corresponde al cloruro de colina y es el aceptor de
enlaces de hidrógeno más utilizado. Algunos autores asignan nombres a las mezclas DES
como por ejemplo la mezcla de ChCl con urea la denominan relina, la mezcla ChCl con
etilenglicol la denominan etalina, la mezcla de ChCl y ácido málico la denominan malicina,
y la mezcla ChCl con glicerina, la denominan glicelina.
La viscosidad de los solventes DES se puede disminuir agregándoles agua y aumentando la
temperatura. En cuanto a la cantidad de agua, se reportan valores hasta del 30-50%
máximo,
debido a que el exceso de agua disminuye la estabilidad del líquido DES por el
rompimiento de los enlaces de hidrógeno intermoleculares.
Como se anotó anteriormente, los solventes DES se producen fácilmente en el laboratorio
mediante la combinación adecuada de una sal de amonio cuaternaria como el cloruro de
colina, reconocida con la sigla inglesa ChCl; y otro componente, que puede ser un ácido
orgánico como el malónico, un carbohidrato, un ácido graso como el ácido decanoico, un
terpeno como el mentol, etc.
Tabla 1.1. Lista de algunos solventes DES y de algunas de sus propiedades físico-químicas.
Extracción Sohxlet
La extracción Sohxlet utiliza un sistema de evaporación y condensación continua sobre una
muestra generalmente seca y molida previamente. Se utilizan solventes orgánicos de
mediana o baja polaridad como hexano, diclorometano, entre otros. Es muy utilizada para
la extracción de sustancias de mediana y baja polaridad, particularmente lípidos tales como
triglicéridos, terpenoides, etc. Presenta como ventaja que al ser un proceso continuo se
pueden realizar extracciones exhaustivas de las sustancias de interés, a las temperaturas de
ebullición de los solventes usados.
La extracción Sohxlet permite el trabajo con muestras de 10 a 30 g, no requiere de
filtración después de la extracción, y no requiere generalmente que esté presente el analista
todo el tiempo durante el proceso de extracción. Las desventajas incluyen los tiempos
largos de extracción (dependiendo del tamaño de la muestra hasta 24-48 horas), los
volúmenes grandes de solventes orgánicos necesarios, y la necesidad de concentrar
(evaporar) grandes volúmenes de solventes.
La figura 2.2 muestra un esquema simplificado de un sistema de extracción Sohxlet.
HO
Estigmasterol Mentol
HO
Amirina
OH
OH
HO O
OH
OH O
Quercetina
HO
Ergosterol
Figura 1.2. Estructuras químicas de algunos metabolitos secundarios con y sin grupos cromóforos.
O
Figura 1.3. Estructura y enumeración de la molécula de 2-metilantraquinona.
Continuando con la predicción para los otros protones aromáticos, el H-3 debe originar una
señal doble doblete, con constantes de acoplamiento orto y meta; debido a que el H-3
acopla con el H-4 en orto, y con el H-1 en meta. Es decir, en resumen es un doble doblete-
orto,meta (ddo,m).
El protón H-4 debe originar un doblete orto, debido a su acoplamiento con el protón H-3.
Es decir, debe ser un doblete-orto (do).
El protón H-5 debe ser un dd o,m, igual que su similar H-8. Los protones H-6 y H-7, deben
ser dobles tripletes orto-meta, debido a que por ejemplo el H-6 acopla en orto con los
protones H-5 y H-7, lo que genera un triplete-orto. Un análisis similar permite predecir que
el H-7 es muy similar al H-6, y ambos deben generar señales dto,m. En resumen, podemos
predecir para la 2-metilantraquinona, los datos calculados presentado en la tabla 1.
De acuerdo con la tabla 4, las diferencias entre los valores de desplazamiento calculados y
los reportados, oscilan entre 0 y 0.5 ppm aproximadamente, demostrando así la utilidad de
los programas de computador disponibles, para complementar el análisis estructural de las
sustancias, como la 2-metilantraquinona.
Al realizar la misma secuencia, para el caso del espectro RMN-13C, de la misma 2-
metilantraquinona, se obtienen los resultados mostrados en la Tabla 5.
Tabla 5. Valores de desplazamiento predichos para la 2-metilantraquinona junto a los valores
calculados con el software en línea www.nmrdb.org, el módulo predictor NMR de AcdLabs® y los
reportados en la base de datos de la SDBS.
Figura 1.8. Espectro COSY esperado para la molécula de 1-propanol. Se observa la diagonal de
color verde, y señales de correlación en colores azul (protones vecinos H-2 y H-3) y violeta
(protones vecinos H-1 y H-2) para facilitar su interpretación relativa a la vecindad de protones.
La figura 1.9 muestra el espectro COSY calculado con el software disponible en-linea en el
sitio www.nmrdb.org. Se observan señales de correlación entre el triplete de los protones
del C-1 (0.9 ppm), y el multiplete de los protones del C-2 (1.7 ppm); y además muestra
señales de correlación entre el multiplete de los protones del C-2 (1.7 ppm), y el triplete de
los protones del C-3 (3.3 ppm). La figura 1.10 muestra con flechas dobles los protones
vecinales.
Figura 1.9. espectro COSY H-H de 1-propanol calculado con el software en línea nmrdb.org. Las
líneas azules fueron añadidas para visualizar la vecindad o correlación entre los protones.
H H
H 1 3 OH
2
H
H H H
Figura 1.10. Esquema de las correlaciones entre protones vecinos del 1-propanol.
Espectrometría de masas
Las técnicas espectrométricas como la RMN, sin duda constituyen unas de las herramientas
más valiosas en la identificación y caracterización química de los metabolitos secundarios;
pero son muy bien complementadas con técnicas como las de espectrometría de masas, las
cuales además de informar sobre pesos moleculares, informan en muchos casos aspectos
estructurales muy importantes. Un ejemplo de esto último es el uso de los espectros de
masas de alta resolución y los espectros de masas tándem ms/ms, que combinados con
bases de datos como Reaxys®, Chemspider® y otras, permiten la asignación estructural de
productos naturales.
Para el caso de los metabolitos no glicósidos, comúnmente denominados agliconas o
formas libres, la espectrometría de masas clásica, como se llama a la espectrometría de
masas basada en el efecto del impacto de electrones sobre la sustancia de interés, es una
herramienta muy valiosa, pues se conocen los mecanismos de fragmentación de muchas
sustancias, y se cuenta con bases de datos digitales con los espectros de muchas sustancias
naturales.
Pero en el caso de los metabolitos glicosilados, estos compuestos no son estables desde el
punto de vista térmico, y por tanto no pueden analizarse con la espectrometría de masas
clásica. Esto debido a que esta técnica requiere que la sustancia o las sustancias a analizar,
se puedan vaporizar sin descomponerse. Para estos compuestos entonces se requiere de
técnicas de ionización más suaves, las cuales generan espectros de masas relativamente más
simples, pero con información del peso molecular a través de los iones pseudomoleculares
(también denominados iones cuasimoleculares) que se forman por la unión del ion
molecular con iones como el Na+ el K+, el H+; los cuales se utilizan (en forma de sales) en
los procesos de ionización para generar los espectros de masas.
El desarrollo de dispositivos que acoplan la separación cromatográfica por HPLC ó ultra-
HPLC (uHPLC), con detectores de masas, ha permitido un desarrollo notable en los
procesos de análisis y control de calidad de metabolitos, inclusive actualmente se están
ofreciendo a nivel comercial detectores de masas de bajo costo, lo que beneficia a los
laboratorios que trabajan con productos naturales. Aquí es importante destacar el amplio uso
de las técnicas que combinan la separación con la identificación de los componentes de una
mezcla, conocidas en inglés como Hyphenation Techniques, y muy especialmente la
combinación de la cromatografía líquida con la espectrometría de masas (sigla inglesa LC-
MS). Estas técnicas se han desarrollado notablemente en los últimos años, y son útiles para
la separación e identificación de los metabolitos secundarios de diferentes polaridades. Las
interfases entre la columna cromatográfica y los detectores o analizadores de masas usan
fundamentalmente dos procesos de ionización conocidos con las siglas inglesas ESI
(ElectroSpray Ionization) que corresponde a Ionización por Electro-Aspersión; y a APCI
(Atmospheric Pression Chemical Ionization), que corresponde en español a Ionización
Química a Presión Atmosférica. En los sistemas que usan ESI, la interfase incluye un
sistema de electrodos que genera un campo eléctrico muy fuerte que vaporiza la fase móvil.
En sistemas con APCI en lugar de electricidad, se utiliza calor para vaporizar la fase móvil.
Las interfases ESI permiten la obtención y análisis de espectros de masas en modos
positivo y negativo. El modo positivo es recomendado para metabolitos de carácter
alcalino, y por el contrario para los metabolitos de carácter acido se recomienda el modo
negativo.
En general las interfases APCI son más efectivas para el análisis de moléculas de rangos de
masa cercanos a 2000 Da, y especialmente para aquellas de menor polaridad, mientras que
ESI presenta ventajas como el análisis de moléculas de más alto peso molecular.
En cuanto a los analizadores de masas, se cuenta con analizadores de cuadrupolo, de trampa
de iones, y de tiempo de vuelo.
Los analizadores de cuadrupolo, permiten obtener y seleccionar iones (sigla inglesa SIM,
Selective Ion Monitoring), lo cual los hace ventajosos para procesos de identificación y
cuantificación. Los de triple cuadrupolo (sigla inglesa QqQ), son los más recientemente
desarrollados.
Los analizadores de trampa de iones permiten atrapar ciertos iones y someterlos a una
fragmentación posterior, permitiendo obtener un nuevo espectro de masas, lo que lleva a la
técnica denominada espectrometría de masas tándem, conocida por la sigla inglesa MS/MS.
Los espectros así obtenidos proporcionan mayor información de los procesos de
fragmentación, lo que es muy útil para la dilucidación estructural de los metabolitos
secundarios, además que presentan la ventaja de utilizar los mecanismos de formación de
iones de la espectrometría de masas clásica, que usa impacto de electrones.
El analizador de masas de tiempo de vuelo (sigla inglesa ToF), prácticamente no tiene
limitaciones en cuanto al rango de masas de las sustancias a analizar, y es muy útil para
sustancias de alto peso molecular como las proteínas.
Aquí es importante mencionar que se vienen desarrollando técnicas alternativas, que
permitirían el uso de las bases de datos de espectros de masas de impacto electrónico
disponibles, como es el caso de la técnica cromatografía líquida-espectrometría de masas
con haces moleculares supersónicos (sigla inglesa: EI-LC-MS with SMB), y la técnica de
cromatografía de gases-espectrometría de masas de impacto electrónico en frío (sigla
inglesa: GC-MS with Cold EI). También es importante mencionar el uso cada vez más
extendido de las redes de datos moleculares como por ejemplo la red social global de
productos Naturales (Global Natural Products Social Molecular Network, GNPS), que
combinada con otras herramientas disponibles en línea como LipidsXplorer, permite la
desreplicación, identificación y caracterización estructural de diferentes productos naturales
como lípidos y alcaloides esteroidales.
La combinación de las técnicas de RMN y espectrometría de masas, junto con el uso de las
bases de datos, facilita mucho el análisis de los metabolitos ya conocidos, así como ayuda
en el hallazgo de otros nuevos. En la literatura científica se encuentran reportes de usos de
esta
técnica combinada para el análisis de diferentes metabolitos como iridoides, lignanos,
flavonoides, alcaloides, otros terpenoides. Además, esta técnica permite a través de los
espectros RMN 1D y 2D, determinar aspectos importantes como la estereoquímica.
OH
O
Mo+n
+ Acido fosfomolíbdicotungstico
(H3PO4, Mo, W) -
OH W+m
R
N N
+
H ac. N M+n N
+n
+ M
R N
R
(sal de metal
n
Alcaloide pesado)
R
Comp. coordinación insoluble
Figura 1.13. Reacción química que explica la formación de complejos insolubles entre un alcaloide
y una sal de metal pesado.
Ensayos de reconocimiento para compuestos fenólicos
Debido a la gran cantidad y variedad estructural de las diferentes clases de compuestos
fenólicos naturales, se utilizan diferentes ensayos de coloración para su reconocimiento
preliminar en muestras biológicas. El ensayo más utilizado es el del cloruro férrico. En este
ensayo una solución acuosa o alcohólica de una muestra vegetal, se hace reaccionar con una
solución de cloruro férrico acuoso o alcohólico, en concentración del 1%. Los compuestos
fenólicos tienden a formar complejos de diferentes colores con el catión Fe +3, la formación
de color o precipitados oscuros es aceptada como un resultado positivo sobre la presencia
de compuestos fenólicos. No obstante, hay compuestos fenólicos de baja polaridad que no
dan resultado positivo con este ensayo, por lo que se requiere otro tipo de análisis diferente.
OH
Fe+3 O
Fe
O O
Comp. fenólico
Complejo fenol-Fe (coloreado)
Figura 1.14. Reacción de formación de complejos coloreados de un compuesto fenólico con una sal
de hierro III.
Sistema benzopirona
Adicionalmente, los compuestos fenólicos se pueden observar fácilmente en los análisis por
cromatografía en capa fina, pues bajo la luz ultravioleta de 254 nm, presentan absorción de
dicha radiación, lo que permite visualizarlos fácilmente y detectarlos en las muestras
biológicas.
Referencias bibliográficas
OH
Transaminación
Transaminación
COOH
COOH
NH2
NH2
OH
Fenilalanina Tirosina
Figura 2.5b. Esquema biogenético que explica el origen de los aminoácidos aromáticos fenilalanina
y tirosina a partir del ácido prefénico.
E1 ácido corísmico es el precursor inmediato no solo de1 ácido prefénico sino también del
ácido antranílico y se aisló inicialmente de una cadena mutante de Aerobacter aerogenes.
El ácido prefénico, el ácido fenilpirúvico y el p-hidroxifenilpirúvico son los precursores de
fenilalanina y tirosina. La fenilalanina es un constituyente universal de proteínas y es
precursor de una extensa clase de alcaloides y además es punto de partida para la secuencia
biosintética que lleva a los llamados compuestos C6C3.
La ruta principal para la producción de los ácidos cinámico y p-cumárico a partir de
fenilalanina o tirosina respectivamente, se explica mediante la remoción de amoníaco de la
fenilalanina o tirosina. La figura 2.6 esquematiza el proceso. La fenilalanina-amonia-liasa
PAL, elimina amoníaco y general doble enlace C=C para dar origen al ácido cinámico;
mientras la tirosina-amonia-liasa TAL, elimina amoníaco y genera el enlace C=C que da
origen al ácido p- cumárico.
COOH COOH
-NH3
NH2 PAL
R R
ó TAL
R = H, ácido cinámico
R = OH, ácido p-cumárico
Figura 2.6. Esquema biogenético que explica la desaminación de los aminoácidos para dar origen a
los denominados ácidos cinámicos. PAL corresponde a la sigla inglesa de Phenylalanine Ammonia
Lyase, y TAL a Tyrosine Ammonia Lyase.
COOH
COOH
HO OH
OH
OH
-CO2
oxid.
OGlu OH
Glucosilación
OH OH
Arbutina
Figura 2.7. Biogénesis de arbutina.
Biogénesis de compuestos C6C1
A partir de los ácidos cinámicos las plantas pueden generar compuestos aromáticos C 6C1,
formando inicialmente el éster de la coenzima A y e1 ácido cinámico (o p-cumárico), el
cual puede sufrir degradación de la cadena lateral de 3 átomos de carbono mediante un
proceso enzimático similar a la -oxidación de los ácidos grasos. El esquema de este
proceso es e1 descrito en la Figura 2.8.
COOH
COOH
HO OH R
OH H2O
Acido shikímico OH
COOH
H
R
- 2H
O
COOH
H
R O
OH
Compuestos C6C1
Figura 2.8. Esquema para la biogénesis de compuestos C6C1
El derivado ácido benzoico así originado puede ser descarboxilado para generar
compuestos C6, o sufrir una o varias etapas de hidrogenación para generar derivados tipo
benzaldehído, alcohol bencílico y compuestos tipo tolueno (Figura 2.9.).
COOH COOH
OH
HO OH - 2H
CHO
R
CH3 CH2OH
- 2H R
- 2H
R R
Figura 2.9. Esquema biogenético que explica el origen de compuestos C6C1 con diferente grado de
oxidación (R puede ser H u OH, dependiendo del aminoácido precursor).
OH HO OH
OH OH
Acido salicílico Acido protocatécuico Acido gálico
Figura 2.10. Estructuras de varios compuestos naturales C6 y C6C1
HO
A lco ho l OMe
h idrocinam ílico A lcoh ol C in am aldehíd o
con iferílico
HO O
HO MeO
OMe
OMe
O
O
G lu O
OMe
MeO
MeO MeO
O OMe
O O
O
O O
Figura 2.11. Ejemplos estructurales de sustancias naturales C6C3 derivadas biogenéticamente del
ácido shikímico vía fenilalanina y tirosina.
OMe O
OH O
O
MeO O
HO
A cido guaiarético O
H inokinina
O
MeO
O
MeO
O
HO O
HO
OM
O e
OH OMe
P inoresinol OH
C onidendrina
OH O
HO 2'
OH
Figura 2.13. Esquema de la formación de un lignano por acoplamiento oxidativo de dos unidades C6C3
CHO
OH OH
MeO O
OH
O
OH
O
HO
O
OMe
HO
MeO
O
etc.
HO O O MeO O O MeO O O
MeO
MeO MeO
O
G lu O H O
O O HO O O
O OMe
E scopolina F raxetina
Isofraxidina
Me O
MeO
O O O
O O
OMe
HO O O
OH
E scopoletina- preniléter
P uberulina D afnetina
- H2O
R O O O
R
O HH O
Figura 2.17. Núcleo básico de las antraquinonas con enumeración utilizada para propósitos de
nomenclatura.
Las antraquinonas son una clase de metabolitos secundarios con una funcionalidad p-
quinoide en un núcleo antracénico. La figura 2.18. muestra las estructuras de varias
antraquinonas naturales como fisción, emodina, rheína, y otros compuestos químicamente
relacionados.
R1 R2 Compuesto
OH O OH CH3 OH Rheum-Emodina
CH3 OCH3 Fisción
CH3 H Crisofanol
CH2OH H Aloé-emodina
R2 R1
COOH H Rheína
O
OR O OH R R1 Compuesto
Glucosil Ramnosil Glucofrangulina-A
Glucosil Apiosil Glucofrangulina-B
H Ramnosil Frangulina-A
R1O CH3
H Apiosil Frangulina-B
O
OH O OH OH O OH
10 10
CH2OR CH2OR
H H H
O HO
HO
CH2OH O
CH2OH R Compuesto
HO H Aloínas A y B
HO
HO HO Ramnosil Aloinósidos A y B
Aloína-A
Aloína-B
Aloinósido-A
Aloinósido-B
Figura 2.18. Estructuras de varios compuestos antracénicos naturales.
Nomenclatura
A estos productos naturales se les denomina comúnmente con nombres vulgares con la
terminación "ina" en el caso de las agliconas, u "ósido" en el caso de los glicósidos.
Para una nomenclatura sistemática sencilla de estas sustancias se debe asignar la
terminación antraquinona, precedida de los correspondientes sustituyentes, y siguiendo la
enumeración dada en la figura 2.16. A manera de ejemplo, el nombre sistemático para la
endocrocina (Figura 2.19) será: 4,5,7-trihidroxi-3-carboxi-2-metilantraquinona.
O
HO
COOH
OH O OH
Clasificación
Los compuestos antracénicos vegetales pueden clasificarse según su estado de oxidación en
siete grupos estructurales:
a. Antraquinonas
b. Antronas
c. Diantronas
d. Antranoles
e. Oxantronas
f. Naftodiantronas
g. Antrahidroquinonas
La Figura 2.20 muestra las estructuras básicas de estas siete clases de compuestos
antracénicos. Puede observarse en el caso de las diantronas (dímeros de las antronas), que
el enlace que une las dos unidades básicas, es decir el enlace entre los carbonos 10 y 10',
genera la posibilidad de isómeros CIS y TRANS a través del mismo. Además, si las dos
unidades básicas son idénticas, se dice que son HOMODIANTRONAS (por ejemplo, las
senidinas A y B), mientras que, si son diferentes, se las llama HETERODIANTRONAS
(por ejemplo las senidinas C y D).
Biogénesis
Las antraquinonas y demás compuestos antracénicos citados, son biosintetizados por la ruta
de la malonilCoenzima A en el caso de los hongos, líquenes y plantas superiores de las
familias ramnáceas, poligonáceas y leguminosas; mientras que, en las rubiáceas, las
gesneriáceas, las escrofulariáceas, las verbenáceas y las bignoniáceas, se biosintetizan a
partir de ácido shikímico y ácido mevalónico.
ANTRONAS ANTRANOLES
O O
O OH
ANTRAQUINONAS OXANTRONAS
OH
OH
ANTRAHIDROQUINONAS
O O
O O
DIANTRONAS NAFTODIANTRONA
Figura 2.20. Núcleos básicos de compuestos antracénicos.
O
AcetilCoA + 7 MalonilCoA
O OO SCoA
O O O O
-3H2O
HO EnolizaO
SCoA SCoA
OHO OHO O O O O
1. [O]
2. H+
Dimeriza
O
O HO
COOH
OHO OH
HO -2H2O O O -CO2
OH OH OHO
OH OH
HO
COOH O
COOH
-CO2 -H2O
OHO OHO OH
OPP
OH OH OH
OHO OH O OHO
Hechos estructurales
Las antraquinonas naturales generalmente presentan las siguientes características
estructurales:
a. Tienen grupos OH en C-4 y C-5.
b. Generalmente contienen un grupo metilo, hidroximetileno o carboxilo sobre el carbono 2.
c. Las antraquinonas originadas por la vía de la malonilcoenzima-A generalmente contienen
un grupo OH u OMe en los carbonos C-5 y C-7. Las originadas por la vía del ácido
shikímico tienen sustituyente oxigenado en C-5.
d. Los carbohidratos ligados son principalmente glucosa, ramnosa y rutinosa.
e. Los O-glicósidos tienen los carbohidratos ligados a través de C-5 o C-7.
Espectroscopia Ultravioleta
Las antraquinonas en general presentan en solución etanólica hasta cuatro bandas de
absorción entre 220 y 290 nm (=9000-3000), otra entre 300 y 350 nm (=3000-6000), y
otra entre 400 y 500 nm (=2000-9000). La Tabla 1 muestra los máximos de absorción en
el Ultravioleta de varias antraquinonas conocidas.
La presencia de grupos hidroxilos en posiciones 1, 4, 5 y 8 del núcleo antraquinónico
(también denominados grupos hidroxilos peri), puede detectarse en el espectro UV, ya que
al añadir cloruro de aluminio en solución etanólica a la solución alcohólica de la
antraquinona, se observa un notable desplazamiento bato crómico del espectro, el cual se
mantiene aún después de añadir un ácido mineral. El desplazamiento bato crómico es
debido a la formación de un quelato estable tal como se ilustra en la Figura 2.23.
Espectroscopia Infrarrojo
El espectro infrarrojo de las antraquinonas muestra bandas de absorción en 1695-1650 y
1640-1595 cm-1, debidas al grupo dicarbonilo ,ß-insaturado. En el caso de los grupos
carbonilos vecinos a hidroxilos peri (en 1, 4, 5 u 8), estos absorben alrededor de 1630 cm -1,
mientras los grupos carbonilos no vecinos a hidroxilos peri absorben alrededor de 1660
cm-1.
O O
HO O
Cl Al
A lC l3 O
HO
O O O
Al
Cl Cl
HCl
O
HO
HO
O O
Al
Cl Cl
Figura 2.23. Formación de quelatos con cloruro de aluminio, de grupos hidroxilo peri y orto-
dihidroxilos de antraquinonas. Nótese como el quelato con los hidroxilos orto es inestable al
agregar el ácido.
Espectrometría de Resonancia Magnética Nuclear
En el espectro de resonancia magnética protónica de las antraquinonas libres, se observan
las señales características de protones aromáticos (6-8 ppm), alifáticos (MeO-Ar 3.8-4.1
ppm; Me-Ar 2.2-2.5 ppm, etc.) y de grupos Ar-CH2-OH, Ar-COOH y Ar-CHO. Además, y
en una forma similar a lo que ocurre en el espectro UV con cloruro de aluminio, los
protones de los grupos hidroxilos en posiciones 1, 4, 5 y 8 (grupos hidroxilo peri), algunas
veces se observan como singletes en la región de 12 a 14 ppm, debido al efecto
desprotector de los carbonilos.
Aquí es importante mencionar que para los protones hidroxílicos no siempre se observan
sus señales en el espectro RMN. El desplazamiento químico de estos protones hidroxílicos
permite reconocer la distribución en la molécula de otros sustituyentes tales como
metoxilos y metilos, de acuerdo con sus efectos los cuales pueden predecirse con las reglas
empíricas de Schripsema y Dagnino. Por ejemplo, para la antraquinona:
O OH
1
OMe
2
5 4
3
OH
OH O
Para calcular el del hidroxilo-1:
Valor base: 13.14 (Tabla 2 del artículo de Schripsema-Dagnino, 1996; para antraquinonas
1,3-dihidroxi-2-metoxiladas) + 0.13 (Tabla 1 del mismo artículo, para cuando existe un OH
en 5), entonces el valor calculado para el OH en 1 es 13.27
Y para calcular el del hidroxilo-5, simplemente se gira la molécula a:
O OH
1
HO 7
2
6
M eO 5 4
3
OH O
De esta manera el OH en 5 se convierte en el OH en 1, y aplicando los valores de las tablas
1 y 2 del artículo de Schripsema-Dagnino para antraquinonas 1-hidroxiladas, pero sin
sustituyentes en 2, ni en 3 ni en 4:
Valor base: 12.69
+5-OH: 0.13
+6-OMe: 0.13
+7-OH: -0.09
Y el calculado para el OH-5 es 12.86 ppm.
En el espectro de RMN-13C se aprecian las señales de los carbonilos quinoides alrededor de
180 ppm (C=O no quelatados) y 185 ppm (C=O quelatados).
Los carbonos de metilos ligados a C aromáticos resuenan alrededor de 15-25 ppm, los de
metoxilos se observan alrededor de 55-65 ppm, los carbonos aromáticos protonados
alrededor de 100-135, los carbonos aromáticos hidroxilados y metoxilados alrededor de
140- 165 ppm.
Espectrometría de masas
Los espectros de masas de impacto electrónico de las agliconas antraquinónicas muestran
un ion molecular intenso. Además, se observan las pérdidas de una o dos moléculas de
monóxido de carbono (M-CO, M-2CO) acompañadas de la pérdida de un hidrógeno (M-
COH, M-2CO-H). En el caso de los espectros de masas ESI, por ejemplo, la alizarina (1,2-
dihidroxiantraquinona), muestra fragmentos similares, pero a partir del ión cuasimolecular
m/z 241, es decir se observan m/z 213 (M – CO) y m/z 185 (M – 2CO).
Los espectros de masas FAB además de proporcionar el peso molecular, permiten
reconocer también los carbohidratos ligados. También se utilizan los espectros de masas de
ionización
química (CIMS). Los espectros de masas ESI muestran iones cuasimoleculares como M-
H+, M-H+ y M+Na+.
Actividad biológica
Las antraquinonas se destacan por sus notables actividades biológicas: anticancerígena,
antiinflamatoria, diurética, antiartrítica, antifúngica, antibacteriana y antipalúdica. Estas
sustancias también tienen aplicaciones en química analítica y procesos industriales para la
producción de celulosa. Se pueden usar como colorantes, agroquímicos y prototipos para el
desarrollo de nuevas moléculas con actividades biológicas. Las drogas vegetales que
contienen antraquinonas poseen según la dosis acciones usos terapeúticos aceptados como
colagogos, laxantes o purgantes.
Las 4,5-dihidroxiantraquinonas son los principios activos de drogas laxantes como el sen, el
ruibarbo, la cáscara sagrada y la penca sábila.
Los compuestos antracénicos más activos son los O-glicósidos de diantronas y
antraquinonas, y los C-glicósidos de antronas con el grupo metileno C-10 libre. Para la
acción catártica se requiere que la antraquinona posea dos grupos hidroxilos en C-1 y C-8,
un grupo metilo, hidroximetileno o carboxilo en C-3, y un grupo hidroxilo o metoxilo en C-
6.
Las geninas antracénicas se absorben en el intestino grueso a nivel del colon con efectos
irritantes e indeseables, mientras que los glicósidos por ser más polares se absorben menos.
Una vez que traspasan la pared intestinal estas sustancias excitan las terminaciones
nerviosas locales del Sistema nervioso autónomo, induciendo una acción neuroperistáltica.
Sin embargo, se han hecho estudios más recientes, y se tiene evidencia de actividades
hepatoprotectoras para fisción, aloé-emodina, xanthorina, crisofanol, etc.; anticancerígena
para nordamnacanthal, alizarina-1-metiléter, rubiadina, soranjidiol, morindone, etc.;
antimicrobiana y antimicótica; antivirales como el crisofanol y aloé-emodina; propiedades
antidiabéticas para crisofanol y emodina; y propiedades antioxidantes para emodina,
fisción, rheina y como fotosensibilizantes. También es importante mencionar que se están
obteniendo mediante síntesis química, algunos compuestos híbridos que contienen una
antraquinona y una chalcona, con actividad contra leucemia.
Sen
Comercialmente se conocen el "Sen de Alejandría", el cual corresponde a la especie Cassia
senna (Leguminosae); el "Sen de Tinnevelly o de la India" el cual corresponde a Cassia
angustifolia (Leguminosae); y otras especies como C. acutifolia y C. obovata.
La droga la constituyen las hojas y frutos secos.
El país de origen parece ser Arabia, y los principales productores son Sudán, India,
Pakistán y Egipto.
La droga muchas veces es falsificada o adulterada con otras especies de Cassia.
Los componentes de las hojas son glicósidos antraquinónicos, glicósidos de antronas, 2.5 a
5% de senósidos A, B, C y D. Además, aloé-emodina, reína y 2-naftalénglucósidos, y más
recientemente se han reportado las sustancias volátiles presentes. La farmacopea europea
Vol I. especifica que la droga debe contener no menos de un 2.5% de componentes
antracénicos, calculados como senósido B.
De los frutos existen dos drogas comerciales: El "sen de Alejandría" debe contener no
menos de 3.6% de compuestos antracénicos, según la farmacopea europea el "sen de
Tinnevelly" debe contener no menos de 2.5% de componentes antacénicos calculados
como senósido
B. Los componentes principales son los glicósidos diantrónicos Senósidos A/B, aunque
también están presentes los senósidos C y D; mono- y diglicósidos de reína y emodina.
Estas drogas se utilizan como laxantes y purgantes, en forma de tisanas, polvos, extractos,
sales cálcicas de los senósidos A y B cristalizadas, etc. Sin embargo, se ha reportado que el
uso prolongado de esta droga conlleva a arritmia cardiaca. En el caso de mujeres
embarazadas, existen evidencias experimentales del uso seguro de esta droga para casos de
constipación.
La acción laxante de las 1,8-dihidroxiantraquinonas presentes en el sen depende del número
de moléculas de azúcar ligadas, siendo las agliconas prácticamente inactivas.
Es importante anotar que esta droga (y otras como Rheum, Aloe y Andira) presenta
genotoxicidad y carcinogenicidad potencial por lo cual se usa con restricciones en
Alemania.
Actualmente se cuenta también con técnicas como RAPD (Ramdom Amplified
Polymorphic DNA), para verificar la autenticidad de esta droga.
Frángula (o Arraclán)
Esta droga la constituye la corteza desecada de Rhamnus frangula, Rhamnaceae, una planta
de origen europeo, y cuyos principales productores son la región balcánica y Rusia.
La falsificación más común de esta droga se hace con espino cerval Rhamnus catartica.
La droga contiene 5-10% de O-glicósidos de antraquinonas como los glucofrangulósidos A
y B, los frangulósidos (o frangulinas) A y B, emodin-diantrona, palmidina-C, palmidina-C-
monoramnósido, emodín-diantrona-monoramnósido, y emodín-8-O-ß-gentiobiósido.
Esta droga se usa ampliamente en Europa como laxante en forma de tisanas, formas
galénicas, y para la extracción de las frangulinas y glucofrangulinas. Sin embargo, se
reportan evidencias de genotoxicidad, por lo cual los autores recomiendan su uso laxante
con precaución.
Cáscara sagrada
La droga la constituye la corteza desecada de Rhamnus purshiana, Ramnáceas. Es una
planta originaria de América, y cuyos principales productores son Oeste de Canadá y
Estados Unidos, y Kenia.
Normalmente, esta droga es falsificada con otras especies como R. alnifolia, R. crocea, R.
californica, R. fallax, etc.
La droga contiene 6-9% de derivados antracénicos (tanto O- como C-glicósidos), de los
cuales los principales son los cascarósidos A, B, C y D; barbaloína, crisaloína, emodín-
oxantrona, aloé-emodina, crisofanol, emodina; y las palmidinas A, B y C.
Esta droga es utilizada especialmente en países anglosajones como laxante en forma de
tisanas, formas galénicas, extractos titulados de cascarósidos (elíxires), extracto seco en
comprimidos. También es usada en veterinaria. El estudio del contenido de antraquinonas
en varias especies del género Rhamnus, muestra que además de sus propiedades
antioxidantes, tienen propiedades antimicrobianas; y que especies como R. alaternus y R.
fallax, presentan altos contenidos de crisofanol, fisción y emodina.
Ruibarbo
La droga la constituyen las raíces desecadas de Rheum palmatum, Poligonáceas. Es una
planta originaria de la China y producida principalmente en Asia.
La droga es falsificada con otras especies como R. rhaponticum, R. officinale, R. emodi, R.
webbianum, R. coreanum.
La composición de la droga es bastante compleja e incluye antraquinonas sin grupo
carboxilo (crisofanol, aloé-emodina, emodina y fisción) y sus heterósidos (p. ej.
crisofaneína y glucoaloé-emodina), antraquinonas con un grupo carboxilo (reína y
glucoreína), antronas o diantronas de crisofanol, emodina, aloé-emodina y fisción,
glucósidos de reína (Senósidos A y B) y sus oxalatos (Senósidos E y F), heterodiantronas:
palmidinas A y B, crisofanol-antrona, palmidina-C, reín-antrona (senidina C y senósido C),
crisofanol-antrona (reidina B), fisción- antrona (reidina C) y otras sustancias como oxalato
de calcio, almidón, catequinas, etc.
Esta droga se la utiliza como amargo estomáquico, purgante o laxante ocasional. También
se ha reportado que el extracto acetónico presenta alguna acción contra el bitiligo. Sin
embargo, se reporta que el ruibarbo crudo puede causar diarrea severa y toxicidad renal y
hepática, por lo cual en la medicina tradicional china se están usando diferentes procesos
para reducir estos efectos laterales.
Hay un ensayo cualitativo para reconocer esta droga. En este, se refluja varios minutos una
porción de la droga pulverizada con una solución acuosa de cloruro férrico en ácido
clorhídrico. Enseguida se hace partición con un solvente orgánico. La fase orgánica se pone
en contacto con una solución diluida de amoníaco, y esta toma color rosado a rojo cereza.
En el caso particular de R. officinale, esta droga es utilizada para el tratamiento de fiebres,
infecciones, como antiinflamatorio, y contra el cáncer en China, Japón y Corea.
Penca sábila (Acíbar, Aloe)
La droga la constituye el jugo desecado de las hojas de varias especies de Aloe (Familia
Liliáceas). Los principales productores son Sudáfrica (Aloe capensis, "Aloé del Cabo"),
Kenia, Curazao, Aruba, Bonaire (Aloe barbadensis).
Las falsificaciones son otras especies de Aloe.
Las farmacopeas describen varios tipos de Aloe ("Aloe del Cabo" y "Aloe de Curazao"), y
como drogas comerciales ("Aloes de Uganda, Kenia y de la India").
Comercialmente se encuentran las drogas denominadas "Extracto de Aloe", "Aloe
barbadenses", "Aloe capensis" y "Aloe perryi".
El "Extracto de aloe" contiene aloína (10-C-ß-glucopiranósido de Aloé-emodin-antrona)
principalmente como una mezcla de los esteroisómeros _- y ß-; aloinósidos A y B
(estereoisómeros de 11-_-L-ramnosilaloína); aloesinas A y B (denominadas "Aloé resina" y
sin acción purgante). La aglicona es la aloé-emodina, que tiene propiedades antiagregantes
de proteínas por lo que tiene potencial contra enfermedades como diabetes, y enfermedades
de Hungtinton y Alzheimer.
La droga "Aloé barbadensis" contiene no menos de un 28% de derivados
hidroxiantracénicos calculados como aloína incluyendo aloína y las aloesinas A y B.
La droga "Aloe capensis" contiene no menos de un 18% de derivados hidroxiantracénicos
calculados como aloína. El "Aloe del Cabo tipo A" proviene de la especie Aloe ferox
MILLER, y contiene aloína, aloinósidos A/B, y aloesinas A/B.
El "Aloe del Cabo tipo B" contiene solamente aloína y aloesinas A/B.
La droga "Aloe socotrina" proviene de la especie Aloe perryi BAKER, y contiene aprox. un
14% de derivados hidroxiantracénicos calculados como aloína. Los componentes son
aloína, aloinósidos A/B y aloesinas A/B.
Estas drogas se utilizan como purgantes y son componentes de la "tintura de Benjuí
compuesta" ("Bálsamo de Friari"). También se ha mencionado el uso del Aloe para el
tratamiento de heridas, quemaduras e infecciones.
Para el reconocimiento de estas drogas además de la cromatografía en capa fina, existen los
siguientes ensayos:
El aloe presenta diferentes actividades como anti cáncer, antioxidante, antimicrobiana,
antialérgica, antiinflamatoria, inmunomodulatoria, hepatoprotectora, anti ulcera y
antidiabética, sin embargo, los mecanismos por los cuales actúan sus componentes, aún se
desconocen. Además, se debe tener en cuenta sus efectos tóxicos, los cuales también son
tema de investigación.
Cochinilla hembra
El "Carmín" es un preparado comercial que contiene aprox. 50% de ácido carmínico. Este
se obtiene de la hembra de la cochinilla, el insecto Coccus cacti (Dactylopius coccus), del
orden de los hemípteros, originario de América Central. Los principales productores son
Perú, Islas Canarias, Argelia y Honduras.
El "Carmín" es un material de color rojo que contiene 10% de ácido C-glucosilcarmínico, y
el cual es falsificado o adulterado con otros materiales coloreados orgánicos e inorgánicos.
El "Carmín" se utiliza como agente colorante de sólidos y líquidos, y como indicador,
aunque como colorante ha sido poco a poco reemplazado por otros colorantes sintéticos.
También ha mostrado propiedades antimicrobianas y antitumorales.
La valoración de la droga se hace colorimétricamente a 530 nm y a un pH de 8.
Además del carmín se han aislado otras antraquinonas como el ácido 4-aminocarmínico de
este insecto.
Naftoquinonas
Las naftoquinonas, a diferencia de las antraquinonas, han sido menos estudiadas
químicamente debido a que solo se han aislado en años recientes. Los métodos utilizados
para su aislamiento, reconocimiento y caracterización son prácticamente los mismos de las
antraquinonas. Al igual que las antraquinonas pueden biosintetizarse bien sea por la ruta de
la malonilCoA o por la ruta del ácido shikímico conjugada con la del ácido mevalónico. Se
las ha encontrado en diferentes partes vegetales (especialmente corteza de tallos y raíces) de
plantas pertenecientes a las familias litráceas, bignoniáceas, melastomatáceas,
boragináceas, droseráceas, juglandáceas, plumbagináceas, poligonáceas, ebenáceas, etc. En
esta última familia se las encuentra en forma dimérica.
Por otro lado, las características espectrales de las naftoquinonas son similares a las de las
antraquinonas, aunque a diferencia de estas pueden observarse acoplamientos alílicos entre
protones de un carbono ligado al carbono 2, y el protón ligado al carbono 3 (y viceversa),
con constantes de acoplamiento de 1.5 a 3 Hz en el espectro RMN- 1H. En el espectro de
masas de impacto electrónico también se observan fragmentos debidos a pérdidas de una o
dos moléculas de CO, entre otros. Se han reportado procedimientos para la síntesis del
núcleo naftoquinona. Varias de estas sustancias presentan actividad biológica, entre otras
algunas tienen actividad antimalárica, antipsoriática, antitumoral y contra la lepra. En
particular se han preparado diferentes derivados con actividad potencial contra
glioblastomas.
Problemas
1. De las raíces de Cassia singueana, fabáceas; se aisló por métodos cromatográficos
una sustancia denominada islandicina que presenta las siguientes características
espectrales:
RMN-1H (400 MHz, CDCl3): δ 13.51 (s, 1H), 12.35 (s, 1H), 12.30 (s, 1H), 7.91 (dd, J = 1.2, 8.0,
1H), 7.73 (t, J = 8.0, 1H), 7.33 (dd, J = 1.2, 8.0, 1H), 7.18 (s, 1H), 2.40 (s, 3H).
RMn-13C (100 MHz, CDCl3): δ 190.4, 186.3, 162.5, 157.8, 157.7, 141.8, 136.6, 129.0, 124.5,
119.3, 116.5, 111.6, 110.8, 110.6, 16.5.
Determine la estructura más probable para esta sustancia y compare los datos RMN con los
calculados con el software en línea nmrdb.org
10. Determine la estructura para una sustancia aislada de dos plantas de la familia
juglandáceas con las siguientes características:
EMIE m/z (% IR): 176 (100), 148 (18), 147 (15), 121 (29), 120 (83), 92 (41), 63 (16).
RMN-1H: 3.0-3.2 (4H, m), 7.26 (1H, dd, J = 8.2 y 1.4 Hz), 7.55 (1H, dd, J = 7.4 y 1.4 Hz),
7.66 (1H, dd, J = 8.2 y 7.4 Hz), 12.12 (s, 1H).
a) P.F.: 177-180°C
UV (MeOH): 206, 286, 306h, 380h.
IR (KBr): 3450, 2925, 1662, 1630, 1580, 1517, 1460, 1320, 1240, 1220, 1180, 1105, 1060,
982, 880, 772, 620 cm-1.
EMIE: 300 (100), 281 (12), 257 (13), 229 (19), 212 (5), 186 (18), 155 (7), 136 (14), 109 (5), 91
(12), 69 (19).
RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 3.98 (s, 3H), 4.01 (s, 3H), 6.55 (d, 1H, J = 2.2 Hz), 7.17
(d, 1H, J = 2.2 Hz), 7.59 (s, 1H), 7.64 (s, 1H), 12.95 (s, 1H).
RMN-13C (100 MHz, DMSO-d6): 56.1 (dos carbonos), 105.2, 107.3, 111.3, 108.2, 108.3, 127.8,
127.5, 134.8, 153.3, 153.6, 164.7, 166.9, 181.2, 184.5 ppm.
b) P.F.: 270-3°C
UV (MeOH): 205, 288, 328, 400 nm
IR (KBr): 3425, 2920, 2310, 1660, 1630, 1595, 1517, 1450, 1320, 1220, 1160, 1117, 1060,
1000, 895, 817, 760, 605 cm-1.
EM-FAB: m/z 301 (M+H, 30%), 300 (6), 243 (6), 223 (31), 207 (30), 185 (48), 153 (10), 131
(32), 115 (100).
RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 2.06 (s, 3H), 3.96 (s, 3H), 7.18 (s, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.59 (s, 1H),
13.28 (s, 1H).
RMN-13C (100 MHz, DMSO-d6): 8.0, 55.9, 107.3, 108.5 (dos carbonos), 112.6, 116.7, 125.9,
128.0, 131.8, 152.7, 162.1 (dos carbonos), 162.5, 181.2, 185.6 ppm.
c) P.F.: 237-9°C
UV (MeOH): 216, 284, 406 nm.
IR (KBr): 3400, 2945, 1660, 1627, 1588, 1495, 1465, 1430, 1365, 1315, 1297, 1275, 1235,
1200, 1130, 1100, 1070, 1025, 1002, 917, 860, 740, 620 cm-1.
EM-FAB: 331 (M+H, 78%), 330 (22), 315 (100), 299 (65), 285 (33), 264 (28), 235 (18), 223
(43), 205 (31), 193 (24), 181 (15), 164 (22), 151 (56), 137 (55), 115 (79).
RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 3.80 (s, 3H), 3.98 (s, 3H), 4.62 (s, 2H), 7.57 (s, 1H), 7.64
(d, 1H, J = 7.8 Hz), 7.82 (d, 1H, J = 7.8 Hz), 12.94 (s, 1H).
RMN-13C/DEPT (100 MHz, DMSO-d6): 56.1c, 57.3t, 60.5c, 105.8d, 114.2s, 118.2d,
121.0s, 124.7s, 132.6s, 133.2d, 136.7s, 147.8s, 148.3s, 152.4s, 157.8s, 180.3s, 187.4s.
d) P.F.: 244-6°C
UV (MeOH): 209, 245h, 284 nm
IR (KBr): 3370, 2925, 1700, 1664, 1592, 1560, 1498, 1381, 1342, 1283, 1140, 1085, 983, 880,
800, 720 cm-1.
EMIE: 328 (47), 310 (34), 281 (28), 252 (13), 214 (25), 181 (42), 152 (12), 123 (56), 91 (32),
69 (100).
RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 3.81 (s, 3H), 3.98 (s, 3H), 7.55 (s, 1H), 8.13 (d, 1H, J =
8.0 Hz), 8.27 (d, 1H, J = 8.0 Hz), 8.59 (s, 1H).
RMN-13C/DEPT (100 MHz, DMSO-d6): 56.5c, 61.0c, 106.3d, 121.0s, 126.2d, 126.7s,
127.5d, 134.0d, 134.3s (dos carbonos), 139.0s, 147.0s, 148.2s, 152.8s, 167.0s, 181.0s,
181.7s.
Determine las estructuras más probables para estas sustancias. Emule los espectros RMN y
compárelos con los datos experimentales.
13. De las raíces de Morinda elliptica se aisló una sustancia con las siguientes
características:
Cristales de color naranja, PF 183-185°C
(CHCl3) UV (EtOH): 229, 278, 331, 407 nm
UV (EtOH+NaOH): 229, 280, 308, 531 nm
IR (KBr): 3448, 1696, 1676, 1638, 1592, etc.
EMIE: m/z 252 (57%), 224 (100), 196 (11), 168 (30), etc.
RMN-1H (CDCl3, 500 MHz): 13.26 (s, 1H), 10.63 (s, 1H), 8.35 (m, 1H), 8.32 (m, 1H),
8.23 (d, 1H, J=8 hz), 7.89 (1H, d, J=8 hz), 7.88 (2H, m).
RMN-13C (CDCl3, 125 MHz): 164.5, 128.4, 135.4, 118.7, 127.7, 134.7, 135.3, 127.1, 188.9,
181.8, 133.3, 134.8, 117.4, 137.2, 188.0 ppm.
Determine la estructura más probable para esta sustancia vegetal.
14. De la madera de un árbol, se aisló una sustancia con las siguientes características
espectrales:
UV (EtOH): 220, 230, 275, 370h, 430 nm
IR (KBr): 3200-3150, 1.670, 1630 cm-1
RMN-1H (DMSO-d6): 13.00 (s, 1H), 8.10 (d,10Hz, 1H), 8.00 (d, 10Hz, 1H), 7.15 (d,
10Hz, 1H), 6.80 (d, 10Hz, 1H), 4.00 y 3.80 (s, 6H), 2.40 (s, 3H)
MS m/z (rel. int.): 298 (70), 283 (85), 281 (85), 280 (60), 270 (35), 269 (20), 242 (100), 186
(90), 165 (30), 137 (,15), 136 (70) y 108 (20%)
Con anhídrido acético y piridina produce un derivado acetato (PF 138-140°C), con
dimetilsulfato produce un derivado metiléter (PF 122-4°C, desde éter). La oxidación
crómica produce ácido 3,4-dimetoxiftálico (PF 172-73°C).
Determine la estructura más probable para esta sustancia.
15. De la madera de un árbol, se aisló una sustancia con las siguientes características
espectrales:
UV (EtOH) 255, 282h, 415 nm
IR (KBr) 3210-3180, 1675 cm-1
RMN-1H (DMSO-d6): 9.90 (bs, 1H), 8.06 (d, 8 Hz, 1H), 7.58 (d, 2 Hz, 1H), 7.44 (d, 3 Hz, 1H),
7.12 (dd, 8 y 3 Hz, 1H), 7.08 (d, 3Hz, 1H), 4.03 (s, 3H) y 2.49 (s, 3H)
MS m/z (rel. int.): 268 (100), 253 (70), 251 (1.5), 250 (50), 240 (10), 239 (20), 212 (80), 156
(85), l49 (55), 1 12 (18), 121 (27) y 93 (10%). Con anhídrido acético y piridina produce un
derivado acetato (PF 147-8°C), con dimetilsulfato produce un derivado metiléter (PF 160-
3°C). La oxidación crómica produce ácido 4-hidroxiftálico (PF 203-4°C). Determine la
estructura más probable para esta sustancia.
Flavonoides
Los flavonoides son un gran grupo de sustancias vegetales que fueron descubiertas por el
premio Nobel en Bioquímica Dr. Albert Szent-Gyorgi, quien les denominó como "vitamina
P". El Dr. Szent-Gyorgi descubrió que los flavonoides favorecen la función de la vitamina
C, mejorando su absorción y protegiéndola de la oxidación. Los flavonoides comprenden
varias clases de sustancias naturales, entre las cuales están muchas de las que les confieren
colores amarillo, naranja, rojo, violeta y azul, a muchas flores, hojas y frutos,
especialmente. Cuando usted amigo lector está observando una rosa roja, además de
disfrutar la gracia artística de su diseño, está disfrutando de su color, ese color es debido a
los flavonoides; cuando se obaserva una fresa jugosa, una uva roja ó morada, una flor
amarilla, se está observando ni más ni menos a sustancias flavonoides. Esos colores que
disfruta nuestro cerebro al percibirlos son en su gran mayoría debidos a los flavonoides.
OH
OH
HO
O
OH
OH O
Figura 2.25. Estructura básica de los flavonoides y estructura del flavonoide quercetina a la
derecha.
La Figura 2.25 muestra una de las maneras más utilizadas por los químicos para representar
las moléculas de los flavonoides en dos dimensiones, sin embargo, existen otras maneras de
representarlas de manera más real, esto es en tres dimensiones como se ilustra por ejemplo
en la Figura 2.26.
Figura 2.26. Estructura química en tres dimensiones del flavonoide quercetina. Representación en
esferas: átomos de carbono de color azul, átomos de oxígeno en color rojo y átomos de hidrógeno
en color blanco.
Para su estudio sistemático los más de 9000 flavonoides naturales se han clasificado en
varias clases de acuerdo con las variantes estructurales que presenta la cadena central C 3
(Figura 2.27). De acuerdo con esto los flavonoides se clasifican en varios grupos:
Chalconas, flavonas, flavonoles, flavanonas, flavanonoles, antocianidinas, catequinas,
epicatequinas, auronas, isoflavonoides, pterocarpanos, rotenoides, flavolignanos, etc.
Figura 2.27. Estructuras básicas de varias clases de flavonoides. El color es para enfatizar que
compuestos como los flavonoles son generalmente de coloración amarilla, mientras que las
antocianinas son de coloraciones rojo, violeta o azul.
Figura 2.27. (Cont.) Estructuras básicas de varias clases de flavonoides. El color es para enfatizar
que compuestos como los flavonoles son generalmente de coloración amarilla, mientras que las
antocianinas son de coloraciones rojo, violeta o azul.
R3'
O
R7
R6
R5
R4 '
NOMBRE TRIVIAL R3’ R4’ R5 R6 R7 Fuente
Crisina - - OH - OH Populus
Baicaleína - - OH OH OH Scutellaria
Apigenina - OH OH - OH Petroselinum
Escutelarína - OH OH OH OH Scutellaria
Luteolina OH OH OH - OH Reseda
Fisetina OH OH - - - OH - Rhus
Kaemferol - OH - OH - OH - Delphinium
Herbacetina - OH - OH - OH OH Gossypium
Quercetina OH OH - OH - OH - Quercus
Quercetagetina OH OH - OH OH OH - Tagetes
Miricetina OH OH OH OH - OH - Vitis
R3'
X R4 '
R7 O
R5 '
R3
R5
NOMBRE R3’ R4’ R5’ R3 R5 R7 Fuente
TRIVIAL
Apigenidina - OH OH - OH - Rechsteineria
Luteolinidina OH OH OH - OH - Rechsteineria
Pelargonidina - OH OH OH OH - Pelargonium
Cianidina OH OH OH OH OH - Centaurea
Delfinidina OH OH OH OH OH OH Delphinium
R3 '
R4 '
R7 O
R6
R5 O
NOMBRE R3’ R4’ R5 R6 R7 Fuente
TRIVIAL
Pinocembrina - - OH - OH Pinus
Liquiritigenina - OH - - OH Glycyrrhiza
Naringenina - OH OH - OH Prunus
Eriodictiol OH OH OH - OH Eriodictyon
12 3
3 O
1' 2
2' 3'
1 O 1'
2'
3'
Figura 2.32. Estructuras básicas de algunos lignanos y neolignanos. En los lignanos (imagen de la
izquierda), la unión de las dos unidades C 6C3 se dá a través de la cadena propanoide, y en los
neolignanos las dos unidades C6C3 se unen a través de la cadena propanoide de una y el anillo
aromático de la otra.
OH
O
O OMe
O
O
O
MeO
O
MeO OMe
OMe HO
OMe
Podofilotoxina Eusiderina
Figura 2.33. Estructuras químicas de la podofiloxina (un lignano) y la eusiderina (un neolignano).
O CH2OH O CH2OH
HO O O HO O O
O O
OH OH OH OH
OH O OH O
Dehidrosilibina-A Silibina-A
O CH2OH O CH2OH
HO O O HO O O
O O
OH OH OH OH
OH O OH O
Dehidrosilibina-B Silibina-B
Propiedades físicas
Las propiedades físicas dependen de la clase de flavonoide considerado y su forma (libre,
glicósido ó sulfato). Por ejemplo, las flavonas, flavonoles y auronas, debido al sistema de
enlaces dobles C=C conjugados que contienen, son compuestos sólidos con colores que
comprenden desde el amarillo muy tenue hasta el anaranjado. Las antocianidinas son de
colores rojo intenso, morado, violeta y azul. Las flavanonas y flavanonoles debido al
carbono quiral C-2 presentan el fenómeno de la rotación óptica. Los glicósidos son en
general sólidos amorfos, mientras que las agliconas y los altamente metoxilados son
cristalinos.
La solubilidad depende de la forma en que se encuentren y el número y clase de
sustituyentes presentes. Los glicósidos, las antocianidinas y los sulfatos son solubles en
agua y alcohol. Las agliconas flavonoides altamente hidroxiladas son solubles en alcohol
(etanol, metanol y n-butanol), mientras que las poco hidroxiladas lo son en solventes como
éter etílico, acetato de etilo y acetona. Las agliconas flavonoides altamente metoxiladas son
solubles en solventes menos polares como el éter de petróleo y el cloroformo.
Los flavonoides con hidroxilos fenólicos son solubles en soluciones alcalinas, pero algunos
altamente hidroxilados se descomponen por acción de las bases fuertes, un hecho que
permite reconocerlos y diferenciarlos de otros, y que hace años se utilizó para su
dilucidación estructural.
Los glicósidos flavonoides son sólidos amorfos que se funden con descomposición,
mientras que las correspondientes agliconas son sólidos cristalinos.
Biogénesis
Como se mencionó anteriormente los flavonoides son metabolitos secundarios vegetales de
origen biosintético mixto: el anillo A proviene de la ruta de la malonilcoenzima A y el
anillo B y la cadena C3 provienen de la ruta del ácido shikímico. Un tricétido se cicliza y se
condensa con una molécula de ácido p-cumárico. La enolización del ciclo proveniente de la
ruta de la malonilCoA da origen al anillo aromático A en las chalconas y flavanonas. Estas
a su vez son los precursores de las demás clases de flavonoides. Es importante recalcar que
este proceso de biosíntesis sustenta el hecho de que en la mayoría de flavonoides el anillo A
sea meta- dioxigenado, es decir como es característico de los anillos aromáticos originados
por la vía de la malonilCoA; y, por otro lado, el anillo B proveniente de la ruta del ácido
shikímico, generalmente es orto-dioxigenado. La figura 2.35 describe la biogénesis de las
chalconas, las cuales a su vez dan origen a los demás flavonoides.
Para el caso de la biosíntesis de los isoflavonoides los experimentos realizados por diversos
investigadores sugieren que hay rutas alternativas, pero que de todas maneras involucran al
ácido shikímico y la malonilcoenzima-A, como precursores.
Figura 2.35. Esquema de la biogénesis de flavonoides a partir de ácido shikímico y acetilcoenzima-A.
Extracción y aislamiento
Los flavonoides en general se extraen de muestras secas y molidas. La muestra se
desengrasa inicialmente con éter de petróleo ó n-hexano, y el marco se extrae con etanol
puro o del 70%. Este último es recomendado para garantizar la extracción de los más
polares. El
extracto obtenido se evapora con calentamiento no superior a los 50°C y se le hacen
particiones sucesivas con éter etílico, acetato de etilo y n-butanol. Los flavonoides apolares
quedan en la fase etérea, los medianamente polares en la fase acetato de etilo y los más
polares en el n-butanol. Cada una de estas tres fracciones se puede analizar por
cromatografía en capa fina (CCF) y HPLC en fase reversa.
Actualmente se están desarrollando nuevas alternativas de extracción más eficientes, menos
costosas en tiempo y materiales, y especialmente con menores efectos contaminantes del
medio ambiente. Estas técnicas incluyen el uso de sistemas de microondas, y ultrasonido.
La comparación de los métodos clásicos de extracción con técnicas como la asistida con
ultrasonido presenta las ventajas mencionadas, y es útil en general para diferentes clases de
metabolitos secundarios, incluidos los flavonoides. También se ensayan otras mezclas
extractoras como Tritón X100-NaCl-HCl que permiten obtener rápidamente las fracciones
de alcaloides y flavonoides de muestras vegetales. Como se anotó en el capítulo 1, la
utilización de solventes eutécticos viscosos (DES), es una de las técnicas más utilizadas
actualmente para extraer compuestos fenólicos como los flavonoides, por las ventajas sobre
el uso de los solventes orgánicos convencionales.
Para el análisis por CCF de las agliconas se utilizan mezclas n-hexano/acetato de etilo en
diferentes proporciones, estas pueden ser alternativas menos contaminantes que por
ejemplo la mezcla cloroformo/acetato de etilo 60:40 utilizada por diferentes autores para el
análisis de drogas vegetales.
Para el análisis por HPLC de los glicósidos pueden utilizarse columnas RP-18, detectando a
254 nm y eluyendo con mezclas con ácido acético o fórmico diluidos, un alcohol,
acetonitrilo y agua en diferentes proporciones. El ácido previene la formación de picos
asimétricos en el cromatograma. Para el análisis cuantitativo HPLC de las agliconas
también se usan columnas RP-18, detección a 254 nm y elución con mezclas de
acetonitrilo/agua con ácido acético al 1%. Utilizando estas condiciones cromatográficas y
UHPLC con columna C-18 y acoplada con RMN, se pueden identificar de manera eficiente
muchas flavonas y flavonoles comunes. Aunque como en muchas plantas los flavonoides se
encuentran en mezclas con otros metabolitos, se vienen desarrollando técnicas que
combinan la cromatografía en contra corriente CCC, y la resonancia magnética de carbono-
13, para su análisis cualitativo y cuantitativo.
En el caso de las antocianinas, estas se pueden extraer de las muestras vegetales con etanol
55.10% acuoso y asistido con ultrasonido a 70°C. El extracto se puede separar por HPLC
con detector de arreglo de diodos DAD, utilizando columnas de fase reversa C-18, y
eluyendo con mezclas de etanol y ácido fórmico al 5% 20:80. Esta constituye una
metodología rápida, confiable y amigable con el medio ambiente.
Cuantificación de flavonoides totales
Aunque los flavonoides presentes en las plantas y drogas vegetales en general están
mezclados con diferentes metabolitos, y pueden ser de diferentes clases, no existe un
método exacto para su cuantificación. Una aproximación es el método de Chang. En este
método colorimétrico. El extracto alcohólico de la muestra con flavonoides se mezcla con
etanol al 75%, con cloruro de aluminio en solución y con una sal como acetato de potasio.
La reacción produce un complejo coloreado que se puede leer a 415 nm, y se utiliza como
referencia una curva estándar de quercetina. Los resultados se expresan como equivalentes
de quercetina. Otro método similar utiliza nitrito de sodio NaNO2, y cloruro de aluminio
AlCl3, también con lectura espectrofotométrica a 415 nm y utilizando como sustancia de
referencia la quercetina.
El contenido de flavonoides y fenoles totales se puede determinar colorimétricamente
mediante el uso del reactivo de Folin-Ciocalteau, con ácido gálico como marcador de
referencia.
Ensayo de Shinoda
Los flavonoides con el núcleo benzopirona o 4-cromenona (p. ej. flavonas, flavonoles,
flavanonas, etc.) producen coloraciones rojizas cuando a sus disoluciones acuosas o
alcohólicas se les adiciona magnesio seguido de HCl concentrado. Aunque no se conoce el
mecanismo de esta prueba, es muy utilizada para reconocer esta clase de compuestos. Es
importante tener en cuenta que varias clases de flavonoides como las auronas y las
chalconas, no dan resultados positivos con esta prueba, debido a que no contienen el
sistema anular benzopirona o 4-cromenona, y que otras sustancias diferentes a los
flavonoides en cambio dan la prueba positiva, debido a que contienen el sistema
benzopirona o 4- cromenona.
Reconocimiento de antocianinas
Las antocianinas se comportan como indicadores ácido-base debido al proceso mostrado en
la figura 2.36. A pH ácido presentan coloraciones rojas, violetas y moradas; mientras que a
pH alcalino presentan coloraciones verdes y azules.
Figura 2.36. Estructuras químicas y cambio de color de la antocianina cianina con el pH.
Con esta prueba se pueden diferenciar entre las antocianinas y las betacianinas (pigmentos
nitrogenados de colores rojos y violeta de plantas del orden Centrosperma, como p. ej. los
pigmentos de la remolacha Beta vulgaris, Fam. quenopodiáceas y también presentes en
otras plantas como la Phytolacca americana, Fam. Fitolacáceas). Las betacianinas, hacen
parte de un grupo de sustancias nitrogenadas denominadas betalaínas, y estas se dividen a
su vez en dos grupos, las betacianinas de colores rojo al violeta, y las betaxantinas de color
amarillo. Estas sustancias son de interés actualmente por ser pigementos con potencial uso
como colorantes de alimentos, y por sus propiedades antimicrobianas y antivirales (69).
Espectroscopia ultravioleta-visible
Los espectros UV de los flavonoides en metanol presentan bandas características debidas a
los sistemas conjugados de los anillos aromáticos. A continuación, se presenta información
relacionada con la espectroscopia UV de flavonas y flavonoles.
Las flavonas y flavonoles en particular, muestran dos bandas definidas: La banda I, de
mayor longitud de onda en el rango 300-400 nm asociada con la funcionalidad cinamoílo, y
la banda II, entre 240-285 nm debida al anillo aromático A (funcionalidad benzoílo),
aunque a veces se observan otras bandas de absorción. La posición de la banda I depende
del tipo de flavonoide: las flavonas la muestran en 304-350 nm, los flavonoles 3-O-
sustituídos en 330- 360 nm, y los flavonoles en 352-385 nm. A manera de ejemplo la
quercetina muestra máximos de absorción en 371, 268h, 257 nm; la luteolina en 350, 267,
254 nm, y la 3-O- metilquercetina en 358, 253 nm.
Para el caso de las flavonas y flavonoles, la presencia de hidroxilos fenólicos en diferentes
posiciones de la molécula puede establecerse estudiando el comportamiento del espectro
UV metanólico al añadirle los denominados reactivos de desplazamiento: metóxido de
sodio (NaOMe), acetato de sodio (NaOAc), cloruro de aluminio (AlCl3) con y sin HCl, y
ácido bórico (H3BO3).
El NaOMe es una base fuerte que ioniza los hidroxilos fenólicos presentes en la molécula y
particularmente permite reconocer la existencia de grupos hidroxilo en 3 y 4'. Las flavonas
4'-hidroxiladas y los flavonoles 3-O-sustituídos presentan desplazamiento bato crómico de
45-65 nm para la banda I al añadir NaOMe, y la intensidad de la banda no decrece. Los
flavonoles (ó 3-hidroxiflavonas) sin hidroxilo en 4', también presentan el mismo
desplazamiento batocrómico de 45-65 nm, pero la intensidad de la banda se ve disminuida.
En los flavonoles 3,4'-dihidroxilados, orto-dihidroxilados y diorto-trihidroxilados, el
espectro se descompone en pocos minutos luego de añadir el NaOMe. La aparición de una
banda alrededor de 330 nm (banda III) es característica de flavonas 7-hidroxiladas.
El NaOAc es una base más débil que el NaOMe, y ioniza solo los hidroxilos fenólicos más
ácidos: 3, 4' y 7. La ionización del hidroxilo en 7 afecta la banda II y por lo tanto el NaOAc
es un reactivo útil para determinar la presencia de dicho hidroxilo. Si al añadir el NaOAc se
observa un desplazamiento batocrómico de 5-20 nm en la banda II se trata de una flavona o
flavonol 7-hidroxilado. Las flavanonas 5-hidroxiladas presentan un desplazamiento
batocrómico de 35 nm. Los flavononoles (sin 5-OH) presentan un desplazamiento
batocrómico de 60 nm. Sin embargo, Heinz y col. han reportado que se debe tener
precaución en la obtención del espectro con NaOAc.
El H3BO3 en medio alcalino forma quelatos con hidroxilos fenólicos en posición relativa
orto (Figura 2.37).
Figura 2.37. Reacción de formación de quelato entre grupos hidroxilos en posición orto y el ácido
bórico. La reacción ocurre en medio alcalino.
Figura 2.38. Reacción de formación de quelatos entre el cloruro de aluminio y grupos hidroxilo peri
y orto de flavonoides.
0.0 Tetrametilsilano
0.0-0.5 Trimetilsililo
Las antocianinas se pueden reconocer en sus espectros RMN- 1H por la señal alrededor de δ
9 (s, H-4) y las señales características de otros protones aromáticos como en los glicósidos
de la delfinidina.
Las flavanonas se reconocen por las señales dd en δ 5.4-6.0 (H-2, J=13 y 2-3 Hz), 3.1-3.3
(H- 3eq, J=13 y 17 Hz) y 2.7-2.8 (H-3ax, J=17 y 2-3 Hz).
Las isoflavanonas se pueden reconocer por RMN-1H por las señales: δ 4.6 (H-2a, dt), 4.5
(H- 2b, dd) y 4.3 (H-3, dd).
Los protones de los grupos hidroxilos generalmente no se observan en los espectros cuando
estos se determinan en solventes próticos, pero algunas veces se observa la señal del
hidroxilo en C-5, entre 12.0 y 14.0 ppm, en forma de un singlete ancho.
En el espectro de RMN-13C se pueden reconocer varios tipos de carbonos, en la Tabla 4 se
presentan los rangos de desplazamiento químico para varios de ellos.
18 C-6 de ramnosa
30 C-4 de flavan-3-oles
56-61 Metoxilos
80 C-2 de flavanonas
85 C-2 de flavanonoles
2 - - 156.8 144.2
3 - - 135.8 136.8
4 - - 175.9 175.0
5 - - 161.1 161.8
7 - - 164.2 164.6
9 - - 147.4 157.1
10 - - 103.1 105.1
1’ - - 122.7 123.8
3’ - - 144.8 145.6
4’ - - 146.6 146.6
Figura 2.39. Esquema general de la fragmentación por espectrometría de masas clásica de flavonas
y flavonoles.
Las flavonas e isoflavonas generalmente muestran los fragmentos A1+., [A1+H]+, B1+. y
B2+. Los flavonoles muestran [A1+H]+ y B2+; además el fragmento [M-CHO]+. Las 3-
metoxiflavonas muestran A1+., [A1+H]+ y B1+.. Además, se observa el fragmento [M-CO-
Me]+.
Las flavanonas muestran A1+., [A1+H]+, [B1+2H]+. y los fragmentos [M-anillo B]+ y B3+.,
formados mediante esquemas como se ilustra en la figura 2.40.
R7 O
R4'
R7 O R5 OH
[M-B]+
R4'
R5 O
M+.
B3+.
Figura 2.40. Esquema para la formación de fragmentos característicos en espectrometría de masas
de impacto electrónico de flavanonas.
+
CH2
OH H
OH O
R5 O
B4+. B5+. B6+
M+.
R7
R4'
R5
R7 [M-28]+.
R7 R7
R5 O
R5
R5 O
R4'
A2+ [A2-28]+
R4'
O
B7+.
[B7-28]+.
Figura 2.42. Esquema para la formación de fragmentos característicos en espectrometría de masas
de chalconas.
Tabla 6. Valores m/z de fragmentos obtenidos a partir de rupturas de las moléculas de flavonas y
flavonoles.
OH H OMe OH H OMe
105 - - - 0 5 0
120 0 4 0 - - -
121 0 4 0 1 4 0
135 - - - 0 4 1
136 1 3 0 - - -
137 1 3 0 2 3 0
150 0 3 1 - - -
151 0 3 1 1 3 1
152 2 2 0 - - -
153 2 2 0 3 2 0
165 - - - 0 3 2
166 1 2 1 - - -
167 1 2 1 2 2 1
168 3 1 0 - - -
169 3 1 0 4 1 0
m/z Número de sustituyentes en el ANILLO A Número de sustituyentes en el ANILLO B
180 0 2 2 - - -
181 0 2 2 1 2 2
182 2 1 1 - - -
183 2 1 1 3 1 1
184 4 0 0 - - -
185 4 0 0 5 0 0
195 - - - 0 2 3
196 1 1 2 - - -
197 1 1 2 2 1 2
198 3 0 1 - - -
199 3 0 1 4 0 1
210 0 1 3 - - -
211 0 1 3 1 1 3
212 2 0 2 - - -
213 2 0 2 3 0 2
226 1 0 3 - - -
227 1 0 3 2 0 3
240 0 0 4 - - -
241 0 0 4 1 0 4
255 - - - 0 0 5
Para los glicósidos y flavonoides sulfatados, aunque inicialmente se obtenían los espectros
de masas a partir de sus derivados permetilados, y trimetilsililéteres, posteriormente se
utilizaron las técnicas de espectrometría de masas de ionización suave, particularmente la
denominada espectrometría de masas con bombardeo de átomos rápidos, correspondiente a
la sigla inglesa FAB “fast atom bombardment”. El espectro de masas FAB permite
reconocer los flavonoides sulfatados ya que presentan además del ion pseudomolecular
(M+H+ en modo positivo, ó M-H- en modo negativo), pérdidas sucesivas de 80, 160, 240,
etc. unidades de masa debidas a la pérdida de 1, 2, 3 ó más grupos sulfato. Por ejemplo, la
figura 2.43, presenta la estructura de 3,3’-disulfato de gossipetina-7,8-dimetiléter. Se
muestra el ion
pseudomolecular m/z 505 (M-H) +, y los fragmentos m/z 425 y 345, correspondientes a las
pérdidas de una y dos unidades de sulfato, respectivamente. En la actualidad la técnica FAB
ha sido desplazada por la espectrometría de masas ESI.
M eO O
3,3'-disulfato de gossipetina-7,8-dimetiléter
Para el caso de las agliconas flavonoides los espectros de masas ESI, presentan fragmentos
muy similares a los observados en los obtenidos en los espectros de impacto electrónico. En
modo negativo se aprecian los iones [M-H]-, y en modo positivo [M+H]+. La figura 2.44.
muestra un esquema que incluye los fragmentos que son característicos de la luteolina
(3’,4’,5,7-tetrahidroxiflavona) tanto en el espectro de masas de impacto electrónico IE
como en el espectro de masas ESI. Puede observarse que los tres fragmentos en la parte
superior corresponden a fragmentos del espectro de masas de impacto electrónico m/z 134
y 152, que en el caso del espectro ESI se observan protonados, y corresponden en este caso
a m/z 135 y 153.
OH OH
OH OH
HO O
B1+.
O
OH O
m/z 134
IE B2+
A1+.
IE IE OH
m/z 137
m/z 152 OH
HO O ESI
OH
OH
OHO
+ ESI ESI
HO OH
OH O
OH
OH O
B2+
+. +
[A1 ] + H
+. +
m/z 137
m/z 153 [B1 ] + H
m/z 135
Figura 2.44. Esquema que muestra los fragmentos A 1+., B1+. y B2 +, característicos de la luteolina, una
aglicona flavonoide, en espectrometría de masas de impacto electrónico (arriba) y espectrometría de
masas ESI (abajo).
El espectro ESI MS/MS del kaemferol, muestra de manera similar los iones m/z 287
[M+H]+, 153 [A1+.+H]+ y 121 [B2+H]+.
En el caso de los espectros de masas ESI de glicósidos, estos ya permiten reconocer
compuestos tales como C-glicósidos, por fragmentos característicos como la pérdida de
C4H8O4 (120 Da). Además, estos espectros ESI, muestran fragmentos de los O-glicósidos
flavonoides como son las pérdidas de una o más unidades de carbohidratos ligados. Por
ejemplo, el espectro de masas de la hesperidina muestra un pico ión cuasimolecular m/z
611 y los fragmentos m/z 465 [M+H−146] y 303 [M+H−308]+ por la pérdida de una unidad
de ramnosa (146 Da) y una de rutinosa (308 Da) respectivamente. El espectro de masas ESI
de la flavanona isosakuranetina-7-O-apiósido, muestra el ión cuasimolecular m/z 581 (M +
H+) y los fragmentos m/z 449 (M – pentosa), 419 (M – hexosa) y 287 (M – pentosa –
hexosa).
Cuando se utilizan otras técnicas de ionización como la ionización química a presión
atmosférica APICMS, junto con técnicas de separación HPLC y espectrometría de masas
tándem MS/MS, se obtienen los iones [M- H]+, y [M – azúcar – agua – H]+. Por ejemplo,
para la miricetina-3-O-galactósido, se obtienen los iones m/z 479 y 317, correspondientes a
los iones [M-H]+ y el peso de la correspondiente aglicona [M – galactosa – agua – H]+. Para
la quercetina-3-glucósido, se observan los iones m/z 463 y 301, correspondientes a los
iones [M-H]+ y el peso de la correspondiente aglicona [M – glucosa – agua – H]+.
Para el caso de las antocianinas, la técnica ESI-MS/MS, permite también no solo la
determinación del peso molecular sino la determinación de los carbohidratos ligados. Por
ejemplo, en el espectro ESI-MS/MS de delfinidina-3-O-(2-O-glucopiranósil-
arabinopiranósido), se observan el ión cuasimolecular m/z 599.1199 y el ion m/z 303.0431,
correspondiente al peso de la sola aglicona. Además, estas modernas técnicas de
espectrometría de masas permiten el análisis más rápido de las antocianinas en muestras
vegetales.
Fuentes de antocianinas
Las antocianinas debido a sus propiedades como verdaderos pigmentos vegetales y a que
son fácilmente degradados en el intestino, se utilizan principalmente como colorantes de
medicamentos y alimentos. Se extraen de plantas comestibles como las uvas negras (Vitis
vinifera, ampelidáceas), la mora, la fresa, el repollo morado, el pericarpio del rábano rojo, el
grosellero negro (Ribes nigrum, saxifragáceras), etc. Las antocianinas de los frutos y hojas
del arándano, Vaccinium myrtillus L., ericáceas, presentan propiedades vasoprotectoras y
contra desórdenes oftalmológicos, y se comercializa el extracto con el nombre de
Myrtocyan®.
Problemas
RMN-1H (CDCl3, 300 MHz) ⸹ 3.88 (s, 3H), 3.95 (s, 3H), 3.96 (s, 3H), 4.00 (s, 3H), 4.11 (s, 3H),
7.00 (d, 1H, J=7.0 Hz), 7.77 (d, 1H, J=2.2 Hz), 7.78 (dd, 1H, J=2.2 y 7.0 Hz), 12.40 9s, 1H).
RMN-13C (CDCl3, 75 MHz): 56.1, 60.1, 61.2, 61.7, 62.1, 107.5, 110.5, 114.6, 121.6, 123.7,
132.9, 136.2, 138.9, 144.9, 145.6, 149.0, 149.1, 152.9, 155.8, 179.4 ppm.
Determine la estructura más probable para esta sustancia. Simule sus espectros RMN y
compárelos. Compare la potencial actividad antioxidante de esta sustancia y la de la
quercetina.
RMN-1H (CDCl3, 360 MHz) ⸹ 3.90 (s, 3H), 4.02 (s, 3H), 4.04 (s, 3H), 6.59 (s, 1H), 7.03
(2H, d, J=8.9 Hz), 7.89 (2H, d, J=8.9 Hz), 11.82 (s, 1H).
RMN-13C (CDCl3, 90 MHz) 55.6, 60.2, 61.2, 103.0, 103.1, 114.7, 123.0, 128.0, 128.2, 131.6,
145.4, 148.4, 150.9, 162.4, 163.1, 182.3 ppm.
Determine la estructura más probable y el nombre sistemático de esta sustancia. Compare
su potencial actividad anttinflamatoria con la del kaempferol.
Espectro de RMN-1H (60 MHz, CCl4): 3.83 (3H, s); 6.18 (d, 1H, J=2 Hz); 6.47 (d, 1H,
J=2 Hz); 6.85 (d, 2H, J=8 Hz), 8.00 (d, 2H, J=8 Hz).
Espectros UV: MeOH: 366, 266 nm; NaOMe: 418 nm (desc.); AlCl3: 423, 270 nm; AlCl3/HCl:
426, 267 nm; NaOAc: 369, 265 nm; H3BO3/NaOAc: 366, 265 nm
Determine la estructura más probable para esta sustancia, asigne las señales de RMN y el
correspondiente nombre sistemático. Simule su espectro RMN y compare con el dado en el
problema.
Espectro de masas de impacto electrónico: m/z = 316 (100%), 301 (24), 288 (19), 285 (27),
273 (28), 271 (28), 166 (5), 137 (15), 109 (11).
Espectro de RMN-1H (60 MHz, DMSO-d6): 3.90 (3H, s); 6.33 (d, 1H, J=2 Hz); 6.65 (d,
1H, J=2 Hz), 6.85 (d, 1H, J=8 Hz); 7.62 (dd, 1H, J=8 y 2 Hz); 7.58 (d, 1H, J=2 Hz); 12.45
(s, 1H).
Espectros UV: MeOH: 372, 255 nm; NaOMe: 418, 294 nm; AlCl3: 455, 275 nm; AlCl3/HCl:
425, 268 nm; H3BO3/NaOAc: 386, 259 nm
Determine la estructura más probable para esta sustancia, asigne las señales de RMN y el
correspondiente nombre sistemático. Compare su actividad anticáncer de seno potencial
contra la fisetina.
5. Del extracto de la corteza de Colebrookea oppositifolia (Labiadas), usada en China
para el tratamiento de fracturas, heridas y artritis reumatoide, se aislaron dos
compuestos con las siguientes características:
Compuesto A:
IR (KBr): 3270, 1650, 1600, 1580, 1485, 1441, 1350, 1290, 1196, 1112, 1065, 1045, 840, 800,
765, 680 cm-1.
EM-FAB: m/z 447 [M+H].
EMIE: m/z 284 (100), 266 (41), 238 (44), 181 (15), 153 (35), 139 (32), 102 (48).
RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 12.89 (s, 1H), 8.10 (2H, dd, J=7.6 y 1.6 Hz), 7.60 (3H, m),
6.98 (1H, s), 7.03 (1H, s), 5.05 (1H, d, J=7.6 Hz), 3.90 (s, 3H).
RMN-13C (100 MHz, DMSO-d6): 56.56, 60.91, 69.95, 74.13, 76.54, 77.21, 91.77, 102.05,
104.93, 105.16, 126.35 (dos carbonos), 128.31, 129.05 (dos carbonos), 130.62, 132.01,
151.60, 152.75, 158.99, 163.39, 182.31 ppm.
Compuesto B:
IR (KBr): 3430-3240, 1650, 1610, 1560, 1500, 1442, 1350, 1280, 1240, 1162, 1075, 1040,
850, 830, 751, 740 cm-
1. EM-FAB: m/z 432
[M+].
EMIE: m/z 432, 280, 270, 242, 152, 124, 118.
RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 12.88 (s, 1H), 7.87 (1H, d, J=8.1 Hz), 7.53 (1H, dd, J=8.4 y
7.4 Hz), 7.33 (1H, d, J=8.4 Hz), 7.20 (1H, dd, J=7.5 y 7.8 Hz), 7.00 (1H, s), 6.45 (1H, s),
6.20 (1H, s), 5.10 (1H, d, J=8 Hz).
RMN-13C (100 MHz, DMSO-d6): 60.63, 69.62, 73.28, 76.73, 77.12, 93.69, 98.76, 100.26,
103.77, 110.19, 115.53, 120.32, 121.91, 129.00, 132.73, 155.35, 157.64, 160.76, 161.36,
164.30, 181.79 ppm.
Determine las estructuras más probables para estas dos sustancias. Asígneles el nombre
sistemático y compare su potencial actividad antioxidante.
6. Prediga, simule y compare los espectros RMN-1H de los siguientes compuestos:
ácido gálico, ácido elágico, ácido clorogénico, ácido 3,4-dihidroxibenzoico,
vainillina, anetol, podofilotoxina,
3,5,7,3’,4’-pentehidroxiflavona, 3,5,7,3’,4’- pentametoxiflavona, 4,5,7-trihidroxi-
2-metilantraquinona, 4,5,7-trimetoxi-2- metilantraquinona.
Cannabis
La marihuana corresponde a la especie vegetal Cannabis sativa. El uso terapéutico de esta
planta se ha incrementado recientemente, y a diferencia de muchos medicamentos actuales
no surgió de un desarrollo científico, sino que es usado por muchas personas con propósitos
recreativos, en vaporizaciones, en tés, e inclusive en galletas y otros alimentos.
Se tienen registros físicos del uso de la marihuana desde el año 2727 AC, en ellos se
describe su uso psicoactivo y medicinal. Fue utilizada durante muchos años en Asia y
Europa, y fue traída a América en 1619 para uso en la industria textil. A principios del siglo
19, era común encontrar en las farmacias norteamericanas las tinturas de marihuana, y en la
farmacopea americana se describía su uso contra la migraña, la depresión y el dolor; pero
en 1937 se prohibió su venta y uso en los Estados Unidos. En 1970 se incluyó en la lista de
sustancias controladas del Departamento de Control de Drogas y Estupefacientes de los
Estados Unidos (DEA), por considerarla una sustancia altamente peligrosa y muy adictiva.
En 1996 el estado de California fue el primero en legalizar el uso de la marihuana para
fines medicinales.
Dentro de las casi 500 sustancias reportadas en la droga (incluyendo terpenos, aminoácidos,
ácidos grasos, hidrocarburos, flavonoides, carbohidratos, etc.); están unos 70 compuestos
C21 que son a la vez terpenos y compuestos fenólicos denominados canabinoides. Los más
conocidos y estudiados, son los compuestos tetrahidrocannabinol THC, el cual es un
compuesto psicoactivo, y el cannabidiol CBD, al cual se le atribuyen propiedades benéficas
para la salud. El contenido de THC se utiliza para clasificar las plantas de marihuana en dos
variedades: como droga y como planta fibrosa. Si el contenido de THC es menor del 0.2%
se la considera como variedad fibrosa, y si es mayor se la considera variedad como droga.
Es interesante anotar que a pesar de que ya se vende comercialmente una versión sintética
del tetrahidrocannabinol THC, esta presenta mayores efectos colaterales indeseables, que el
obtenido por extracción de la planta. La droga es usada para reducir el vómito en los
tratamientos de quimioterapia del cáncer, para mejorar el apetito en personas con sida, para
el tratamiento del dolor crónico, contra la epilepsia y para los espasmos musculares.
Los cannabinoides se extraen a partir de la droga con diferentes solventes que incluyen el
alcohol (metanol o etanol), cloroformo, butano, hexano, etc.; pero más recientemente se
utilizan métodos como la extracción con fluidos supercríticos con dióxido de carbono y
etanol, con rendimientos hasta del 92%. También con solventes eutécticos (DES), se
encuentra que la mezcla 1:1 de cloruro de colina y tartrato de dietilo se obtienen buenos
rendimientos para la extracción del CBD, con condiciones de temperatura de extracción de
48°C y tiempo de extracción de 55 minutos. Siendo esta última técnica recomendable por
los beneficios en cuanto a rendimiento, los costos bajos y la poca contaminación ambiental,
que se generan.
Los cannabinoides se pueden analizar mediante técnicas como la cromatogafía de gases y
HPLC acopladas a espectrometría de masas.
Para los análisis mediante la cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas, se
preparan los derivados trimetilsililados (TMS). En el caso de algunos canabinoides que
contienen el grupo carboxilo, los espectros de masas de los derivados trimetilsililados
presentan fragmantaciones características. Por ejemplo, el espectro de masas del derivado
TMS del ácido cannabigerólico (CBGA), muestra los iones m/z 576 (M +.), 561 (M+. –
metilo, muy intenso), 486 (M+. – TMSO), 453 (M+. – 123), 417 (M+. – 159), 147, 73
(TMS+), entre otros.
El espectro de masas del derivado TMS del ácido tetrahidrocannabinólico (THCA) muestra
los iones m/z 502 (M+.), 487 (M+. – metilo, muy intenso), 413 (M+. – TMSO), 147, 73
(TMS+). La figura 2.45. esquematiza la formación de algunos de estos iones.
m/z 486 m/z 561
- TMSOH
- Metilo
Si
OO
Si
O
Si
O
CBGA
Si m/z 576
O O Si
+
CH2 Si
O
m/z 73
Si
O
Si
m/z 453 OO
Si
O
Si
O CH2+
m/z 519
OH OH
H H
O HO
Cadena policetídica
O
SCoA O
AcetilCoA COOH
O
O
O
OPP
GeranilPP
THC, CBD, etc.
Monoterpeno
Figura 2.46. Esquema biogenético que explica la formación de los canabinoides a partir de
acetilcoenzima-A.
Referencias bibliográficas
21 22 24 26
20
18 23 25
12
17
11 27
16
19 13
1
2 9 14 15
10 8
3
7
HO 4
5
6
3 3
HO 5 HO 7
5
R = H, Colesterol (mamíferos)
R = Me, Campesterol (plantas superiores) Ergosterol (hongos y levaduras)
R = Et, Sitosterol (plantas superiores)
R = Et, insat. C-22, Estigmasterol (plantas superiores)
R = Et, insat C-24, Fucosterol (algas)
Nomenclatura
Aunque a la mayoría de esteroles se les conoce por sus nombres vulgares (P.ej. colesterol,
estigmasterol, ß-sitosterol, brassicasterol, poriferasterol, etc.) se usa una forma más
sistemática para llamar a todas estas clases de sustancias. Para ello, se considera a la
mayoría de esteroles relacionados con la estructura del colestano (Figura 3.3).
21 22 24
26
18 25
27
19
3 7
5
6
Figura 3.3. Estructura química del núcleo esteroidal tipo colestano.
Propiedades físicas
La gran mayoría de esteroles conocidos son sólidos cristalinos incoloros, solubles en
solventes orgánicos relativamente apolares (acetato de etilo, cloroformo, benceno, etc.),
menos solubles en alcoholes de bajo peso molecular, y que funden sin descomponerse (en
forma libre o esterificada). Presentan además actividad óptica debido a los carbonos
quirales que poseen. Los esteroles se pueden recristalizar en metanol caliente o en la
mezcla metanol-tetrahidrofurano 10:1, formando cristales en forma de agujas brillantes
incoloras. Los que presentan dobles enlaces conjugados son de color amarillento y tienden
a descomponerse por acción de la luz como por ejemplo los esteroles con insaturaciones en
C-5 y C-7, los cuales son susceptibles a la reacción de oxidación fotoquímica ilustrada en la
figura 3.4.
R R
O2
hv O
HO
HO O
Figura 3.4. Reacción de ciclo adición [4+2] de un esterol con grupo dieno conjugado y oxígeno, en
presencia de luz. El producto es un epidioxiesteroide, o esteroide con un grupo endoperóxido entre
los carbonos C-6 y C-8.
Biogénesis
Los esteroles se derivan biogenéticamente de la acetilcoenzima-A (Ruta del Acetato) vía
mevalonato y escualeno, por una ruta compartida con los denominados triterpenoides. Los
esteroles vegetales tienen como precursor inmediato al cicloartenol, mientras que los
animales tienen al lanosterol (Figura 3.5). De una forma análoga se originan los
triterpenoides.
En la biogénesis de los esteroles también están implicados procesos tales como
hidrogenaciones y deshidrogenaciones C-C, metilaciones (vía S-adenosilmetionina),
hidroxilaciones, etc.
El conocimiento de la biosíntesis de esteroides ha contribuido al desarrollo de la
Quimotaxonomía vegetal, particularmente en el caso de las algas, y ha servido para
correlacionar la estructura de estas sustancias con aspectos evolutivos.
Por otro lado, el conocimiento de la biosíntesis de esteroles como el colesterol, ha llevado a
evaluar diferentes sustancias con el fin de inhibir el proceso de ciclación del óxido de
escualeno, lo que llevaría a inhibir la biosíntesis del colesterol y su potencial para el
desarrollo de nuevos medicamentos antiparasitarios, antihongos, hipocolesterolemiantes y
anticáncer.
Hechos estructurales
Los esteroles naturales más conocidos presentan las siguientes características estructurales:
a. Los enlaces dobles en el núcleo se presentan principalmente en C-5, C-7, C-8 y C-9, en
su orden.
b. Los enlaces dobles en la cadena lateral se presentan especialmente en C-22, y con menor
frecuencia en C-24 y C-25.
c. Además de los grupos metilos 18, 19, 21, 26 y 27, es frecuente encontrar grupos metilo
en C-24, menos frecuente en el C-4.
d. La cadena lateral presenta grupos alquilo (metilo, etilo, isopropilo, propilo, etc.)
principalmente en C-24.
e. Algunos organismos poco evolucionados como los organismos invertebrados marinos,
presentan esteroles con modificaciones en la cadena lateral (anillos ciclopropano, dobles
enlaces alénicos, metilaciones en C-26 y C-27, ausencia del C-25, etc.), y con núcleos
modificados.
AcetilCoA
OPP
Farnesil-PP
[O]
O
Escualeno
HO
HO
Esteroles
vegetales
HO
Cicloartenol
Figura 3.6. Cromatograma HPLC de la fracción de esteroles libres de la esponja marina Ircinia
campana.
La Cromatografía de Gases con diferentes fases estacionarias como OV-17 (1%, 3%, 5%),
SE- 54, etc., con temperaturas de 250-280°C, permite una buena separación y análisis de
mezclas esterólicas. Además, si esta se acopla con un espectrómetro de masas de
impacto
electrónico, se obtienen los respectivos espectros de masas, los cuales facilitan la
identificación.
Ensayo de Liebermann-Burchard
Los esteroles se pueden reconocer fácilmente en los análisis fitoquímicos preliminares de
muestras vegetales y animales mediante el ensayo de Liebermann-Burchard. En este
ensayo, a una solución en acetato de etilo de la muestra que se analiza, se le agrega un
volumen igual de anhídrido acético y una gota de ácido sulfúrico concentrado (98%). Si
hay esteroles, se producen coloraciones verdes, violetas, rojas o azules.
Aunque no se conoce el mecanismo de esta prueba, es muy utilizada. Diferentes autores
aseguran que la prueba la dan positiva solamente los esteroles que tengan en su estructura
grupos dieno conjugados reales o potenciales (por ejemplo en los 5-3-hidroxiesteroides la
deshidratación genera un 3,5 dieno, mientras que los 7-3-hidroxiesteroides requieren de
la deshidratación seguida de isomerización del enlace doble formado hasta conjugarse con
el enlace C=C en C-7). El ensayo de Liebermann-Burchard es la la base del método de
Abell- Kendall, el cual se utilizó durante muchos años para la cuantificación de colesterol
en muestras sanguíneas, sin embargo, actualmente se utilizan métodos instrumentales como
la espectrometría de masas con imágenes (MSI Mass Spectrometry Imaging), que inclusive
permite localizar la presencia de colesterol directamente sobre los tejidos que lo contienen.
Espectroscopia infrarroja
Los espectros infrarrojos de la mayoría de esteroles naturales son bastante simples y
similares a los de alcoholes alifáticos saturados o insaturados. Generalmente se observan:
Una banda de tensión O-H alrededor de 3600 cm-1, bandas de tensión de enlaces C-H
saturados alrededor de 2960-2780 cm-1, bandas de tensión de enlaces =C-H alrededor de
3125-3030 cm-1, bandas de flexión de enlaces saturados C-H alrededor de 1440 y 1380 cm-
1 y bandas de tensión de enlaces C=C olefínicos alrededor de 1670 cm-1 (Generalmente es
una banda débil). Otra utilidad de la espectroscopia infrarrojo es que permite diferenciar
por ejemplo entre los ésteres de esteroles y otros tipos de sustancias como los triglicéridos y
los fosfolípidos.
21
18 26
19 27
3
7
HO
6
Por otro lado, el desarrollo de la RMN Bidimensional permite hacer una asignación más
fácil de las señales y por ende de la estructura.
La tabla 3.3 presenta algunas de las señales de RMN-13C experimentales y calculadas para
el 7-deshidrocolesterol.
[M-CH3]+ -CH3
[M-85]+ X= X=H
[M-111] + H -R
XO M+. H
O
m/z 273
-XOH -H2O
R
X=Ac -R
[M-AcOH-41] +
-CH3
M-XOH
m/z 255
R
-CH3
m/z 213
m/z 145
Figura 3.7. Algunos fragmentos característicos del espectro de masas IE de esteroles con el núcleo
5-androsteno (X = H, Ac, Me, TMS).
R
M - CH3
XO XO
M
m/z 233 (X = H)
- H2O - H2O
R
- CH3
R M - XOH
m/z 215
- CH3
m/z 302
si insat. C-22 R = H
m/z 316
m/z 215 si insat. C-24 R = H
m/z 147
m/z 330
si insat. C-25 R = H
Figura 3.8. Algunos fragmentos característicos del espectro de masas IE de esteroles con el núcleo
0
-androstano (X = H, Ac, Me, TMS).
R
XO M+.
HO
m/z 246
-XOH
X=Ac -R
[M-AcOH-41] +
-CH 3
M-XOH m/z 255
R
[M-XOH-15] +
m/z 300 si insat. en C-22 X=H
-CH 3
m/z 213
m/z 145
m/z 328 si insat. en C-25 X=H
Figura 3.9. Algunos fragmentos característicos del espectro de masas IE de esteroles con el núcleo
7-androsteno (X = H, Ac, Me, TMS).
R
-CH 3 X=H
[M-CH 3 ] +
-R
XO M+. HO
m/z 271
-XOH -H 2 O
R
X=Ac -R
[M-AcOH-41] +
-CH 3
m/z 253
M-XOH
R
[M-XOH-15] +
m/z 158
-CH 3
-CH 3
m/z 211
m/z 143 m/z 128
Figura 3.10. Algunos fragmentos característicos del espectro de masas IE de esteroles con el núcleo
5,7-androstadieno (X = H, Ac, Me, TMS).
En el caso de esteroles dihidroxilados, sus espectros de masas muestran fragmentos que
incluyen las pérdidas de dos moléculas de agua, en general se observan M (generalmente
muy débil), M-agua, M-Me-H2O, M-2H2O, M-2H2O-Me, M-R-H2O, M-R-2H2O, M-R-
D-H2O, M-R-D-2H2O, etc.
Espectroscopia ultravioleta-visible
Debido a que la mayoría de esteroles naturales contienen grupos funcionales tales como
enlaces dobles C=C y el grupo hidroxilo, sus espectros ultravioleta en metanol (200-360
nm) únicamente muestran un máximo de absorción alrededor de 205 nm, debido a
transiciones
-* del enlace doble aislado. Sin embargo, para esteroles con grupos dienos conjugados
como por ejemplo el ergosterol, estos sí absorben intensamente en la región citada y la
posición de los máximos de absorción se puede predecir con las reglas de Woodward-
Fieser para dienos conjugados. Por ejemplo, los esteroles con núcleo 5,7-3-
hidroxiandrostadieno presentan máximos de absorción alrededor de 240, 270, 280 y 290
nm, mientras que los esteroles con núcleo 5,7,9(11)-3-hidroxiandrostatrieno presentan
máximos de absorción alrededor de 310, 325 y 340 nm. Los valores en negrilla
corresponden a los de máximos de absorción de mayor absorbancia. Los esteroides con el
cromóforo 4-3-oxa muestran un máximo característico alrededor de 240 nm.
Correlaciones estructura y rotación específica
Se han hecho estudios donde se correlaciona la rotación específica de soluciones de
esteroles con sus características estructurales. La Tabla 3.4 muestra estas correlaciones.
Tabla 3.4. Correlaciones entre la rotación específica y las características estructurales del esteroide.
ROTACIÓN TIPO ESTRUCTURAL EJEMPLO
ESPECÍFICA
[]D20
Menor de -90° Enlaces dobles conjugados en el anillo B Ergosterol (-135°)
2 etapas
O O
HO
Estigmasterol
OAc O
O O
HO HO OH
F R
9 etapas
O
O O
R
O
2 etapas
F
O
HO
R = H, Androstenodiona
Colesterol R =
Et, Sitosterol
OH OH
COOH
etc.
O O
Etisterona
Figura 3.12. Esquema del proceso químico y microbiológico para la conversión de colesterol y
sitosterol en medicamentos esteroides.
O O
HO
O O
Figura 3.13. Esquema del proceso de obtención de 11-oxiesteroides a partir de los esteroles de la
caña de azúcar.
Síntesis
Una gran cantidad de esteroides naturales y sus derivados se pueden obtener mediante
reacciones con paladio como catalizador.
Los esteroles con la cadena lateral oxigenada son objeto de investigación porque están
implicados en varios procesos biológicos importantes que incluyen la síntesis de ácidos
biliares, la regulación y transporte de colesterol, la modulación de la función de receptores
estrogénicos, la apoptosis; y se cree que son potencialmente útiles para el desarrollo de
productos contra los males de Alzheimer y Parkinson, la esclerosis múltiple la enfermedad
de Niemann-Pick tipo C, y las cataratas.
Ejercicio
Proponer la estructura más probable para los esteroles cuyos espectros se presentan a
continuación:
a) Espectro RMN-1H (400 MHz, CDCl3):
Espectro de RMN-13C (100 MHz, CDCl3):
Espectro de masas (70 eV):
HO
Problema 1b
El espectro de masas muestra el ion molecular m/z: 410 consistente con la fórmula
C29H46O. También se observa el fragmento m/z 377 (M-metilo-agua) característico de
esteroles. Los iones m/z 271 (M-cadena lateral), 253 (271-agua) y 211 (fisión del anillo D y
pérdida de una molécula de agua) indican claramente la presencia de dos insaturaciones en
el núcleo y los iones m/z 128, 143 y 158 hacen evidente que estas insaturaciones están en el
C-5 y el C-7. La diferencia entre el ion molecular y el ion m/z 271 (M-cadena lateral)
indica que la cadena lateral de este componente es monoinsaturada con una fórmula
C10H19. Todo este análisis lleva a la conclusión de que este es un esterol con un núcleo
5,7-3-hidroxiandrostadieno con una cadena lateral monoinsaturada.
1
El espectro de RMN- H muestra las señales 0.638 (s, CH3-18), 0.950 (s, CH3-19), 3.6
(m, H- 3), 5.389 (m, H-6), 5.576 (m, H-7). Las señales 5.046 (dd, J=15.6 y 8.7 Hz) y 5.181
(dd, J=15.1
y 6.4 Hz) corresponden a los protones H-22 y H-23 con geometría E. La señal 0.811 (t,
J=7.3 Hz) es la del grupo CH3-29 que está ligado a un grupo metileno. Este análisis
permitió asignar la estructura del (22E,24)-24-etilcolesta-5,7,22E-trién-3ß-ol para esta
sustancia.
HO
Saponinas y sapogeninas esteroides
RO
R = H, Sapogenina esteroide
R = carbohidrato(s), Saponina esteroide
Figura 3.14. Estructura química general de sapogeninas y saponinas esteroides tipo espirostano.
Biogénesis
Aunque prácticamente no existen estudios reportados sobre la biosíntesis de sapogeninas
esteroides, se especula que la porción esteroide de las saponinas esteroides (también
denominada sapogenina o aglicona esteroide) se origina por la ruta de la acetil coenzima A,
vía ácido mevalónico (en citosol) o metileritritol (en plastidios) y escualeno. La figura 3.15
resume esquemáticamente el proceso. Una vez formado un precursor esteroide con 27
átomos de carbono (p.ej. colesterol), este es deshidrogenado para originar 3-colestanona. La
colestanona es hidroxilada en los carbonos 16, 22 y 27. Este intermedio altamente
hidroxilado en la cadena lateral puede sufrir una deshidratación entre los hidroxilos 16 y
22, lo que origina 3-furostanona; o puede sufrir además otra deshidratación entre los
hidroxilos 22 y 27 restantes, lo que da lugar al anillo espirostano propiamente dicho. La 3-
espirostanona puede ser reducida a 3-espirostanol, el cual puede sufrir procesos
enzimáticos de glicosilación mediados por glicosiltransferasas para originar las saponinas
esteroides.
AcetilCoA -> -> Acido mevalónico -> -> Escualeno -> -> Cicloartenol
Lanosterol
Esteroles vegetales
Colesterol
beta-amirina
O
Oxid. Saponinas triterpenoides
OH
OH
O
-H2O
O O
Furastanona
Oxid.
O OH
OH
O -H2O O
O O
Sapogenina esteroide Reduc.
Glicosiltransferasa
O
GliO
Saponina esteroide
Nomenclatura
Muy comúnmente, a las saponinas esteroides se las denomina con nombres vulgares con la
terminación ina u ósido, como por ejemplo dioscina, hecogenina, sarsaporrillósido, etc. La
nomenclatura sistemática establece el nombre de estas a partir del núcleo básico
ESPIROSTANO, de manera muy similar a como se hace con los esteroles. Es decir, se
nombran primero los sustituyentes alquílicos, seguidos la palabra espirost, espirosta, o
espirostán, según tengan un solo enlace doble C=C, dos o más enlaces dobles C=C, ó si no
tienen enlaces dobles C=C, respectivamente. Luego se nombran los enlaces dobles C=C y
su posición en la estructura, y se termina con el o los grupos hidroxilos presentes según
corresponda: ol, diol, triol, etc. La figura 3.16 y la tabla 3.5. muestran las estructuras
básicas de varias saponinas esteroides naturales.
O
R12
R1
O
R2
3
RO
5
Figura 3.16. Estructura química básica de varias saponinas y sapogeninas esteroides. Para
descripción de los sustituyentes referirse a la tabla 3.5.
Tabla 3.5. Algunas saponinas y sapogeninas naturales y sus fuentes naturales más conocidas.
Smilax
3Glu-1Ram H H H C-C Sarsaporrillósido
sp.,
Liliáceas
Dioscorea sp.,
3Glu H H H C= Dioscina
Dioscoráceas, por ejemplo
C
"Ñame"
Dioscorea sp.,
H H H H C= Diosgenina
Dioscoráceas, por ejemplo
C
"Ñame"
H OH H H C= Ruscogenina Ruscus sp., Liliáceas
C
Agave sp., Agaváceas,
H H H O C-C Hecogenina
por ejemplo "Fique"
H H H H C= Yamogenina -
C
H H OH H C-C Digitogenina Digitalis sp., Escrofulariáceas
Ensayos de reconocimiento
Las saponinas esteroides se pueden reconocer fácilmente en los análisis fitoquímicos
preliminares mediante los ensayos de la espuma, hemólisis de glóbulos rojos, Liebermann-
Burchard y ensayos para carbohidratos.
Ensayo de la espuma
Al agitar una solución acuosa de una muestra que sea o contenga saponinas, se forma una
espuma estable como la obtenida al agitar la solución acuosa de un jabón. Puesto que
existen otras sustancias que pueden formar también espuma, se debe asumir este ensayo
como una prueba presuntiva de la presencia de saponinas esteroides.
Ensayo de hemólisis
Este ensayo es más confiable que el de la espuma. A una suspensión de glóbulos rojos en
solución salina diluida, se añade una solución de la muestra que se presume que es o que
contiene saponinas. Si los glóbulos rojos se rompen (lisan o hemolizan), se asume que la
prueba es positiva. Este ensayo puede realizarse en tubo de ensayo, en cajas de Petri con
agar-sangre o en cajas de Petri con gelatina-sangre. Cuando la muestra contiene taninos,
deben eliminarse antes de realizar la prueba ya que la interfieren. Esto se logra por
tratamiento repetido de la muestra con óxido de magnesio, el cual forma complejos
insolubles con los taninos, por lo cual es fácil eliminarlos por filtración.
Este ensayo, junto con el de la espuma, cuando ambos resultan positivos en una muestra
vegetal (extracto, fracción ó sustancia pura) permiten establecer que la muestra es ó
contiene saponinas. La sola prueba de espuma positiva no es concluyente para determinar la
presencia de saponinas. Además, hay sustancias que interfieren estas dos pruebas como son
los taninos. Si la muestra contiene taninos, estos pueden eliminarse pues se absorben en
MgO.
Ensayo de Liebermann-Burchard
Por la porción esteroide que poseen las saponinas esteroides, este ensayo puede confirmar
su presencia por ejemplo en muestras y extractos vegetales, tal como se indicó
anteriormente para los esteroles, pero debe tenerse en cuenta que al igual que en el caso de
los esteroles -y los esteroides en general- solamente dan un resultado positivo los que
tengan grupos dienos conjugados reales o potenciales. Sin embargo, se debe tener en cuenta
que muchos compuestos naturales, como los carotenoides, que contienen enlaces dobles
C=C conjugados, también dan resultado positivo con este ensayo.
Extracción y aislamiento
Las saponinas esteroides por su carácter glicosídico, son insolubles en solventes apolares.
Para obtenerlas de las plantas o animales, el material seco y molido se desengrasa
previamente con un solvente apolar (generalmente éter de petróleo o n-hexano). El marco
se extrae con etanol, metanol, n-butanol, ó mezclas de diferentes proporciones de estos
alcoholes y agua. El extracto acuoso (libre de alcohol) se liofiliza o se concentra en
rotavapor, y se hace pasar por resinas de intercambio iónico a fin de eliminar sustancias
iónicas. El eluato acuoso se pasa luego a través de materiales como el Sephadex LH-20
para separar las saponinas de otras moléculas como péptidos y macromoléculas que
dificultan su purificación cromatográfica. Una vez obtenidas las saponinas crudas, se
pueden purificar por cromatografía en columna o líquida de alta eficiencia. En el caso de la
cromatografía en columna, se puede utilizar sílica gel y eluentes como los denominados
BAW, es decir mezclas de butanol, ácido acético y agua.
La determinación de los carbohidratos ligados se hace mediante la hidrólisis ácida. Los
carbohidratos liberados se identifican por cromatografía en papel frente a muestras
auténticas o por cromatografía de gases de derivados estables (p. ej. trimetilsililéteres,
metiléteres, etc.). Ciertos derivados como los éteres TMS-(+)-butilglicósidos permiten
además identificar los isómeros D y L.
La técnica combinada cromatografía de gases-espectrometría de masas (CG-EM) permite
también el reconocimiento de los carbohidratos ligados en forma de derivados
trimetilsililéteres de alditoles-MBA mediante el método de Hakomori, como se explica más
adelante.
Para el caso de mezclas complejas de saponinas, el uso de técnicas como HPLC con
detector ELSD, junto a las técnicas de espectrometría de masas electrospray HRESI-MS, ha
permitido facilitar el proceso de aislamiento y caracterización de estas sustancias.
Espectroscopia infrarrojo
Además de las bandas de absorción características de las sustancias esteroides, las
saponinas y sapogeninas esteroides presentan varias bandas originadas por tensiones C-O
de los anillos pirano y furano, localizadas alrededor de 850, 900, 920 y 987 cm-1. Por otro
lado, la intensidad relativa entre las bandas a 900 y 920 cm-1 permite determinar la
estereoquímica del carbono 25. De acuerdo con esto si la banda alrededor de 900 es más
intensa que la de 920 cm-1, la configuración del carbono 25 es R, y en el caso inverso es S.
Algunos procedimientos para la detección y valoración de sapogeninas esteroides se basan
en estas bandas de absorción.
Espectrometría de masas
Las sapogeninas esteroides presentan espectros de masas de impacto electrónico, en los
cuales pueden apreciarse el ion molecular y los fragmentos m/z: 115 y 139, siendo alguno
de estos el pico base del espectro. La figura 4 muestra los mecanismos de fragmentación
que explican la formación de estos dos últimos iones. Budzikiewicz y col. también
racionalizaron los mecanismos de formación probable para iones M-114, M-129 y M-143,
la figura 3.17 describe los mecanismos de formación de los iones característicos m/z 115 y
139. Se ha reportado que, utilizando la técnica de espectrometría de masas con trampa de
iones y triple cuadrupolo lineal, se forma un fragmento similar al m/z 139, pero con valor
m/z 144 Da.
a
O
b
O
M+.
b
a
O
O
O
H
O
O
H
O O
HO O
Figura 3.17. Mecanismos de formación de los iones m/z 115 y 139, característicos en el espectro de
masas 70 eV de sapogeninas espirostánicas.
OH+
- Glucosa
m/z 579
Glu-GalO
- Galactosa
Timosaponina- AIII
m/z 399
- H2O
HO
0.96 d (25R)
1.08 d (25S) 3.3 - 4.0 m 0.78 d (25R)
0.7 - 0.8 s O 0.98 d (25S)
0.9 - 1.2 s O
4.5 m
3.5 m
RO
R = H, Sapogenina esteroide
R = carbohidrato(s), Saponina esteroide
Figura 3.19. Desplazamientos químicos RMN de varios protones del sistema espirostano.
O
80
RO
R = H, Sapogenina esteroide
R = carbohidrato(s), Saponina esteroide
Figura 3.20. Desplazamientos químicos de las señales de RMN-13C de varios carbonos presentes en
el sistema espirostano.
Regla de Klyne
A partir de las rotaciones ópticas de la saponina y la sapogenina correspondiente, es posible
determinar si los carbohidratos ligados están enlazados a través de un enlace - ó -
glicosídico.
Para esto se convierten los valores []D de la saponina y la sapogenina en valores de
rotaciones moleculares [M]D mediante la fórmula:
Método de Hakomori
Debido a que muchas saponinas esteroides contienen más de un monosacárido ligado,
generalmente en el C-3, para poder establecer las uniones glicosídicas entre ellos y asignar
la estructura total de tales compuestos se utiliza el denominado método de Hakomori. Este
método se basa en que al hacer una metilación exhaustiva del glicósido, todos los grupos
hidroxilos libres presentes en los carbohidratos ligados son convertidos en grupos
metoxilos. En cambio, los enlaces glicosídicos y hemiacetal permanecen estables. La
hidrólisis ácida del producto de metilación libera los grupos hidroxilos que participan en los
enlaces glicosídicos a determinar y rompe los enlaces hemiacetal generando un grupo
carbonilo y un hidroxilo
libre en cada molécula de carbohidrato. Luego de esto se hace una reducción con NaBH4,
en la cual los grupos carbonilos obtenidos a partir de los enlaces hemiacetal son reducidos
hasta grupos metileno. La acetilación de esta mezcla lleva a que los hidroxilos formados
por la hidrólisis de los enlaces hemiacetal, y los hidroxilos obtenidos por la reducción del
enlace éter formen los correspondientes acetatos. Los productos obtenidos corresponden a
los denominados alditoles metilados y acetilados, y el patrón de metilación/acetilación
permite establecer las uniones entre ellos. Estos derivados son lo suficientemente estables y
se pueden identificar por CG-EM, y utilizando fases estacionarias quirales se pueden
reconocer si se trata de derivados alditoles de monosacáridos isómeros D ó L.
Para comprender mejor este método supongamos que se tiene una saponina como la
siguiente:
O1
6
HO O
O 1
HO OH O R (R = aglicona esteroide)
HO
HO OH
O
MeO O
O
MeO OMe O (R = aglicona esteroide)
R
MeO
MeO OMe
Al someter a hidrólisis ácida este producto se rompen los enlaces glicosídico (16) y (1O-
aglicona), y los dos enlaces hemiacetal de los dos monosacáridos, se obtiene:
OHO HO
OH
O
MeO OH MeO OH R-OH
+ Me +
O
OMe
MeO OMe
Al tratar esta mezcla de derivados con borohidruro de sodio se reducen los grupos carbonilo
y se obtiene:
OH HO
OH
+ Me +
O
OMe
MeO OMe
+ Me +
MeO OMe
O
OMe
I II
Al analizar por CG-EM esta mezcla se obtiene por un lado el tiempo de retención el cual es
característico de este tipo de derivados (denominados derivados alditol) y el espectro de
masas, el cual también es característico de cada uno de estos derivados, y se comparan con
compuestos de referencia. De esta manera se identifica con precisión cada uno de ellos.
Volviendo al ejemplo, el derivado alditol I corresponde al 1,5-diacetato de 2,3,4-trimetoxi-
ramnitol con un peso molecular de 306 g/mol, y el derivado alditol II corresponde al 1,5,6-
triacetato de 2,3,4-trimetoxi-glucitol con un peso molecular de 336 g/mol. El que un
derivado sea 1,5-diacetilado y el otro sea 1,5,6-triacetilado sugiere que en la saponina
natural el C-6 de uno de los dos monosacáridos está implicado en el enlace glicosídico con
el otro monosacárido, y descartando el C-5 (presente en la mayoría de carbohidratos luego
de romper el enlace hemiacetal), se puede establecer que la unión glicosídica entre los dos
carbohidratos en este caso es (16).
Distribución natural
Las saponinas esteroides se encuentran principalmente en varias familias de la clase
monocotiledónea, como son: Liliáceas, dioscoreáceas y amarilidáceas (agaváceas). En las
dicotiledóneas, se las ha encontrado en las familias solanáceas y escrofulariáceas. En el
reino animal, las estrellas de mar constituyen un ejemplo de animales con saponinas
esteroides.
Importancia farmacéutica
Aunque las investigaciones más recientes muestran que algunas saponinas esteroides tienen
actividades biológicas tales como antimicrobiana, citotóxica, anticáncer ictiotóxica,
molusquicida, insecticida, antihelmíntica, expectorante, diurética, cardiovascular,
antiinflamatoria, anti-úlcera, espermicida, analgésica, antipirética, sedante, antifertilidad,
antihepatotóxica, hemolítica, antimicótica, etc.); fundamentalmente se han constituido
desde hace bastante tiempo, como precursores únicos para la producción industrial de
muchos medicamentos esteroides tales como hormonas sexuales, corticoides,
contraceptivos orales y diuréticos. La producción industrial de estas sustancias requiere una
serie de procesos microbiológicos de fermentación y una serie de conversiones químicas
relativamente complejas y en su gran mayoría patentadas por importantes laboratorios
farmacéuticos. La Figura 3.21, muestra un esquema parcial de la producción de hormonas
esteroides a partir de la diosgenina obtenida de los rizomas de Dioscorea sp. La Figura 3.22
muestra una parte del esquema de la producción de medicamentos corticoides a partir de la
hecogenina acetilada. La Figura 3.23 describe la obtención de medicamentos esteroides a
partir del denominado "compuesto s" que es el intermedio clave para varias clases de
medicamentos esteroides.
OAc
O O
AcO
AcO
O
O
OH
Br O OAc
O
AcO
Br AcO
Br
OH OH
O O
HO OH O OH
O O
Hidrocortisona Prednisona
Figura 3.21. Esquema del proceso de obtención de medicamentos esteroides a partir de diosgenina.
O O
O OH
O
O O
Br
AcO AcO
O
HO O O
F
R
AcO
O
O OH
O O
O
O
OH OH
Testololactona
Rhizopus O Aspergillu
OH s
Compuesto S
Curvularia Streptomyces
OH OH
O O
OH OH
HO
OH
O
O
14-hidroxicortisona
Hidrocortisona
Figura 3.23. Algunas conversiones microbianas del denominado compuesto "S" un intermedio clave
en la producción de medicamentos esteroides.
Glicósidos cardiotónicos
RO RO
Figura 3.26. Estructura general de cardiotónicos. Cardenólidos a la izquierda, bufanólidos a la
derecha (R = H, agliconas; R = carbohidratos, glicósidos).
Biogénesis
Se tienen evidencias experimentales de que la progesterona es un intermedio en el proceso.
La progesterona formada se condensa con una unidad C2 para dar origen a una cadena
lateral de 4 carbonos típica de los cardenólidos. La posterior oxidación y deshidratación
origina el anillo - lactona-,ß-insaturado.
Distribución natural
Los cardiotónicos son sustancias naturales menos distribuidas que los esteroles y las
saponinas, y se encuentran principalmente en las hojas de plantas de las familias
Escrofulariáceas, Apocináceas (especialmente los géneros Nerium, Thevetia, Cerbera,
Apocynum y Strophanthus), Liliáceas, Ranunculáceas y Moráceas.
Los bufanólidos se han encontrado también en ranas del género Bufus, y en las alas de
mariposas monarca, han sido considerados de interés por su potencial anticancerígeno.
Ensayos de reconocimiento
Los cardenólidos se pueden reconocer en muestras biológicas mediante los ensayos de
coloración con varios reactivos nitro, tal como se anotó para las sesquiterpenlactonas;
específicamente con los reactivos de Kedde, Legal y Raymond. Al igual que las saponinas
esteroides, dan resultados positivos con el reactivo de Liebermann-Burchard, lo que
permite diferenciarlos de las lactonas terpénicas y las cumarinas.
Por otro lado, los carbohidratos ligados incluyen generalmente a la D-glucosa, L-rhamnosa
y desoxiazúcares. Estos últimos pueden reconocerse mediante el ensayo de Keller-Kiliani.
Hidrólisis
Los glicósidos cardiotónicos se hidrolizan fácilmente en soluciones ácidas liberando la
sapogenina y los carbohidratos ligados. En medio alcalino, además de liberarse la
sapogenina puede ocurrir la epimerización sobre el carbono 17 y apertura del anillo
lactónico.
Hechos estructurales
Los cardiotónicos naturales en su gran mayoría, poseen:
-un anillo lactónico ,ß-insaturado en posición 17ß
-un grupo hidroxilo o glicosilo en posición 3ß
-un grupo hidroxilo en posición 14ß
-configuración cis entre los anillos A/B y C/D
-otros grupos hidroxilo en 1, 5, 12, 16, etc.
-el grupo metilo 19 algunas veces oxidado hasta alcohol o
aldehído
-1 a 4 unidades de carbohidrato ligadas al oxígeno del
carbono 3
-los carbohidratos ligados son principalmente glucosa
y desoxiazúcares como digitoxosa, cimarosa, etc.
Los desoxiazúcares son una característica importante de los glicósidos cardiotónicos, ya
que esta clase de carbohidratos se encuentra prácticamente restringida a estas sustancias
naturales. La Figura 3.27 muestra algunos ejemplos de cardiotónicos naturales y
desoxiazúcares más comunes.
O
Digilánido-A
OH Digitalis purpurea
digdig(acetildig)gluO
O
HO
Sarmentocimarina
OH
Strophantus spp.
SarO
O
O
O O
OH
GluO
Escilirósido
Scila maritima
H OH H H H H H H
HO H H OH H OH HO H
H OH H OH H OH H OH
Extracción y aislamiento
Al igual que las saponinas esteroides y otros glicósidos terpenoides, los cardiotónicos
pueden aislarse en forma glicosídica o como sapogeninas. En el primer caso se utiliza el
método ya descrito para las saponinas esteroides (desengrase, extracto polar, resina de
intercambio iónico, Sephadex y cromatografía HPLC), mientras que en el segundo caso se
realiza una hidrólisis ácida seguida de partición con un solvente orgánico (generalmente
cloroformo) y cromatografía en sus diferentes formas, especialmente con sílica gel. Otros
métodos incluyen la fermentación del material vegetal, para la obtención de las agliconas.
Como se mencionó en el capítulo 1, los métodos de extracción con ultrasonido y con
sistemas de microondas, presentan ventajas sobre los métodos clásicos de extracción, tanto
en eficiencia, como rapidez, y menos efectos sobre el medio ambiente.
Para el fraccionamiento por cromatografía en columna con sílica gel pueden utilizarse
mezclas de solventes como diclorometano/metanol/agua 91:22:68. Luego de este
fraccionamiento e hidrólisis ácida, las geninas pueden analizarse y separarse por HPLC-
fase
reversa; mientras que los carbohidratos ligados pueden analizarse por cromatografía en
papel eluyendo con la mezcla Butanol/Acido Acético/Agua 4:1:5.
Con las técnicas acopladas como HPLC-Espectrometría de masas se pueden analizar
extractos crudos que contienen glicósidos cardiotónicos o saponinas, mediante técnicas
combinadas como LC-TMS (HPLC combinada con Espectrometría de masas con interface
termospray) y LC-CF/FAB (HPLC combinada con Espectrometría de masas FAB de flujo
continuo), entre otras.
Espectroscopia infrarrojo
Los cardiotónicos además de las bandas características de la funcionalidad esteroide,
presentan bandas de absorción características del grupo carbonilo lactónico ,ß-insaturado
alrededor de 1715-1745 cm-1.
Espectroscopia ultravioleta
El cromóforo -lactona ,ß-insaturada muestra un máximo de absorción alrededor de 215-
225 nm.
Espectrometría de masas
Los espectros de masas de impacto electrónico (70 eV) de las agliconas de cardenólidos
presentan el fragmento característico m/z 111, el cual se origina por el mecanismo ilustrado
en la Figura 3.28. Además, se observa la pérdida de CO2 (M-44).
Para los glicósidos se utiliza actualmente la espectrometría de masas con ionización electro-
spray (ESI-MS).
O
O
O
O
b
O
O
R
+
CH2
Figura 3.28. Mecanismo de formación de los fragmentos m/z 111 y M-44, característicos de
cardenólidos.
O
OH
m/z 415
O HO H
(L )R a m nos ilO
Los bufanólidos se reconocen por RMN-1H por las señales del protón 3 (4.0-5.5 ppm,
quintete ancho), del metilo 18 (0.9, s), del metilo 19 (1.1, s), el protón 21 (7.3, d, J=2-3.5
Hz), el protón 22 (8.0, dd, J=10 y 2-3.5 Hz) y el protón 23 (6.3 ppm, d, J=10 Hz). En el
espectro de RMN-13C se observan las señales características en 76 (C-3), 16-20 (C-18 y
C-19), 119-125 (C-20), 150 (C-21 y C-22), 112-116 (C-23) y 165 (C-24).
Los desoxiazúcares presentes en los glicósidos cardiotónicos presentan espectros RMN
característicos.
Utilidad farmacéutica
Los cardenólidos son conocidos inhibidores de la enzima Na/K-atpasa, por esto tienen
acción inotrópica positiva, es decir, incrementan las fuerzas de contracción del músculo
cardíaco. Por esta propiedad las drogas que contienen este tipo de sustancias se utilizan en
algunos países, particularmente de Europa para el tratamiento de dolencias cardiacas.
Pero más recientemente se ha comprobado que tanto los cardenólidos como los
bufanólidos, presentan actividad anti cáncer. Los bufadienólidos en particular, tienen
además actividades biológicas que incluyen la regulación del tono cardíaco, efecto
anestésico, regulación de la presión sanguínea y estimulación respiratoria. Los
bufadienólidos aislados de anfibios, algunos de ellos en vía de extinción, emergen como
una clase de compuestos naturales de biodiversidad química impresionante. Tienen
selectividad moderada contra células tumorales humanas, especialmente las de la piel de
sapo como bufalina, cinobufagina, telocinobufagina y marinobufagina. Los estudios de
relación estructura-actividad antitumoral para los bufadienólidos muestran que el tamaño y
la electronegatividad de los sustituyentes presentes en los carbonos 1, 3, 5, 10, 11, 12, 15 y
16 determina la mayor o menor actividad antitumoral.
Los cardenólidos como la digoxina, la cual es una droga usada clínicamente, inducen
apoptosis de células de cáncer mamario, de pulmón y de próstata. También se ha reportado
su potencial acción antiviral.
Azuceno de la habana
Corresponde al Nerium oleander (Fam. Apocináceas). Esta planta es cultivada para fines
ornamentales, y es común verla en diferentes sitios de la ciudad de Medellín, con flores
rosadas o blancas. La variedad de flores blancas tiene reportados usos como antídoto,
antibacterial, antiepiléptico, anticancerígeno, cardiotónico y como depresor del Sistema
Nervioso Central (SNC). De las raíces, Huq y col., aislaron un cardenólido que además de
cardiotónico es antibacterial. Las hojas contienen varios cardenólidos con acción depresora
sobre el sisema nervioso central SNC.
Bulbo de escila
La droga la constituyen los bulbos de Drimia maritima (Fam. liliáceas). Contiene
bufanólidos como el escilareno-A el cual produce irritación gástrica la que a su vez induce
la secreción de los bronquiolos, por lo cual se usa como expectorante.
Estrofanto
Esta droga la constituyen las semillas desecadas de varias especies de plantas del género
Strophantus, y es usada como veneno de flechas por los nativos de algunas tribus de Africa.
Esta droga contiene el glicósido estrofantina.
Heléboro negro
Corresponde a Helleborus niger (Fam. Ranunculáceas).
Hojas de digital
La droga la constituyen las hojas desecadas de Digitalis purpurea (Fam. escrofulariácea).
Esta planta es cultivada en Europa, pero en Colombia es más bien escasa y se utiliza con
fines ornamentales. Se la conoce con el nombre vulgar de "campanitas" o "dedalera" y
crece silvestre en localidades como a orillas de la autopista Medellín-Bogotá en el sector de
Sasaima. Los principios activos son una mezcla de glicósidos cardiotónicos denominados
purpureaglicósidos, en los cuales la sapogenina es la digitoxigenina. Uno de estos es el
purpureaglicósido A.
La especie relacionada Digitalis lanata, también contiene glicósidos cardiotónicos, pero
con la característica particular de que uno de los carbohidratos ligados posee un grupo
hidroxilo acetilado. Esta especie contiene los denominados lanatósidos.
La especie D. lanata, aunque es originaria de Europa, también se encuentra en nuestro país,
específicamente en la sabana de Bogotá.
Estas drogas vegetales se comercian en Europa bajo nombres comerciales como
Digitalina, Cardinatina, Cristalloxina, Digoxina, etc.
Los carotenoides o tetraterpenoides son una clase de pigmentos terpenoides con 40 átomos
de carbono derivados biosintéticamente a partir de dos unidades de geranil-geranil-
pirofosfato, en su mayoría son solubles en solventes apolares y de coloraciones que oscilan
entre el amarillo (por ejemplo, el ß-caroteno) y el rojo (por ejemplo, el licopeno). El
nombre de carotenoides está relacionado con el hecho de que los primeros aislados fueron
de la zanahoria Daucus carota. La estructura general es la de una cadena hidrocarbonada
central, con dos anillos de seis carbonos en los extremos, con excepción del licopeno. La
Figura 3.30 muestra algunos ejemplos de los carotenoides más distribuidos en la naturaleza.
Figura 3.30. Ejemplos de carotenoides naturales ampliamente distribuidos.
Clasificación
Los carotenoides se clasifican en dos grupos: carotenos y xantofilas. Los carotenos solo
contienen carbono e hidrógeno (por ejemplo, el ß-caroteno, el licopeno, etc.), mientras que
las xantofilas contienen además oxígeno (por ejemplo, la luteína). Los apocarotenoides, son
carotenoides que no contienen los anillos de los extremos de la cadena, por ejemplo, la
crocetina.
Biogénesis
La biosíntesis de los carotenoides en las plantas y algas fotosintéticas está asociada a la ruta
del metileritritol-4-fosfato (sigla inglesa: MEP). Dos moléculas de geranil-geranil-
pirofosfato (sigla inglesa: GGPP) se condensan enzimáticamente para formar el intermedio
15-cis- fitoeno, con la participación de la enzima denominada fitoeno-sintasa. El fitoeno es
convertido luego en licopeno. El licopeno a su vez genera dos subrutas biosintéticas, una
con la participación de la licopeno-ε-ciclasa y la otra con la licopeno-β-ciclasa. En el primer
caso da origen a ⸹-caroteno, α-caroteno, zeinoxantina y luteina. En el segundo caso, se
originan γ-caroteno, β-caroteno, zeaxantina, astaxantina, anteraxantina, capsantina,
violaxantina, capsorubina y neoxantina.
Nomenclatura
Como es el caso con muchas sustancias naturales, en la medida que se han ido
descubriendo, se les ha dado nombres comunes, y generalmente relacionados con las
fuentes naturales desde donde se obtienen. Para propósitos del estudio de los carotenoides,
se cuenta con una nomenclatura semi sistemática. Esta tiene en cuenta los anillos y
porciones de los extremos de la estructura molecular, y las geometrías de los enlaces dobles
(E o Z). La figura 3.31, muestra los siete grupos terminales que se encuentran en los
carotenoides (44). De acuerdo con esto el β-caroteno, corresponde por sus extremos al β,β-
caroteno; el licopeno corresponde al ψ,ψ-caroteno (psi,psi-caroteno).
Kappa Fi Chi
Psi
Figura 3.31. Estructuras químicas de los siete grupos terminales presentes en carotenoides naturales
(43).
Extracción y aislamiento
Los carotenoides debido a la alta conjugación de enlaces dobles presentes en sus moléculas
se descomponen por efecto de la luz, la temperatura y el aire. La luz favorece reacciones
fotoquímicas que cambian la estructura original del carotenoide (por ejemplo, isomerismo
cis y trans) es un factor a considerar al momento de realizar su extracción. El calor también
favorece reacciones térmicas de degradación. El aire debido al oxígeno favorece la
oxigenación de los enlaces dobles a funciones epóxido, hidroxilos y peróxidos, entre otros.
Por estas razones la extracción de carotenoides se debe preferiblemente realizar en
condiciones de ausencia de luz, a temperatura ambiente o menor, y en ausencia de oxígeno
(por ejemplo, con una atmósfera artificial de nitrógeno). Además, se debe realizar lo más
rápido posible, y a partir de tejidos frescos, para evitar la degradación por la acción
conjunta de estos factores adversos.
Debido a que los carotenoides en su mayoría son de baja polaridad y carácter liposoluble, y
que se deben obtener de los tejidos vegetales frescos, en los cuales, el agua constituye más
de un 80%, es necesario secar la muestra antes de la extracción. El mejor método de secado
de muestras vegetales es la liofilización, la cual garantiza que no ocurren cambios químicos
en los compuestos durante el proceso de secado. Para muestras pequeñas, y cuando no se
cuenta con la liofilización, un procedimiento recomendable es deshidratar los tejidos con
etanol a ebullición seguido de filtración. El tejido deshidratado se puede entonces extraer
con un solvente apolar.
Si en el extracto existen carotenoides esterificados, estos se pueden hidrolizar disolviendo
el extracto en un volumen pequeño de KOH 60% alcohólico. Esta mezcla se deja en la
oscuridad durante la noche, con atmósfera de nitrógeno, a temperatura ambiente y con
agitación magnética, con lo cual los carotenoides son liberados. Si se desea un proceso más
rápido, es aconsejable la ebullición durante 5-10 minutos, acompañada de ultrasonido.
Las mezclas de carotenos y las xantofilas mono- y dihidroxiladas pueden separarse
agitando una solución en éter de petróleo con un volumen de metanol al 90%. Las
xantofilas dihidroxiladas quedan en la fase metanólica, las monohidroxiladas y los
carotenos quedan en la fase etérea. Repitiendo este proceso con la fase etérea se separan en
la fase metanólica las xantofilas monohidroxiladas, y en la fase etérea quedan los carotenos.
Las xantofilas separadas en las fases metanólicas pueden recuperarse extrayéndolas con
éter etílico.
Debido a que los extractos de carotenoides generalmente están impurificados por otras
sustancias como los esteroles, estos se pueden eliminar dejando el extracto concentrado en
solución de éter etílico, tapado y a -10°C durante la noche. De esta manera los esteroles se
precipitan y pueden ser retirados por centrifugación o filtración.
Actualmente se están estudiando métodos alternativos a estos procesos de extracción,
teniendo en cuenta especialmente que el proceso de extracción sea más rápido, más
eficiente, y menos costoso desde los puntos de vista económico y ambiental. En el caso de
los carotenoides de las microalgas marinas, se trabajan métodos que incluyen el uso de
electricidad para la desintegración de las células que contienen los carotenoides, como es el
caso de la extracción asistida con campos eléctricos pulsados, conocida por la sigla inglesa
PEF, la cual requiere de menores volúmenes de solventes orgánicos. También la extracción
asistida con microondas MAE, y la extracción asistida con ultrasonido UAE, que
disminuyen los tiempos de extracción; y la extracción con fluidos supercríticos SFE con
dióxido de carbono, que tiene uso no solo para propósitos analíticos sino a nivel industrial.
Una alternativa al uso de solventes orgánicos es usar mezclas de estos con otras sustancias
como por ejemplo los triglicéridos. Al mezclar los triglicéridos por ejemplo con el acetato
de etilo, se disminuye su viscosidad y se facilita su extracción.
Una vez obtenido el extracto o los extractos de carotenoides, estos se pueden separar y
analizar por cromatografía en capa fina, en papel o en columna. El método más usado es la
cromatografía en capa fina con varias clases de fases estacionarias que incluyen: óxido de
magnesio activado, sílica gel, hidróxido de calcio y fosfato de magnesio entre otros.
Para la separación y aislamiento cromatográfico con sílica gel algunos autores recomiendan
alcalinizar la sílica con KOH al 3% para prevenir la isomerización durante el desarrollo
cromatográfico. Además, como los carotenoides comienzan a descomponerse al secarse la
placa por la evaporación del eluente, recomiendan trabajar con atmósfera de un gas inerte.
Para proteger los colores contra la oxidación, las placas cromatográficas pueden rociarse
con una solución de aceite de parafina al 5% en éter de petróleo.
Más recientemente y gracias al avance de los métodos cromatográficos instrumentales es
posible el aislamiento rápido de carotenoides puros. En este sentido, la cromatografía
líquida de alta eficiencia (HPLC) es muy utilizada actualmente, debido a que se puede
trabajar a bajas temperaturas, en ausencia de luz y aire, y es muy sensible por los grupos
dienos conjugados abundantes en las estructuras de los pigmentos carotenoides. Aunque se
han utilizado columnas de fase normal, son más utilizadas las de fase reversa,
especialmente las de octadecilsilano (columnas C-18). La utilización de detectores como el
de arreglo de diodos DAD, y espectrómetros de masas; facilita el proceso de separación e
identificación de los carotenoides presentes en las mezclas de carotenoides presentes en las
plantas.
En la actualidad, el procedimiento de análisis e identificación de los carotenoides en
muestras biológicas se realiza en tres etapas principales. En la primera, se obtiene el
extracto crudo. Posteriormente, el extracto es sometido a extracción en un cartucho con una
fase sólida (de sílica gel para eliminar interferencias polares, o de octadecilsilano u
octilsilano,
para eliminar impurezas apolares, ó ambos). El extracto se recupera nuevamente por
elución con un solvente adecuado, y finalmente se somete a análisis y/o fraccionamiento
preparativo por CLAE. La identificación puede hacerse por comparación con los tiempos
de retención de carotenoides estándares, o en el caso preparativo los carotenoides aislados
se someten a análisis espectrales de masas, RMN, etc.
El desarrollo reciente de interfaces CLAE-Espectrometría de masas, y detectores como los
de arreglo de diodos, permiten obtener los correspondientes espectros de masas y UV-
visible, los cuales facilitan el proceso de identificación. A manera de ejemplo, un estudio
mediante HPLC-DAD-MS, en los cálices de Hibiscus sabdariffa permitió determinar el
contenido de los carotenoides más abundantes como son luteína y β-caroteno. La luteína
muestra máximos de absorción UV-Vis en 418, 444 y 471 nm. El β-caroteno, en 421, 451 y
476 nm. En el espectro de masas la luteína muestra ión pseudomolecular m/z 569 [M+H]+,
y el β-caroteno, muestra m/z 537 [M+H]+.
Como muestras de referencia pueden obtenerse ß-caroteno, canthaxantina y crocina (del
azafrán), luteína, violaxantina y neoxantina (de las hojas de cualquier planta superior),
licopeno (del tomate rojo o de salsa ó pasta de tomate comercial), y capsantina del
pimentón rojo.
Es importante anotar que existen métodos reportados de análisis de carotenoides en plasma
sanguíneo, a partir de muestras de solo 10 µl.
Ensayos de reconocimiento
Los carotenoides como se anotó anteriormente son en su mayoría pigmentos liposolubles de
colores amarillo, naranja y rojo. Por lo cual se les puede reconocer fácilmente en los
extractos vegetales con ayuda de la CCF. Al adicionarle ácido sulfúrico concentrado a las
manchas sobre la placa cromatográfica, o a una solución anhidra en un solvente como
cloroformo o diclorometano; los carotenoides toman coloraciones azulosas. Debido a la
presencia de varios enlaces dobles C=C conjugados, reaccionan también con el reactivo de
Liebermann-Burchard, usado para el reconocimiento de esteroides y/o triterpenoides, por lo
tanto debe tenerse en cuenta que los carotenoides son falsos positivos para esteroides y/o
triterpenoides, sin embargo la presencia de los carotenoides en una muestra vegetal se
reconoce por sus colores característicos (amarillo-naranja-rojo), mientras que la mayoría de
esteroides y triterpenoides conocidos hasta hoy son incoloros.
Características espectrales
Como se anotó anteriormente, aunque es relativamente fácil identificar la mayoría de
carotenoides por comparación de muestras y estándares mediante la CCF y la CLAE,
cuando
se tienen carotenoides que no es posible identificar por tales métodos, es necesario recurrir
a los métodos espectrales como UV-visible, IR, EM y RMN.
El espectro visible de los carotenoides es bastante característico en el rango de 350 a 550
nm. Se observa un máximo alrededor de 450 nm y generalmente se aprecian dos máximos u
hombros a cada lado. La Tabla 3.6 presenta los datos de los espectros visible de algunos
carotenoides, en n-hexano y en cloroformo. Sin embargo, recientemente se ha comenzado a
investigar la relación que existe entre la geometría E/Z de los carotenoides y una banda de
absorción que se observa entre 265 y 300 nm, a la que se denomina banda uv lejana.
Tabla 3.6. Máximos de absorción del espectro visible y datos de espectrometría de masas
de varios carotenoides naturales.
n-Hexano ó Cloroformo
éter de p.
-Caroteno 437, 462, 494 447, 475, 508 537 (M+H+), 467 [M-
69]+, 444 [M-92]+
Licopeno 446, 472, 505 456, 485, 520 536 (M+), 537
(M+H+) APCIMS
Luteína 420, 447, 477 428, 456, 487 568 (M+), 569
[M+H+],
551 (M+H-H2O)+,
533,
495, 477, 463, 459
Violaxantina 443, 472 424, 452, 482 601 [M+H+], 583, 565,
509, 491, 221
Zeaxantina 423, 451, 483 429, 462, 494 569.4 (M+H+), 551.4
(M-H2O+H+),
PIGMENTO MÁXIMOS DE ABSORCIÓN (nm) m/z
n-Hexano ó Cloroformo
éter de p.
Neoxantina 415, 437, 466 421, 447, 477 601 ([M+H]+, 583
[M-
H2O + H]+, 547,
509,
221
13-cis-neoxantina - 326, 418, 443, 471 583 [M H-18]+, 565,
509 [M+H-92]+,
491
[M+H-18-92]+, 221
Rubixantina 432, 462, 494 439, 474, 509 -
Alcaloides esteroidales
Diversas plantas de familias como las solanáceas, especialmente las del género Solanum,
son conocidas como fuentes de sustancias estructuralmente muy relacionadas con las
saponinas esteroides y son los alcaloides esteroidales, por ejemplo, la tomatidina, presente
en las hojas del tomate Lycopersicon esculentum (Figura 3.32).
Estas sustancias poseen características tanto de esteroides como de alcaloides, este es el
caso de la solasodina presente en frutos de la especie colombiana Solanum marginatum
(figura 3.32).
Para su análisis cromatográfico existen métodos reportados por HPLC, como por ejemplo
para los alcaloides de la papa Solanum tuberosum.
En cuanto a sus características espectrales, las agliconas con el núcleo espirosolano se
reconocen en sus espectros de masas de impacto electrónico por los fragmentos m/z 114 y
138, los cuales se originan por el mismo mecanismo de los iones m/z 115 y 139 de las
sapogeninas esteroides, solo que en lugar del átomo de oxígeno del anillo pirano, los
alcaloides tipo espirosolano, contienen un átomo de nitrógeno (ver figura 3.17).
Los alcaloides con núcleo 3-aminoespirosolano también se reconocen en sus espectros de
masas por los fragmentos m/z 56, 114 y 138.
En el espectro de RMN-1H (determinado generalmente en metanol perdeuterado) el H-3
resuena alrededor de 3.5 ppm como un multiplete, si existe un sustituyente 3-O-glicosilo, o
resuena alrededor de 2.6 ppm si existe un grupo 3-amino. El protón H-16 se observa como
un multiplete alrededor de 4.3 ppm; y los protones H-26 resuenan en señales separadas
alrededor de 2.6 ppm. En el espectro de RMN-13C el C-3 resuena alrededor de 80 ppm si es
un compuesto 3-Oglicosilado, o alrededor de 52 ppm si es un compuesto 3-aminado. El C-
16 resuena alrededor de 79 ppm, el C-22 alrededor de 100 ppm, y el C-26 alrededor de 56
ppm.
N
HO
Solasodina (tipo solasodano)
HO
Tomatidina
NH
Los alcaloides esteroidales presentan diversas actividades biológicas que incluyen su acción
antimicrobiana, antifúngica y antimalárica. También se les ha encontrado potencial contra
el cáncer. pero también se reporta su neurotoxicidad.
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Capítulo 4
Alcaloides
En los organismos vivos se encuentran además de los metabolitos primarios nitrogenados,
como las proteínas y los aminoácidos, muchas sustancias secundarias nitrogenadas, entre
las cuales son de interés farmacéutico los alcaloides, por sus notables actividades
biológicas, particularmente sobre el sistema nervioso.
Se conocen más de 25.000 alcaloides naturales, que comprenden desde estructuras
simples como la coniina, un alcaloide de la cicuta, hasta estructuras complejas como la
neurotoxina batracio toxina de la piel de una rana colombiana (Figura 4.1).
OR
H
HO
H
N
NH O O
HO
H
Coniina Batraciotoxina
Figura 4.1. Estructuras químicas de dos alcaloides naturales: coniina y batraciotoxina.
El interés por estos compuestos es debido a que desde tiempos antiguos han sido utilizados
para la caza, la guerra, como euforizantes, psicodélicos, estimulantes, o como remedios
contra diferentes enfermedades, además por sus propiedades farmacológicas y tóxicas
comprobadas son muy importantes para el conocimiento del químico farmacéutico.
A continuación, se profundizará sobre aspectos relacionados con la biogénesis, los
métodos de análisis y la identificación o caracterización, como una aproximación al
conocimiento químico de este amplio grupo de sustancias naturales.
Definición
Los alcaloides naturales son sustancias de origen biológico que además de carbono,
hidrógeno, y oxígeno; contienen nitrógeno. Como definición, puede afirmarse que:
Los alcaloides son sustancias:
• De carácter alcalino (como su nombre lo indica)
• Con por lo menos un átomo de N en un heterociclo
• Que presentan actividad biológica
• Que se encuentran especialmente en las plantas superiores
Un ejemplo de estas sustancias es la cocaína (figura 4.2). Existen sin embargo sustancias
nitrogenadas naturales que no cumplen alguna de estas cuatro características, como por
ejemplo la piperina, presente en las semillas de la pimienta negra, que tiene carácter
neutro, y la mezcalina que contiene nitrógeno, pero en una cadena (no en un anillo); sin
embargo, ambas sustancias tienen actividad biológica.
O O
N
N
O
O
O O
C ocaína Piperina
O NH2
O
Mescalina
Figura 4.2. Estructuras químicas de alcaloides: cocaína, piperina y mescalina.
La Figura 4.3. muestra las estructuras químicas de algunos alcaloides naturales presentes
en drogas vegetales.
Figura 4.3. Estructuras químicas de varios alcaloides naturales.
Función biológica
Existen evidencias experimentales obtenidas a través de diferentes estudios, que sugieren
que los alcaloides con producidos por muchas plantas, para defenderse de diferentes
plagas y depredadores, es decir como mecanismo de defensa vegetal. Esto explica los
hallazgos de que muchas de estas sustancias naturales presentan actividades
antibacteriana, antimicótica, paralizante, etc.
Otras hipótesis sugieren que algunos alcaloides naturales son productos de desecho del
metabolismo vegetal, o que son reservas químicas de nitrógeno para los procesos de
crecimiento y desarrollo de las plantas que los producen.
Clasificación
Debido a la gran cantidad de alcaloides que se han aislado e identificado de fuentes
naturales, se hizo necesario clasificarlos para su estudio. Existen fundamentalmente dos
sistemas de clasificación basados en la fuente biológica o en aspectos estructurales
químicos.
La clasificación biológica, los clasifica por el género y familia especialmente, y así
entonces se habla de los alcaloides de las amarilidáceas, los alcaloides del peyote, los
alcaloides del opio, los alcaloides del tabaco, etc.
La clasificación química toma en cuenta la presencia de ciertos núcleos químicos, por
ejemplo:
• Alcaloides pirrolizidínicos (p. ej. europina)
• Alcaloides pirrolidínicos (p. ej. higrina)
• Alcaloides piridínicos (p. ej. nicotina)
• Alcaloides piperidínicos (p. ej. conhidrina)
• Alcaloides tropánicos (p. ej. cocaína)
• Alcaloides indólicos (p. ej. gramína)
• Alcaloides β-carbolínicos (p. ej. harmina), etc.
Otra clasificación muy útil desde el punto de vista bioquímico clasifica los alcaloides
de acuerdo a su aminoácido precursor biosintético:
1. Alcaloides alifáticos
• derivados de la ornitina (pirrolidinas, tropánicos, pirrolizidínicos)
• derivados de la lisina (piperidinas, quinolizidínicos)
2. Alcaloides aromáticos
• derivados del ácido nicotínico (piridinas)
• derivados de la fenilalanina y la tirosina (isoquinoleinas)
• derivados del triptófano (indólicos, quinoleinas)
• derivados del ácido antranílico (quinoleinas)
• derivados de la histidina (imidazoles)
3. Alcaloides de origen diverso
• alcaloides terpénicos y esteroidales
• alcaloides diversos (purinas, macrociclos, etc.)
Otra clasificación, que es útil para fines experimentales, clasifica los alcaloides dentro de
cuatro grupos: alcaloides amínicos, alcaloides fenólicos, alcaloides de amonio cuaternario y
alcaloides N-óxido.
Los alcaloides amínicos, son aquellos que contienen nitrógeno en grupos funcionales
amina primaria, secundaria o terciaria, por lo que son de carácter alcalino, son solubles en
solventes orgánicos de mediana polaridad, son insolubles en agua, y forman sales con
ácidos minerales.
Un ejemplo es la anabasina (Figura 2).
Los alcaloides fenólicos, como su nombre lo indica, son aquellos que contienen en su
estructura uno o varios hidroxilos fenólicos. Estos alcaloides son generalmente solubles
en soluciones acuosas de bases minerales fuertes, pero insolubles en soluciones acuosas
de bases débiles. Además, son solubles en solventes orgánicos de mediana polaridad,
insolubles en agua, y forman sales con ácidos minerales diluidos en agua. Son ejemplos la
tiramina, la dopamina, laurifolina, etc.
Los alcaloides de amonio cuaternario contienen un átomo de nitrógeno tetra sustituido
(funcionalidad de amonio cuaternario), siendo por lo tanto sustancias iónicas. Por lo
anterior, estos son en soluciones acuosas ácidas, básicas y neutras, ya que permanecen
ionizadas en todo el rango de pH. Son insolubles en la mayoría de solventes orgánicos. Un
ejemplo es el hidróxido de berberina.
Algunos autores clasifican los alcaloides naturales de acuerdo con su precursor biosintético,
por ejemplo: alcaloides derivados de fenilalanina, alcaloides derivados de tirosina,
alcaloides derivados de triptófano, alcaloides derivados de ácido glutámico, alcaloides
derivados de ácidos nucleicos, alcaloides derivados de terpenoides, alcaloides derivados de
policétidos, etc.
Finalmente, es importante mencionar que varios autores, dividen los alcaloides en cuatro
grandes grupos:
• Alcaloides verdaderos
• Protoalcaloides
• Pseudoalcaloides
• Alcaloides imperfectos
Los alcaloides verdaderos cumplen estrictamente con las características de la definición de
alcaloide: son formados a partir de aminoácidos, tienen siempre un nitrógeno intracíclico,
son de carácter básico y existen en la naturaleza normalmente en estado de sal.
Los protoalcaloides son aminas simples con nitrógeno extracíclico, de carácter básico y
son productos del metabolismo de los aminoácidos.
Los pseudoalcaloides presentan algunas de las características de la definición de alcaloide,
pero no son derivados de aminoácidos.
Los alcaloides imperfectos son derivados de bases púricas, no precipitan con los reactivos
específicos para alcaloides.
No se consideran alcaloides los aminoácidos, las betalaínas, los péptidos, los amino
azúcares, las vitaminas nitrogenadas, las porfirinas, algunas bases como la tiamina
ampliamente distribuida en los seres vivos y las alquilaminas de bajo peso molecular.
Ensayos de reconocimiento
Los alcaloides se pueden reconocer rápidamente en el laboratorio, mediante ensayos de
precipitación y cromatografía en capa fina.
Los ensayos de precipitación se basan en la capacidad de los átomos de nitrógeno de
muchos alcaloides, para unirse a metales pesados, formando sólidos insolubles en agua
acidificada. Por esto se les denomina ensayos de precipitación. La figura 4.4. muestra la
probable reacción que ocurre entre los alcaloides y los metales pesados, por formación de
complejos insolubles.
Los ensayos de precipitación han sido muy utilizados en la búsqueda y el hallazgo de
muchos de los alcaloides naturales conocidos. Existen muchos reactivos, dentro de los
cuales se destacan los reactivos de Dragendorff, de Mayer, de Valser, el reineckato de
amonio, etc. Es muy importante tener en cuenta que, por contener metales pesados, este
tipo de ensayos deben usarse de manera racional y adecuadamente, por los efectos tóxicos
para la salud y el medio ambiente de estos metales pesados; por esto lo recomendable es
utilizar solo uno de ellos como el reactivo de Wagner (solución de yodo y yoduro de
potasio), de acuerdo a las necesidades de análisis.
Figura 4.4. Formación de los complejos insolubles por reacción de los alcaloides con los metales
pesados utilizados en los ensayos de precipitación.
Extracción
Por la propiedad alcalina que presentan la mayoría de alcaloides, debido al nitrógeno
amínico; los alcaloides pueden formar fácilmente sales con ácidos minerales como el
ácido clorhídrico, el ácido sulfúrico, etc. Estas sales son solubles en agua e insolubles en
solventes orgánicos de mediana polaridad; mientras que las formas básicas (alcaloides
base), son solubles en solventes de mediana polaridad, e insolubles en agua. Esta
característica es muy útil en los procesos de extracción, a partir de muestras biológicas.
Antes de la extracción, generalmente la muestra vegetal se seca y se muele, y luego se
somete a un proceso de eliminación de las sustancias lipídicas (desengrase), las cuales
interfieren la formación de sales con soluciones acuosas de ácidos minerales. Para estos
procesos iniciales de extracción, también se utilizan los cartuchos de extracción en fase
sólida, los cuales contienen diferentes materiales porosos que permiten una extracción
más selectiva de los compuestos de interés.
Figura 4.5. Diagrama de flujo que resume el proceso de extracción de alcaloides naturales con
soluciones acuosas de ácidos minerales diluidos.
Extracción con bases
La muestra vegetal desengrasada, se somete a agitación con soluciones acuosas de bases
como el amoniaco o NaOH. De esta manera, los alcaloides que se encuentren
naturalmente en forma de sales son convertidos a sus formas básicas, por lo que este
método de extracción es más ventajoso para cuando se desea hacer análisis de control de
calidad, especialmente en muestras vegetales con bajo contenido de alcaloides.
Una vez basificado el material vegetal y liberados lo alcaloides del mismo, se puede
proceder a acidificar la mezcla para formar las sales solubles en agua, filtrar, y la fase
acuosa ácida trabajarla como en el método de extracción con ácidos. La figura 4.6 resume
este método de extracción.
Figura 4.6. Diagrama de flujo simplificado para la extracción de alcaloides naturales con soluciones
acuosas de bases minerales diluidas.
Biogénesis
El origen biosintético de muchos alcaloides ha sido establecido gracias al uso de
elementos marcados como el carbono-13, el cual se puede seguir por RMN de carbono-
13. Sin embargo, algunas etapas intermedias son hipotéticas, por lo que hablaremos de
ahora en delante de biogénesis.
Los alcaloides naturales derivan principalmente de aminoácidos como ornitina, lisina,
fenilalanina, tirosina, triptófano, ácido antranílico, ácido nicotínico; y en menos
proporción asparagina, prolina y ácido glutámico. Fenilalanina, tirosina y ácido
antranílico, derivan del ácido shikímico; mientras que el triptófano deriva del ácido
antranílico, es decir también de ácido shikímico.
Las figuras 4.7 y 4.8 muestran esquemas simplificados de la biogénesis de alcaloides
aromáticos tipo BIQ bencilisoquinolinas, BBIQ bisbencilisoquinolinas, aporfinas, morfina
(opio) y relacionados, etc.
Otros alcaloides aromáticos, como alcaloides tipo quinolina, indólicos, tipo harmano, se
originan según el esquema de la figura 4.9.
COOH
COOH
NH2
R = H, Fenilalanina
R = OH, Tirosina
Figura 4.7. Esquema biogenético que explica el origen de diferentes clases de alcaloides a
partir del ácido shikímico y los aminoácidos aromáticos fenil alanina y tirosina.
Figura 4.8. Esquema de la biogénesis del núcleo característico de alcaloides tipo bencilisoquinolina
BIQ, a partir de ácido shikímico y los aminoácidos aromáticos fenilalanina (R = H) y tirosina (R =
OH).
COOH
HO NH2 NH
OH
Acido shikímico Acido antranílico Triptófano
Quinolinas Acridinas
Figura 4.9. Esquema biogenético general que explica el origen de alcaloides tipo quinolina,
acridina, indólicos, harmano, etc.; a partir de ácido shikímico, y con intermedios como los
aminoácidos triptófano y ácido antranílico.
Por otro lado, a partir de los aminoácidos no aromáticos ornitina (figura 4.10) y lisina
(figura 4.11), se originan diversos alcaloides que tienen los anillos N-metilpirrolidina
(anillo de 5) y piperidina (anillo de 6), como son los alcaloides tipo pirrolidina,
pirrolozidina, del tropano, esparteína y lupina, del licopodio, entre otros (18).
Figura 4.10. Esquema biogenético que explica la formación del anillo N-metilpirrolidina,
característico de diferentes alcaloides naturales, a partir del aminoácido ornitina.
Figura 4.11. Esquema biogenético que explica la formación del anillo N-metilpiperidina,
característico de diferentes alcaloides naturales, a partir del aminoácido lisina.
Referencias bibliográficas
Definición
Se definen generalmente como aceites esenciales las fracciones líquidas, generalmente
destilables por arrastre con vapor de agua, que contienen las sustancias responsables del
aroma de las plantas y que son importantes en la industria cosmética (perfumes y
aromatizantes), de alimentos (condimentos y saborizantes) y farmacéutica (saborizantes,
antioxidantes, aromaterapia).
Los aceites esenciales son mezclas complejas de hasta más de 50 componentes que
incluyen: Compuestos alifáticos de bajo peso molecular (alcanos, alcoholes, aldehídos,
cetonas, ésteres y ácidos), monoterpenos, sesquiterpenos y fenilpropanos.
Clasificación
Los aceites esenciales se clasifican con base en diferentes criterios: consistencia, origen y
naturaleza química de los componentes mayoritarios.
De acuerdo con su consistencia los aceites esenciales se clasifican en esencias fluidas,
bálsamos y oleorresinas. Las esencias fluidas son líquidos a temperatura ambiente. Los
bálsamos son de consistencia más espesa, y propensos a sufrir reacciones de
polimerización,
son ejemplos el bálsamo de copaiba, el bálsamo del Perú, Benjuí, bálsamo de Tolú,
estoraque, etc. Las oleorresinas tienen el aroma de las plantas en forma concentrada y son
típicamente líquidos muy viscosos o sustancias semisólidas (caucho, gutapercha, chicle,
balata, oleorresina de paprika, de pimienta negra, de clavero, etc.).
De acuerdo a su origen los aceites esenciales se clasifican como naturales, artificiales y
sintéticas. Los naturales se obtienen directamente de la planta y no sufren modificaciones
físicas ni químicas posteriores, debido a su rendimiento tan bajo son muy costosas. Los
artificiales o sintéticos se obtienen a través de procesos de enriquecimiento de la misma
esencia con uno o varios de sus componentes, por ejemplo, la mezcla de esencias de rosa,
geranio y jazmín enriquecida con linalool, o la esencia de anís enriquecida con anetol. Estos
son más económicos y por lo tanto son mucho más utilizados como aromatizantes y
saborizantes (esencias de vainilla, limón, etc.).
Desde el punto de vista químico y a pesar de su composición compleja con diferentes tipos
de sustancias, los aceites esenciales se pueden clasificar de acuerdo con el tipo se sustancias
que son los componentes mayoritarios. Según esto los aceites esenciales ricos en
monoterpenos se denominan aceites esenciales monoterpenoides (p.ej. hierbabuena,
albahaca, salvia, etc.). Los ricos en sesquiterpenos son los aceites esenciales
sesquiterpenoides (p.ej. copaiba, pino, junípero, etc.). Los ricos en fenilpropanos son los
aceites esenciales fenilpropanoides (p.ej. clavo, canela, anís, etc.).
Aunque esta clasificación es muy general nos resultará útil para propósitos de estudiar
algunos aspectos fitoquímicos de los monoterpenos, los sesquiterpenos y los fenilpropanos,
sin embargo, existen clasificaciones más complejas como la de González Patiño que tienen
en cuenta otros aspectos químicos.
Monoterpenos y sesquiterpenos
Biogénesis de terpenos
Hasta hace algunos años se aceptaba que los monoterpenos y en general todos los
compuestos terpenoides naturales se biosintetizaban por la ruta de la acetilcoenzima a
través de un intermedio común que es el ácido mevalónico (sigla inglesa MVA). Sin
embargo, recientemente se tienen evidencias que algunos terpenoides no se originan solo
por esta ruta, sino también por dos rutas alternas, una ruta que se denomina la ruta
modificada del ácido mevalónico y una ruta alterna que puede involucrar piruvato,
gliceraldehído-3-fosfato y un intermedio de 5 átomos de carbono: el metileritritolfosfato
(sigla inglesa MEP). La figura
5.2. resume dos de las tres rutas conocidas ahora, y muestra como la ruta clásica del ácido
mevalónico ocurre en el citosol de las células vegetales y da origen a terpenoides C 15n (n =
impar), mientras que la ruta del metileritritol fosfato ocurre en los plastidios y da origen
especialmente a terpenoides C10n.
O
COOH
Acido pirúvico
O OH
HO
OP
SCoA
OH
AcetilCoA
Metileritritol fosfato
(MEP) (Plastidios)
OH
HO Terpenoides C10n
OP
O
Mevalonil fosfato
(Citosol) Terpenoides C15n (n impar)
Figura 5.2. Esquema biogenético para dos rutas que conducen a terpenoides.
O
O
CH2 SCoA CoAS
H2O
OH OH O OH O
Red.
OH
OH
O O O
H
HO
HO HO
Acido mevalónico
Acido meváldico
(MVA)
F
i
g
u
r
a
5
.
3
.
B
i
o
g
é
n
e
s
i
s
d
e
l
á
c
i
d
o
m
e
v
a
l
ó
n
i
c
o
.
OH
HO P OPP
OH OH OH
2ATP O
2ADP
OH OPP OPP
O O O
HO HO O
Isom.
OPP OPP
Figura 5.4. Biogénesis de las unidades isoprénicas básicas: Isopentenilpirofosfato (IPP) y ,-
Dimetilalilpirofosfato (DMAPP).
GeranilPP
DMAPP
H
Monoterpenos
OPP
OPP
FarnesilPP Sesquiterpenos
OPP
OPP
Diterpenos
Geranil-GeranilPP
IPP
Sesterterpenos
Geranil-FarnesilPP
CH2OH
CH2OH CHO
O
OH O
Car-3-eno
Alcohol
Fenchona Thuyona
Fenchílico
O
O H
O O
O
alfa-Pineno Alcanfor
gama-Thuyaplicina Nepetalactona
OH
Farnesol
Nerolidol gama-Bisaboleno
OH
COOH
HO O
HO
OCH3
Alcohol hidrocinamílico Alcohol coniferílico Cinamaldehído
O
HO
C H3O HO
OCH3
OCH
Anís-cetona 3
Isoeugenol
Eugenol
C H3O
O O
O O O
O
Safrol Isosafrol
Isomiristicina
C H 3O
OH CH3O
O G luO
O OH
O OCH3
O
Miristicina
Coniferina Apiol
(glicósido)
HO
HO C H3O
OH
Anetol
Elemicina
Espectroscopia infrarrojo
El espectro infrarrojo permite detectar la presencia de grupos hidroxilo, carbonilo, anillos
aromáticos, enlaces dobles C=C cis y trans, etc. Para determinar el espectro basta con
colocar una gota del componente en una celda de NaCl. Por ejemplo, en el espectro
infrarrojo del 3- p-menten-7-al presente en el aceite de comino. La banda intensa en 1725
cm-1 indica un grupo carbonilo no conjugado. La banda a 2710 cm-1 se asigna a la tensión
C-H de un protón aldehídico. El doblete centrado en 1375 cm-1 indica un grupo isopropilo,
y la banda de intensidad media en 817 cm-1 indica un enlace doble trisustituído.
Para el caso de los fenilpropanos, y por tratarse de sustancias con anillo aromático, sus
espectros infrarrojos muestran las señales características de estos compuestos y dan
información sobre el tipo de sustitución del anillo aromático además de los grupos
funcionales presentes en la molécula. Por ejemplo, el espectro IR del eugenol muestra entre
otras bandas en 3500 (ancha) debida al grupo hidroxilo, 1510 característica de aromáticos,
y tres bandas en 990, 920 y 938 cm-1 características de un grupo vinilo mono sustituido. El
espectro IR del cinamaldehído muestra bandas en 3330 (débil), 3050, 2820, 2750, 1660
(intensa, debida al grupo carbonilo), 975, 740 y 695 cm-1 entre otras.
Espectroscopia ultravioleta
El espectro UV de los monoterpenos y sesquiterpenos permite el reconocimiento de grupos
funcionales y grupos cromóforos. Por ejemplo, el limoneno presenta un máximo de
absorción en 262 nm.
A diferencia de la mayoría de mono- y sesquiterpenos, los fenilpropanos absorben luz UV
con máximos alrededor de 254 nm dependiendo de los grupos cromóforos presentes en la
molécula. Por ejemplo, el isoeugenol muestra máximos en 260 (15850) y 305 (7000), el
safrol en 286 nm, la miristicina en 276 nm, el isosafrol en 264 nm, el ácido trans-cinámico
en 273 nm y el ácido cis-cinámico en 264 nm.
GERANIOL LINALOOL
25.4
OH 145.9 26.1 131.0
125.0 39.7 124.3 39.8 124.7
25.1
112.9 30.8 124.4
FARNESOL
MIRCENO
17.4 24.4
17.4 17.0
132.9 27.2 162.1 190.0
132.2 26.0 162.1
128.7 CHO
26.3 123.1 32.5 25.3 123.5 40.5 127.5
CHO
189.4
cis-CITRAL trans-CITRAL
23.1 23.8
22.3
21.0
16.0 26.7 27.1 20.5 108.4
MENTOL TERPINEOL
LIMONENO
15.4 22.2
19.5
20.0
135.2 131.5
1 43.8 O 119.6 2 46.6
9.7
197.7 8.5
57.0
116.5 24.8 30.1
O
31.3 43.1 43.2214.7
42.7 140.9
147.2 34.0 43.2
27.4
110.3 20.6
20.2 20.6
CARVONA
TERPINENO ALCANFOR
132.6
120.6 30.4
26.8 26.8 O 27.0 27.0 O
31.0 27.9 17.2 140.7
132.7 196.0 195.5
39.2 32.4 32.6
152.9 26.4 130.2 28.7 54.3 38.4
147.5 27.5 134.7 130.7 25.2
23.2 132.3 17.5 133.4
107.0 124.1 25.2 31.5 19.7
34.5 122.5 31.8
beta-BISABOLENO
alfa-IONONA beta-IONONA
22.8 21.8
alfa-PINENO beta-PINENO
23.8 23.3
23.4
133.1 133.5
133.2 .83
120. 8 .830
30 .9 120 .6 120 .62 0.9
.6 .727
28 41.2
30 149.7 41.0
41.2 .0 30
.9
30 149.3
8.0
149.3
OH
m/z 135 (pico base)
p-cimen-8-ol
M = 150
m/z 91
Figura 5.13. Esquema de fragmentación en espectrometría de masas de impacto electrónico del p-
cimen-8-ol.
Ejemplos de drogas vegetales que contienen aceites esenciales
Alcanfor
El alcanfor es obtenido de la corteza de Cinnamomum camphora L., nativo de Asia. Se ha
usado ampliamente como analgésico, antiséptico, antipruritico, estimulante, abortifaciente,
y como supresor de lactancia. Se usa como ingrediente activo en ungüentos e inhalantes
para tratar resfriados y dolor muscular. Su aplicación en la piel produce sensación de calor.
Se reporta su toxicidad por ingestión accidental o mala administración. Se absorbe
rápidamente a nivel intestinal y produce irritación, dolor abdominal, náuseas, y
convulsiones.
Albahaca
El aceite de albahaca se obtiene de Ocimum basilicum y ha sido utilizado en la medicina
tradicional como un estimulante del sistema nervioso central y para el tratamiento de
desórdenes nerviosos menores, dolor de cabeza y dolores musculares. Es de gran valor en
estados de ansiedad, ya que se dice que clarifica y fortalece la mente.
Es un repelente de insectos y suaviza las picaduras. Tiene actividad antimicrobiana a bajas
diluciones. En ensayos realizados en la India mostró buenos resultados en el tratamiento
antibacterial del acné. También se usa como enjuague bucal contra el mal aliento. En las
zonas rurales africanas se usa una infusión de las hojas para tratar las quemaduras causadas
por el sol.
Las plantas del género Ocimum, presentan potencial para el tratamiento de hiperglicemias,
posiblemente debido a la presencia del eugenol, inclusive se ha incorporado extractos
acuosos de estas plantas en nanopartículas de plata, con resultados interesantes de potencial
anti diabetes. El aceite de la especie Ocimum gratissimum, muestra también propiedades
anti leishmaniasis.
Anís
Las semillas de Pimpinella anisum L. contienen aceite esencial cuyo componente principal
es el trans-anetol y presenta actividad insecticida.
A nivel farmacéutico, la semilla de anís se usa como resaltador del sabor de preparados
medicinales. La Farmacopea Europea determina que la droga debe contener 2% de aceite
esencial, el cual contiene de 75-95% de trans-anetol. El aceite contiene además cantidades
menores de metilchavicol, p-anisaldehído, γ-himacaleno, α-zingibereno, trans-2-
metilbutirato de pseudoisoeugenol y 2-metilbutirato de epoxipseudoeugenilo.
Se tienen reportes del aceite esencial como carminativo, antiséptico, diurético, y digestivo.
En la medicina popular se usa para el insomnio y la constipación. El aceite incrementa la
resistencia pulmonar en eventos de congestión broncopulmonar. También presenta efectos
antifúngicos y antibacteriales. El trans-anetol incrementa la movilidad intestinal. El extracto
acuoso de semillas de anís también muestra actividad citotóxica contra células de
melanoma.
Bergamota
Citrus bergamia, es una fruta típica que abunda en la región de Calabria (Italia). Es
conocida como una fuente importante de flavonoides y limonoides. Se ha reportado el uso
potencial del jugo de la fruta en la terapia contra la artritis, y para dislipidemias.
Buchú
Corresponde al aceite obtenido de Agathosma betulina que tiene no solo una fragancia
agradable, sino que es de importancia cosmética para la piel. Se han realizado diferentes
estudios que muestran que los extractos y el aceite esencial presentan buena actividad
antimicrobiana contra varios patógenos como Staphylococcus aureus, Bacillus cereus,
Klebsiella pneumoniae, Enterococcus faecalis y Candida albicans. También se reporta que
presenta buena actividad antioxidante y propiedades antiinflamatorias. Por cromatografía en
capa fina de alta resolución se puede diferenciar esta especie de otras del mismo género.
Canela
La droga corresponde a la corteza desecada de Cinnamomum zeylanicum, Laurácea. El
aceite esencial contiene cinamaldehído y eugenol entre otros. El aceite esencial de la
especie relacionada Cinnamomum cassia, junto con el de timo han mostrado potencial uso
contra el hongo Aspergillus flavus, el cual es conocido por producir sustancias
cancerígenas.
Cardamomo
Corresponde al aceite obtenido de las semillas de Elettaria cardamomum, el cual ayuda a la
digestión y estimula el apetito. Se le atribuyen propiedades afrodisíacas y que ayuda a
aclarar la mente de ruido y confusión. El extracto metanólico de las semillas de esta planta
presenta potencial como ansiolítico.
Cidrón
Corresponde a Aloysia citriodora (sinónimo Lippia citriodora), además del uso como
aromatizante de la esencia de esta planta se ha evaluado su uso como insecticida, junto a
otros aceites esenciales.
Cilantro
Corresponde a Coriandrum sativum L. Las hojas y tallos de esta planta han mostrado
actividad larvicida sobre Aedes aegypti. Se reporta también que las hojas frescas pueden ser
útiles para el manejo de la enfermedad de Alzheimer, para disminuir los niveles de
colesterol en sangre y su actividad anticolinesterasa. Además de su uso como aromatizante,
las hojas y tallos presentan propiedades antioxidantes, antibacterianas y antifúngicas.
Clavo
El clavo Syzigium aromaticum L. tiene un gran potencial como preservativo de alimentos
especialmente contra bacterias patogénicas. El clavo comercial son las flores secas, que se
usan ampliamente como condimento o especial en muchos alimentos y aplicaciones
farmacéuticas. El aceite esencial se usa para el cuidado dental. Es activo contra bacterias
asociadas a las caries dentales y la enfermedad periodontal. También es activo contra
bacterias como Listeria monocytogenes, Escherichia coli, Salmonella enterica, Salmonella
enteritidis, Campylobacter jejuni, y Staphylococcus aureus. También se reportan estudios
sobre actividades antifúngica, antialérgica, anti cáncer, anti mutagénica y contra
Tripanosoma cruzi.
Comino
Corresponde a las semillas de Cuminum cyminum L., de la familia de las umbelíferas. Su
aceite esencial contiene -pineno, ß-pineno, mirceno, -felandreno, -terpineno, limoneno,
ß- felandreno, 1,8-cineol, p-cimeno, -terpineno, 3-p-menten-7-al, mirtenal, cuminaldehído,
felandral, 1,3-p-mentadien-7-al, cis-sabineno hidrato, trans-sabineno hidrato, -terpineol,
alcohol cuminílico, ß-cariofileno, ß-farneseno y ß-bisaboleno.
Se ha reportado que el cuminaldehído tiene efectos protectores sobre la enfermedad
neurodegenerativa de Parkinson. También se reportan estudios in vivo e in vitro de la
actividad anticancerígena potencial del aceite esencial. La actividad antioxidante está
relcionada con los flavonoides presentes en la planta. También se mencionan propiedades
anti diabéticas, anti hipertensivas, inmuno modulatorias y anti candidiasis del aceite.
Hierba de limón
Corresponde a Cymbopogum citratus. Se han reportado propiedades antimicrobianas y anti
inflamatorias, por lo cual se elaboran productos para uso tópico en el tratamiento de
lesiones de la piel y de las mucosas. El extracto de la planta entera, presenta potencial
actividad antimalárica.
Eucalipto
En las diferentes especies del género Eucalyptus, el aceite esencial contiene como
componente mayoritario al 1,8-cineol. Este compuesto presenta propiedades interesantes
como por ejemplo protección contra el virus de influenza. También se usa como remedio
analgésico y antipirético contra la gripa, el resfriado y la congestión nasal.
Jengibre
Corresponde a Zingiber officinalis. El rizoma de esta planta es usado ampliamente como
condimento. El aceite esencial contiene sesquiterpenos, compuestos carbonílicos, alcoholes,
monoterpenos, los cuales contribuyen al aroma y sabor del jengibre. El extracto de jengibre
también se utiliza ampliamente como medicina herbaria, con propiedades anti inflamatorias,
anti cancerosas, y antimicrobianas. El efecto saludable del jengibre se atribuye a la
presencia de metabolitos secundarios que reducen los niveles de colesterol en el plasma
sanguíneo, en el hígado, y en la placa ateroesclerótica de la aorta. Además, los compuestos
tales como los gingeroles, shogaoles, paradoles y la zingerona, presentan actividad
antioxidante.
Lavanda
El aceite esencial de Lavandula angustifolia contiene 1,8-cineol, cis-β-ocimeno, linalool,
acetato de 1-octen-3-ilo, alcanfor, linalool, acetato de linalilo y acetato de lavandulilo. La
planta es ampliamente conocida como medicina herbaria por sus propiedades antioxidantes,
anti fúngicas, bactericidas, citotóxicas, antisépticas, anti inflamatorias y analgésicas.
El aceite de lavanda está aprobado por la Agencia de Medicinas Europea EMA como una
hierba medicinal contra el estrés y la ansiedad. La acción ansiolítica del linalool ha sido
comparada a la producida por el valium™.
Matricaria
Corresponde a Matricaria chamomilla. Es una droga vegetal de aplicación medicinal
amplia, principalmente por sus propiedades anti inflamatorias, antisépticas, y
antiespasmódicas. Se aplica en campos como la dermatología, otorrinolaringología, gastro
enterología, neumología, pediatría y radioterapia. El aceite esencial contiene como
componentes mayoritarios óxidos de bisabolol A y B, óxido de bisabolona A, y
camazuleno.
Menta
Entre las diferentes especies, Mentha piperita contiene un aceite esencial que se utiliza para
saborizar alimentos y bebidas. Este aceite ha demostrado resultados prometedores para
inhibir hongos patógenos, como los que afectan productos post cosecha. Los compuestos
comúnmente encontrados incluyen el mentol, eucaliptol, acetatoe de mentilo y limoneno.
Este aceite es reconocido para uso seguro y de bajo riesgo para los consumidores.
Naranja
El aceite de la cáscara de naranja Citrus aurantium, y de otras especies del mismo género,
contienen citral, α-terpineol, citronelal, geraniol, y linalool. En general los aceites
esenciales de diferentes especies de Citrus se reconocen por sus propiedades ansiolíticas. El
extracto de las flores de esta planta presenta propiedades anti inflamatorias y anti
complemento.
Orégano
Corresponde a Origanum vulgare, Labiatae, su aceite esencial contiene principalmente
sabineno, β-cariofileno, espatulenol, γ-eudesmol, germacreno-D, p-cimeno, terpinén-4-ol,
entre otros. El aceite presenta propiedades anti bacterianas.
Perejil
El aceite esencial de Petroselinum crispum, contiene miristicina, apiol, α- y β-pineno y
limoneno entre otros. El apiol, que es uno de los más abundantes, es considerado de riesgo
cancerígeno y genotóxico, pero menos que su similar el safrol.
Pino
Existen alrededor 115 especies de pinos, género Pinus, familia Pináceas. Los pinos son
conocidos por el uso de su madera y por sus aceites esenciales característicos. La especie
Pinus nigra contiene en su aceite esencial α-cadinol, óxido de manool, germacreno-D, E-
cariofileno, limoneno, α-terpineol, α-pineno, entre otros. Pero la composición química del
aceite varía de especie a especie y de acuerdo a la ubicación geográfica.
Ruda
La planta Ruta graveolens ha mostrado actividades biológicas que incluyen: antihelmíntica,
abortiva, antiparasitaria, antiinflamatoria, antidiarreica, anti-reumática, antifebril, anti
ulcera, repelente, antidiabética y antimicrobiana. Dos compuestos cetónicos constituyen el
80% del aceite esencial: 2-undecanona y 2-nonanona.
Salvia
Salvia officinalis es una muy conocida hierba aromática utilizada como té. Se reconoce su
uso para el tratamiento de resfriados y enfermedades bronquiales. También se ha
encontrado que sus extractos tienen propiedades antioxidante, antimicrobiana,
antinflamatoria y antidiabética. Los metabolites más abundantes incluyen los monoterpenos
β-tuyona, 1,8- cineol, y alcanfor, los cuales se usan como agentes antimicrobianos.
Sándalo
El sándalo como ocurre con otros aceites esenciales corresponde a las esencias de varias
especies de planta del género Santalum. La esencia de sándalo contiene como componentes
principales al α- y β-santalol. Al evaluar la acción hipoglicémica in vivo, tanto del aceite
como del α-santalol, se encuentra evidencias de sinergismo con los otros componentes del
aceite. Los otros componentes incluyen: cis y α-trans-bergamotol, cis-epi-β-santalol, cis-
lanceol, cis- nuciferal, β-santaleno, entre otros. También se ha reportado su potencial para
la curación de heridas. También se reporta que α-santalol y el aceite entero tienen acción
potencial contra cáncer e infecciones por hongos en la piel.
Toronjil
Melissa officinalis ha sido utilizada desde hace mucho tiempo por sus propiedades
sedativas, digestivas, analgésicas, antibacteriales, antivirales y antioxidantes.
Esta planta ha sido utilizada ampliamente como fragancia para vino, té y cerveza, y como
planta medicinal contra diferentes enfermedades como desórdenes gastrointestinales y
nerviosos, y contra el reumatismo, especialmente en Europa. El eugenol presente en su
aceite esencial tiene actividad antiespasmolítica, y una fracción de taninos presentó
actividad antiviral.
La esencia contiene principalmente limoneno, β-citronelal, β-citral, α-citral, cariofileno y
germacreno-D, y muestra potencial para uso contra diabetes. Es importante recordar que la
composición química del aceite es variable dependiendo del sitio de recolección, por
ejemplo una muestra recolectada en Marruecos, contiene entre sus componentes
mayoritarios el acetato de geranilo, y presentó actividad contra diferentes microorganismos.
Yerba mate
Corresponde a las hojas del Ilex paraguayensis, Fam. aquifoliaceae. En la fracción
arrastrada por destilación con vapor de agua se identificaron entre otros: linalool, -
ionona, ß-ionona,
-terpineol, geraniol, nerolidol, geranilacetona y eugenol, siendo el nerolidol activo contra
la bacteria Streptococcus mutans causante de las caries dentales.
Ylang-Ylang
La planta denominada Ylang-ylang corresponde a Cananga odorata, y es nativa del sur de
Asia. Se reportan usos para dolor abdominal, curación de heridas, recuperación postparto,
diarrhea, malaria y dolor en la espalda. También se usa su esencia como antidepresivo y
contra la menopausia. Entre los componentes de la esencia se han reportado: acetato y
benzoato de metilo, éter metílico de p-cresol, acetato de 3-metil-2-butén-1-ilo, entre otros.
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Capítulo 6
Productos naturales marinos
A diferencia de los metabolitos secundarios de las plantas y organismos terrestres, el
estudio químico y de actividad biológica de los metabolitos secundarios de los organismos
marinos, es de desarrollo más reciente. Esto debido principalmente, a la dificultad de
acceso que se ha tenido para su recolección. Adicionalmente, mientras con los productos
terrestres, existe todo un bagaje histórico de uso para muchos de ellos, lo que ha
determinado y permitido legalizar su uso para fines farmacéuticos, bien sea como materias
primas o como productos activos (drogas vegetales); pero este no es el caso de la química
de los productos naturales marinos. No obstante, lo anterior, es conocido que la
biodiversidad marina es mayor que la biodiversidad terrestre, con organismos de tamaños
tan variables que oscilan desde los microorganismos más simples hasta los más grandes
cetáceos como las ballenas, con toda una gama de tamaños intermedios y de diversidad
biológica. Además, gracias a que las técnicas de recolección de organismos marinos cada
vez permiten el estudio de organismos marinos de los mares profundos, se están
comenzando a investigar dichos organismos, lo que vislumbra un potencial de encontrar
nuevos metabolitos como por ejemplo antibióticos con menor resistencia por parte de
bacterias causantes de enfermedades.
Aparte de lo anterior y si se considera que en el extenso mundo marino se presentan
interacciones entre los microrganismos como la simbiosis de invertebrados con
microorganismos, estas relaciones simbióticas derivan en la obtención de nuevos
metabolitos con diferentes actividades biológicas
Esta abundancia en biodiversidad, y los hallazgos logrados muestran que los organismos
marinos, comparados con los organismos terrestres estudiados; contienen una mayor
diversidad y cantidad de sustancias naturales, con muchas y diferentes actividades
biológicas y con muchas variaciones en sus estructuras químicas.
Dentro de los organismos marinos más estudiados están las esponjas marinas, otros
invertebrados marinos y las algas marinas. Las esponjas en particular son atractivas para su
conocimiento químico, pues contienen una gran diversidad de metabolitos secundarios que
incluyen especialmente terpenoides, y a diferencia de la mayoría de terpenoides terrestres,
los marinos contienen halógenos, lo cual parece ser una característica distintiva de ambas
fuentes naturales.
En el caso de las algas marinas, muchas de ellas son utilizadas como alimento,
particularmente en los países de oriente como la China y Japón, pero adicionalmente son
utilizadas en la elaboración de productos cosméticos y nutracéuticos, por sus propiedades
biológicas.
Otra fuente inagotable de productos naturales son los microorganismos marinos, que se
constituyen en verdaderas mini fábricas de metabolitos con diversas estructuras químicas y
actividades biológicas y propiedades industriales únicas. Un ejemplo de esto son los hongos
marinos, los cuales se reconocen como una fuente de sustancias promisorias para su uso
farmacéutico.
Los artículos de revisión que se publican sobre la química de los productos naturales
marinos, han ido cubriendo año tras año, el creciente número de publicaciones e
investigaciones. Un ejemplo de ello, son los interesantes y completos trabajos de revisión
como los de Blunt y col. Estas revisiones se refieren a organismos tales como fitoplancton,
algas verdes, pardas y rojas, esponjas, cnidarios, briozoos, moluscos, tunicados,
equinodermos, manglares y otras plantas intertidales, y microorganismos. En forma general
muestran como a diferencia de los organismos terrestres, muchos organismos marinos
contienen por ejemplo m[as metabolitos halogenados, lo cual es de esperarse dada la
abundancia de los halógenos en el medio marino. Sin embargo, estos trabajos muestran no
solo una gran cantidad de sustancias con estructuras novedosas y algunas con una gran
complejidad estructural, al compararlas con sus contrapartes terrestres; sino que también
presentan una amplia gama de actividades biológicas, lo que las hace sustancias atractivas
para la investigación y desarrollo de nuevos medicamentos.
Desde el punto de vista de su actividad biológica, existen muchas sustancias aisladas de
fuentes marinas, que se evalúan a nivel preclínico por su potencial antibacterial,
antidiabético, antifúngico, anti-inflamatorio, antiparasitario, anti tuberculosis, y antiviral;
que afectan los sistemas inmune y nervioso. Algunos de ellos se encuentran en fase clínica
III, otros han sido aprobados por entidades como la FDA de los Estados Unidos. Hasta
2016, estaban disponibles comercialmente ocho medicamentos con actividad antiviral y
anti cáncer, especialmente. La citarabina, un nucleósido que tiene el nombre comercial de
Cytosar-U™, aprobado en 1969 contra el cáncer, la vidarabina, otro nucleósido registrado
comercialmente como Vira-A™, aprobado en 1976 contra cáncer; el Ziconotide, registrado
comercialmente como Prialt™, es un péptido anti cáncer aprobado en 2004; los ésteres
etílicos de ácidos grasos omega-3, registrados como Lovaza™, y aprobados en 2004 para
tratar la hipertrigliceridemia; la trabectedina, registrada comercialmente como Yondelis™,
un alcaloide tetrahidroisoquinolínico aprobado en 2007 para el tratamiento de cáncer; el
mesilato de eribulina, una cetona macrocíclica comercialmente registrada como Halaven™,
y aprobada en 2010 para el tratamiento de cáncer; la brentuximab vedotina, conocida
comercialmente como Adcetris™, y que es un conjugado con un anticuerpo, aprobado en
2011 contra cáncer; y el iota-carragenano, comercialmente conocido como Carragelose™,
que es una mezcla de polímeros sulfatados de galactosa, aprobado en 2013 como antiviral.
En cuanto a la metodología utilizada actualmente, esta es básicamente la misma
mencionada en el capítulo 1, pero en particular cada día se están utilizando más las técnicas
combinadas de cromatografía líquida y espectrometría de masas. Esto es muy útil y
conveniente para los procesos de bioprospección. Un ejemplo de estos es la técnica
combinada de cromatografía
líquida HPLC con espectrometría de masas con ionización laser y espectrometría de masas
de ionización electrospray, cuya sigla inglesa corresponde a LC-ICP-MS/ESI-MS.
A nivel general se conoce que los organismos marinos son fuente industrial de metabolitos
tales como carotenoides, ácidos grasos polinsaturados (p. ej. ω-3) y compuestos fenólicos;
todos ellos con propiedades útiles para la salud humana especialmente, pero además en
estos organismos se siguen encontrando nuevos compuestos con potencial contra diferentes
enfermedades. A continuación, se presentan algunos ejemplos representativos de las
diferentes clases de metabolitos secundarios presentes en organismos marinos. Estos
incluyen esteroides y terpenoides, quinonas, compuestos bromados, compuestos con
nitrógeno heterocíclico, compuestos con nitrógeno y azufre.
Entre la gran cantidad de esteroides aislados está el fucosterol, el cual se ha reportado como
no tóxico, y que reduce los niveles de colesterol en la sangre y presenta actividad
antidiabética, además presenta potencial contra enfermedades neurodegenerativas. A los
esteroles también se les atribuye la capacidad de reducir la grasa en el hígado y la
acumulación excesiva de grasa en el corazón. Un esterol hidroxilado en el carbono 16,
recientemente se aisló de la esponja marina Monanchora sp., y presenta propiedades
inmuno modulatorias.
HO
Fucosterol
OH
HO
Esterol de esponja Monanchora sp.
La cefalostatina-20 se aisló como un componente minoritario del gusano marino
Cephalodiscus gilchristi. Al comparar esta sustancia con las cefalostatinas más potentes,
esta sustancia es entre 100 y 1000 veces menos citotóxica.
OH
O
OHHO
O OH
N
OH
N
HO
OO
HO OH
Cefalostatina-20
Los limonoides son una clase de terpenoides. La moluccensina-J junto con otros
limonoides, aislados de plantas de manglares como Ceriops tagal presentan actividad
antiviral in vitro y contra leucemia in vivo. En el caso de los carotenoides, de la estrella de
mar apodada “corona de espinas” Acanthaster planci, se aisló el carotenoide nuevo 6’-
epigobiusxantina.
O
O
MeCOO
O
OH
AcO
O
Moluccensina-J
OH
HO
HO
6'-epigobiusxantina
O
O
O
Variabilina
De la esponja Smenospongia aurea se aislaron meroterpenoides tipo friedodrimano, con
mediana citotoxicidad a células tumorales. La presencia del grupo iminoquinona no tiene
precedentes en la naturaleza.
O
MeO
OEt
HO O
O O
Br
Antrasfaerol
N
HN
O
O
Penicilivinacina
N N
N
HO
OMe
Eustidina-A
H2NOC OH
OHO OH
NH
NH CONH2
O
O
NH
H2N O
HN CONH2
NH O
O O
N OMe
NH
O
MeO O
O O NH
NH O OH
NH
N CONH2
O
Stelletapectina-A
Referencias bibliográficas
Definición
Se definen como sesquiterpénlactonas a los sesquiterpenoides (Terpenoides C15) que
contienen en su estructura el grupo funcional de éster cíclico, más comúnmente llamado
anillo lactónico. La figura 7.1. muestra ejemplos de varias sesquiterpénlactonas naturales.
OH
O
H O
O
O
O O
O
HO HO
O O
Eremantólido-C
Cynaropicrina Costunólido
HO O
O O
OH O
O O
O
O
O
O O
10 14
1 9 H 9
2 8 8
10 O
5 7 7 12
3 6 2
4 1 O
11 11
3 5
13
15
O
12 13
4 6
15
Germacranólidos Pseudoguaianólidos
14
1
14
1 10
O 11
10 12 13
O
5 11 O12
15
13
O
15
Eremofilanólidos
Eudesmanólidos
6
3
15
2
1 OO
Lancifólidos
14
1 9
2 8 O
10
12O
3 5 11
15 13
Onoseriólidos
Biogénesis
Las sesquiterpenlactonas se originan a partir de farnesilpirofosfato como los demás
sesquiterpenos naturales. Es generalmente aceptado que la ruta principal para esto es a
través del ácido mevalónico, pero también se propone que es la del metileritritol (1). La
Figura 7.3 esquematiza la biogénesis de los intermedios I, II, III y IV, a partir de los cuales
se propone el origen de la mayoría de sesquiterpenos.
La lactonización del precursor sesquiterpenoide parece producirse por un mecanismo de
oxidación de un grupo metilo hasta carboxilo, la oxidación de un carbono adyacente y
finalmente la deshidratación entre los grupos carboxilo e hidroxilo formados. La Figura 7.4
describe este proceso.
En una forma similar se sugiere que se originan las otras clases de sesquiterpénlactonas. La
Figura 7.5 muestra las relaciones biogenéticas propuestas para las diversas clases de
sesquiterpénlactonas, donde se sugiere que los germacranólidos, son los precursores de
varias clases de sesquiterpénlactonas. La Figura 7.6 muestra un esquema propuesto para la
biogénesis de ambrosanólidos y helenanólidos.
Extracción
Debido a que la gran mayoría de sesquiterpénlactonas naturales se encuentran en forma
libre en las plantas que las poseen, tienen las propiedades de solubilidad características de
la gran mayoría de terpenoides, y son por lo tanto solubles en solventes relativamente
apolares como cloroformo, diclorometano, benceno, éter etílico, etc. Aunque el cloroformo
es el solvente más usado para su extracción, es recomendable remplazarlo por uno como el
acetato de etilo, teniendo en cuenta que este último es menos tóxico y menos contaminante
que los solventes halogenados. También se utiliza para la extracción el etanol, una vez
obtenido el extracto etanólico, este se concentra y se suspende en agua caliente. Al hacer
partición con acetato de etilo se obtiene en la fase orgánica, el extracto crudo de
sesquiterpénlactonas. Más recientemente se están comenzando a utilizar solventes
eutécticos para la extracción como los obtenidos con ácido málico-ChCl (1:1), ácido málico
- glucosa (1:1), ChCl-glucosa (5:2), ácido málico-prolina (1:1), glucosa-fructosa-sacarosa
(1:1:1) y glicerina-prolina-sacarosa (9:4:1).
-H [O]
[O]
C H 2O H
[O]
COOH
-H 2 O
Germacranólidos,
etc.
O
O HC O O H
O
O
Elemanólidos O seco-Eudesmanólidos
O
O O
O
O
Eudesmanólidos O Eremofilanólidos Bakkenólidos
O
O O
O O O
Cadinanólidos Ambrossanólidos
seco-Ambrossanólidos
O
O
Germacranólidos O
O
O O
Guaianólidos
Xanthanólidos
O
O
O
O
Helenanólidos
O
seco-Helenanólidos
O
seco-Germacranólidos
O
O
Crimaranólidos
OH H HO H
X
X
OH OH
H
H
OH
OH
HO H H H
HO
H
H H
H
H
O O
O O
O O
Ambrossanólidos
O O
Helenanólidos
Espectrometría de Masas
Debido a la gran diversidad estructural encontrada en las sesquiterpénlactonas naturales, no
se cuenta como en el caso de otras sustancias, de estudios de fragmentación que ayuden a
identificar estas sustancias. La técnica de ionización electrospray (sigla inglesa ESI), en
modo positivo, permite la obtención de los iones moleculares M + y los iones
pseudomoleculares (también llamados cuasi moleculares) que contienen un protón
adicional [M+H]+, o carecen de un protón [M-H]+, pero, además, permite la obtención de
otros iones como [M+m]+, donde m es un metal como sodio o potasio. Cuando se utiliza
una celda de colisión, se pueden obtener fragmentos provenientes de estos iones, que en el
caso de los iones M+ permiten obtener a partir de ellos nuevas fragmentaciones que se
pueden interpretar con los mecanismos de la espectrometría de masas clásica, esta técnica
se conoce como espectrometría de masas tándem y se reconoce por la sigla inglesa MS/MS.
Adicionalmente, en el caso de los iones pseudomoleculares, se pueden obtener
fragmentaciones con retención o migración de la carga. En general se observan fragmentos
correspondientes a la pérdida de una o varias moléculas de agua, monóxido de carbono,
formaldehído, dióxido de carbono y metanol, pero estos dependen de cada estructura en
particular, y de si se utiliza ESI en modo positivo o negativo.
Las figuras 7.7 y 7.8 muestran a manera de ejemplo, los posibles mecanismos de
fragmentación en espectrometría de masas clásica, de las sesquiterpénlactonas grosmicina,
canina y rupinas A y B.
O
O
OH
H H
O O
O
O
O
O
O
H
O
O
m/z 136
OH OH
O O
R R
O
O
O O
O O
R=H, Canina
R=OH, Rupina A
R=OAc, Rupina B
H
O
OH O
O
O R
O
m/z 111 (100%)
O
Figura 7.8. Mecanismo de formación del ión m/z 111 en los espectros de masas de canina y las
rupinas A y B.
Resonancia Magnética Nuclear
En general, los espectros de RMN-1H de las sesquiterpénlactonas muestran señales
características:
a) Los grupos metileno terminales aparecen como 2 dobletes entre 6.0-6.2 y 5.7-5.5 ppm,
con constantes de acoplamiento de aprox. 2 – 4 Hz.
b) Los grupos metilos ligados al anillo saturado aparecen como dobletes J = 7 Hz,
alrededor de 1.1 ppm.
c) En el sistema:
H H 8
5
7
6
O
H H 8
5
7
6
O
O
Figura 7.9. Desplazamientos químicos RMN-1H reportados y calculados para una
sesquiterpénlactona citotóxica aislada de Artemisia anomala.
En el caso de RMN-13C, esta técnica es de gran utilidad para sustancias sin el anillo
aromático, como son en general los terpenoides. La figura 7.10 muestra los
desplazamientos químicos de dos sesquiterpénlactonas, tanto experimentales como los
calculados con el software Chemwind®, de Biorad Labs®. La figura 7.11. muestra los
desplazamientos químicos experimentales y calculados con NMRdb.org de los carbonos
para la misma sesquiterpénlactona de la figura 7.9. En este último caso, puede observarse la
buena aproximación entre los valores calculados y los experimentales, con diferencias que
no sobrepasan las 5.0 unidades de desplazamiento químico.
18.2
14.8
OH OH 37.8
40.3
163.5 29.7 163.5 25.8
84.0 83.1
130.9 130.5 31.7
28.3
a. 58.9
78.944.0
57.2
79.6 41.7
210.4 207.8
140.0 138.7
121.5 17.6 120.4
17.4 O
O O O
170.7 170.0
O O
12.1 12.1
OH OH
36.4 36.4
145.3 145.3 25.6
25.6
85.4 85.4
128.7 25.7
128.7 25.7
b. 64.7 64.7
74.837.4
74.8 37.4
203.3 203.3 145.9
145.9
121.4 13.8 121.4
O13.8 O O O
165.0 165.0
O O
O 65.2 O 175.8
63.8 41.2
64.0 40.0 170.2
199.8 21.0
64.9
200.1 69.0 21.0
128.3
133.8 52.3
O 69.8
O
48.5 55.0
159.7
169.0 48.8 135.9
169.1
169.6
O
Figura 7.11. Desplazamientos químicos RMN-13C reportados y calculados para una
sesquiterpénlactona citotóxica aislada de Artemisia anómala.
Espectroscopía ultravioleta
Las sesquiterpénlactonas ,-insaturadas absorben entre 205-235 nm debido al grupo
carbonilo lactónico.
Espectroscopía infrarroja
Ensayos de reconocimiento
Aunque no existe una prueba específica para reconocer sesquiterpenlactonas en muestras
biológicas, son muy utilizados los ensayos de reconocimiento de anillos lactónicos con
reactivos nitro como son los ensayos de Kedde, Legal y de Raymond. Aquí es importante
tener en cuenta que hay otras sustancias como los cardiotónicos y algunas acetogeninas que
también producen resultado positivo, debido a que también contienen anillos lactónicos. Se
han sugerido varios mecanismos para explicar la coloración violeta que se produce con los
reactivos nitro, una de ellas es la formación de los denominados complejos de
Meisenheimer (Figura 7.12).
O
O NO2
O NO2
NaOH R
O
R O2N COOH
O2N COONa
Compuesto
lactónico Acido 3,5-dinitrobenzoico Complejo de Meisenheimer
(reactivo de Kedde) (color violáceo)
Ensayo de Legal
Las sesquiterpenlactonas con anillos -lactona ,-insaturados producen coloración rosa
cuando se disuelven en piridina, se añade nitroprusiato de sodio y un álcali. La prueba
también la dan positiva las lactonas ,-insaturadas cuando no se controla el pH, ya que se
isomerizan en medio alcalino. La prueba también la dan positiva las metiléncetonas.
Ensayo de Kedde
A la muestra disuelta en alcohol se añade ácido 3,5- dinitrobenzoico y KOH. Se producen
coloraciones violetas o azules que desaparecen después de una hora.
Actividad biológica
Para las sesquiterpénlactonas se reportan varias actividades biológicas tales como: acción
citotóxica, antiinflamatoria, antitumoral, antibacterial, anti dermatitis en humanos,
venenosa, insecticida, antimicótica, inhibidores del crecimiento de las plantas, y otras.
La actividad citotóxica de las sesquiterpenlactonas ha sido relacionada especialmente con el
anillo lactónico provisto del grupo exometileno. A continuación, se presentan algunos
ejemplos de estudios de actividad biológica de sesquiterpénlactonas naturales.
La artemisinina es una sesquiterpénlactona aislada inicialmente de Artemisia annua, pero
también ha sido aislada de otras plantas del género Artemisia, de la familia de las
compuestas. Esta sustancia es más activa contra el parásito de la malaria Plasmodium
falciparum, que la cloroquina, y sus derivados se usan actualmente combinada con otras
sustancias para el tratamiento de esta enfermedad.
O O
O
H O
O
Artemisinina
Centipeda minima de la familia de las compuestas, es una hierba medicinal china, utilizada
comúnmente para prevenir infecciones respiratorias y cáncer nasofaríngeo. De esta planta
se aisló 6-O-angeloilenolina, que tiene potencial para el tratamiento del cáncer de pulmón.
O O
O
6-O-Angeloilenolina
Saussurea lappa, es otra medicina herbaria china, a la que se le atribuyen actividades
biológicas múltiples como inhibir las respuestas inflamatorias, prevenir la proliferación de
células cancerosas e inducir apoptosis. Esta planta contiene la sesquiterpénlactona
dehidrocostus-lactona, que ha mostrado actividad in vitro contra células cancerosas.
H
H
O
Dehidrocostus-lactona
La alantolactona es una sesquiterpénlactona aislada de Inula helenium, a la que se ha
reportado tener actividad propiedades antiinflamatoria y anti-cáncer. Se ha mostrado que
tiene potencial en el tratamiento de la inflamación asociada a desórdenes metabólicos, tales
como la resistencia a la insulina y diabetes tipo 2.
H
O
O
Alantolactona
La enfermedad del sueño es producida por el parásito Trypanosoma brucei, y Vernonia
lasiopus es una planta africana usada tradicionalmente para curar problemas de indigestión,
dolores de estómago, problemas gastrointestinales, gusanos, malaria, enfermedades
venéreas, como purgante, etc. De esta planta se aisló la vernolepina, la cual ha mostrado una
interesante actividad in vitro contra el parásito T. brucei. Una especie relacionada Vernonia
amygdalina es una planta con potencial antihelmíntico, a partir de ella se han obtenido
varias clases de compuestos, que incluyen varias sesquiterpénlactonas, flavonoides y
saponinas esteroides; y se ha sugerido su uso como agente terapéutico o preventivo para
reducir la toxicidad de los medicamentos normalmente utilizados contra esta clase de
parásitos.
OH
O
O
H
O
O
Vernolepina
La damsina y la ambrosina, aisladas de la especie suramericana Ambrossia arborescens,
muestran potencial contra células tallo cancerosas.
O O
O O
O O
Damsina Ambrosina
Elephantopus scaber L. (Compuestas), es una planta ampliamente distribuida en la China.
La planta entera la denominan didancao, y es utilizada en la medicina china como
antifebril, diurética, antibacteriana y antiviral. También se usa para el tratamiento de
hepatitis, tos, neumonía, bronquitis y dolor en las articulaciones. De esta planta se han
aislado diez sesquiterpénlactonas tipo elemanólido, los cuales están asociados a una
actividad antitumoral potencial.
Diferentes especies de plantas de las familias asteráceas, lamiáceas y mirtáceas presentan
propiedades anti-tricomonas y dentro de los componentes bioactivos identificados se
encuentran varias sesquiterpénlactonas.
Es interesante anotar que algunos sesquiterpenos que no poseen el ciclo lactónico, sino
otros grupos éster, como los aislados de Artemisia pérsica, presentan potente actividad
antiplasmodial.
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Capítulo 8
Otros derivados de AcetilCoenzima-A
Si bien los terpenoides constituyen uno de los más grandes grupos de metabolitos
secundarios derivados biosintéticamente del acetil coenzima-A, esta sustancia también es el
precursor de otras sustancias de importancia biológica como los ácidos grasos, los cuales
cumplen papeles fundamentales como componentes de membranas en los fosfolípidos,
además de ser fuente de energía para diferentes procesos metabólicos. Además, los ácidos
grasos a su vez son precursores en diferentes organismos de sustancias de interés
farmacéutico como son los poli acetilenos, las prostaglandinas, las acetogeninas entre otros;
los cuales presentan diferentes actividades biológicas. Todos estos compuestos, de manera
general tienen la característica de no incluir en su estructura química los anillos aromáticos.
Sin embargo, por una ruta biosintética alterna, denominada la ruta de las cadenas
policetídicas; se originan sustancias como los antibióticos tipo tetraciclina, y sustancias con
anillos aromáticos de diferentes clases como son los flavonoides y las quinonas
mencionadas en el capítulo 2, y otros compuestos aromáticos que tienen como característica
grupos oxigenados en disposición meta en el anillo aromático.
A continuación, se presentan algunos aspectos relevantes sobre algunas de estas sustancias
naturales, especialmente sobre su biosíntesis y algunas técnicas de análisis.
Ácidos grasos
Los ácidos grasos naturales incluyen fundamentalmente compuestos con cadenas
hidrocarbonadas que oscilan generalmente entre los 4 y 30 átomos de carbono. La cadena
hidrocarbonada puede contener una o varias insaturaciones. Las tablas 8.1 y 8.2 muestran
listas de alcaloides con cadenas saturadas y con cadenas insaturadas, respectivamente.
1 4 n-Butanoico Butírico
2 6 n-Hexanoico Caproico
3 8 n-Octanoico Caprílico
4 10 n-Decanoico Cáprico
5 12 n-Dodecanoico Laúrico
6 14 n-Tetradecanoico Mirístico
7 16 n-Hexadecanoico Palmítico
8 18 n-Octadecanoico Esteárico
n Número total de carbonos Nombre sistemático Nombre común
9 20 n-Eicosanoico Araquídico
10 22 n-Docosanoico Behénico
11 24 n-Tetracosanoico Lignocérico
12 26 n-Hexacosanoico Cerótico
13 28 n-Octacosanoico Montánico
14 30 n-Triacontanoico Melissico
R. McLafferty
- OCH3
OH O
CH3O
m/z 74
m/z 239
Figura 8.1. Esquema de la fragmentación del éster metílico del ácido palmítico, en
espectrometría de masas de impacto electrónico.
En el caso de los ácidos grasos insaturados, el espectro de masas de impacto electrónico
permite determinar el peso molecular y observar algunos fragmentos característicos de la
cadena hidrocarbonada, pero no permite determinar la posición de la insaturación; para esto
es necesario preparar el derivado pirrolidida del ácido graso y determinar su espectro de
masas de impacto electrónico. A manera de ejemplo, el espectro de masas del derivado
pirrolidida del ácido oleico, presenta los iones intensos m/z 113 (pico base) y 126, así como
también el ión molecular m/z 335. Además, se observa una serie de iones m/z 140, 154,
168, 182 entre otros. El pico base m/z 113 se origina a través de un rompimiento
McLafferty, para dar el ión con la estructura mostrada en la figura 8.3. Los iones m/z 126,
140, 154, etc., son originados por rompimientos simples carbono-carbono y tienen como
fórmula general [C4H8NCO(CH2) n]+. Pero adicionalmente se observan dos iones m/z 196
y 208, correspondientes a una diferencia de 12 unidades de masa. Estos iones permiten
determinar la posición del enlace doble en el carbono 9.
O 208
126 154 N
196
R. McLafferty
OH
m/z 113
Figura 8.3. Esquema de la fragmentación del derivado pirrolidida del ácido oléico, en
espectrometría de masas de impacto electrónico.
Prostaglandinas y tromboxanos
Los eicosanoides son una gran clase de lípidos bioactivos naturales derivados de la
oxidación del ácido araquidónico (AA), e incluyen las prostaglandinas (PG), los
tromboxanos (TX), los leucotrienos (LT), las lipoxinas (LX), los ácidos
hidroxieicosatetraenóicos (HETEs), y los ácidos epoxieicosatrienoicos (EETs). Son
sustancias de vida media corta que actúan en procesos patológicos y fisiológicos que
incluyen el cancer, las enfermedades inflamatorias, la sanación de heridas, etc.
Las prostaglandinas son una clase de eicosanoides conocidos como prostanoides, que
contienen 20 átomos de carbono y un anillo ciclopentano. A su vez, se dividen en dos
grupos: prostaciclopentanos y tromboxanos. Los primeros se clasifican con base en las
estructuras de sus anillos ciclopentano (denotados utilizando una letra desde la A hasta la
K), y el número de enlaces dobles en sus cadenas hidrocarbonadas, que se denotan
utilizando un numero subíndice del 1 al 3. Mientras los tromboxanos consisten en TXA y
TXB (figura 8.4). Por ejemplo, la estructura:
O
COOH
OH O(O)H
Poliacetilenos
Otros derivados de los ácidos grasos son los poliacetilenos, que como su nombre lo indica,
contienen en su estructura química uno o varios enlaces triples carbono-carbono. La figura
8.5 muestra ejemplos de varios de ellos aislados del ginseng.
Los poliacetilenos se han aislado de organismos como plantas, hongos, organismos
marinos, insectos y humanos. En general presentan diversas actividades biológicas, lo que
los hace sustancias de interés para la medicina, la farmacología, la química medicinal y la
industria farmacéutica. En alimentos como la zanahoria, el apio, la lechuga, el perejil, la
alcachofa y el tomate, se reportan poli acetilenos del tipo falcarinol. Las familias vegetales
que más se reportan como fuentes de estos compuestos incluyen las apiáceas, las araliáceas,
las asteráceas, las campanuláceas, las olacáceas, las pitosporáceas y las santaláceas.
O O
O OH
R1
R1 R1
R1 O
R2 R2
R2 R2
O R1
O O
O R1
R1 R1
O
HO HO R2
R2 R2 R2
O
OH
R1
OO R1
R1
O R2
R2 HO O R2
COOH
COOH COOH
Figura 8.4. Nomenclatura de prostaglandinas. Arriba los núcleos probables tipo ciclopentano o
pirano para tromboxanos, y abajo las tres cadenas R1 y R2.
OH OH
Panaxinol Ginsenoina-A
OH OH
Panaxidol OH
Panaxidiol
OH OH
OH OH
Cl
Cl
Figura 8.5. Estructuras químicas de varios compuestos poli acetilénicos aislados de las raíces de
Panax ginseng.
En el caso de los organismos marinos, se han reportado poli acetilenos de cadena corta
(C15- C20) con anillos oxigenados de 6, 7, 8 y 9 átomos, especialmente en algas, mientras
que organismos como las esponjas marinas contienen poli acetilenos de cadenas hasta de
más de 40 átomos de carbono, generalmente sin ciclaciones. En estos organismos también
es común la presencia de sustituyentes como el bromo y el cloro, lo cual es una
característica de muchos metabolitos marinos. En este caso se han reportado actividades
biológicas que incluyen antihongos, antimicrobiana, inhibición de la transcriptasa reversa
del VIH, citotóxica. Además de inducir la metamorfosis de larvas de ascidias, prevenir la
invasión de larvas de percebe e inhibir la fertilización de gametos de estrellas de mar.
Los poliacetilenos son derivados biogenéticamente de ácidos grasos como el esteárico, el
oleico y el linoleico. La figura 8.6, muestra el esquema propuesto para la biogénesis de
compuestos acetilénicos a partir de ácidos grasos insaturados, puede observarse que los
enlaces dobles C=C y los enlaces triples C≡C, se originan mediante procesos que se
resumen en des hidrogenaciones mediadas por enzimas.
Los métodos para la extracción incluyen el uso de microondas y el uso de ultrasonido, con
solventes como metanol y etanol. Sin embargo, se reporta que la extracción por reflujo con
metanol es más eficiente que el uso de ultrasonido a temperatura ambiente. Una vez
extraídos se pueden fraccionar por cromatografía en columna con mezclas de diferentes
proporciones de hexano-acetato de etilo.
Los poliacetilenos muestran en sus espectros UV bandas características entre 200 y 410 nm.
Los que tienen el sistema diino (-C≡C-C≡C-) muestran bandas en 230, 240 y 255 nm. Los
que contienen el sistema diino-eno (-C≡C-C≡C-C=C-) muestran bandas en 210, 238, 251,
265 y
280 nm.
Para la separación se utiliza HPLC en fase reversa con mezclas como acetonitrilo-agua en
diferentes proporciones, y la cromatografía en contracorriente de alta velocidad, de la cual
se afirma es un método simple, eficiente y económico.
Cuando se analizan por HPLC acoplado a espectrometría de masas con detector APCI, se
pueden obtener sus iones cuasimoleculares M-H-. También se reportan análisis con HPCL
acoplado a espectrometría de masas de tiempo de vuelo (Time of flight).
En RMN-13C, las señales de los carbonos acetilénicos se observan generalmente entre 60 y
85 unidades de desplazamiento químico. Por ejemplo, en el capileno, aislado de Artemisia
ordosica, los desplazamientos de los carbonos acetilénicos se presentan en la estructura
mostrada a continuación. Los valores en negro corresponden a los desplazamientos químicos
reportados, y los mostrados en azul, a los calculados con la herramienta en línea
nmrDB.org.
O
COOH
SCoA
COOH
Acido oléico
COOH
Acido petroselínico
COOH
Acido linoléico
COOH
Acido crepenínico
COOH
Acido tarírico
Figura 8.6. Esquema biogenético simplificado de compuestos acetilénicos a partir de ácidos grasos
saturados e insaturados.
66.3
78.2
67.5
73.8
74.2 64.4
87.4 64.9
Tetraciclinas y anfotericinas
La ruta de la acetilcoenzima-A no solo lleva a una gran cantidad de compuestos como los
terpenoides, los ácidos grasos, los poliacetilenos, las prostaglandinas, entre otros, sino que
también mediante una ruta conocida como la de las cadenas policetídicas o del malonato,
da origen a una gran cantidad de sustancias con anillos aromáticos -como se describe a
manera de ejemplo con las antraquinonas en el capítulo 2- y a compuestos tan importantes
como las anfotericinas, las nistatinas y las tetraciclinas producidas por diferentes
microrganismos.
Las tetraciclinas fueron descubiertas en los 1940s, y son antibióticos con un amplio
espectro de actividad contra microorganismos Gram+ y Gram-. Su uso se ha limitado a
personas adultas por su capacidad quelante con el calcio y sus efectos gastrointestinales.
Sin embargo, se han venido desarrollando nuevos derivados con mejores propiedades como
la omadaciclina, un derivado semisintético que además de presentar actividad potente
contra bacterias Gram+, Gram-, anaerobias, aerobias y típicas.
O
OH O OH OH
OH
H2N
NH
O
H H
N N
Omadaciclina
Otro ejemplo de la importancia farmacéutica de las tetraciclinas es el compuesto SP2575,
aislado de Streptomyces sp. Que además presenta actividad antitumoral contra varias líneas
celulares.
O O OH O OH
O
H2 N
HO
H H O O
O O OMe
OH O
HO
Tetraciclina SP2575
La figura 8.7, esquematiza la biogénesis de clorotetraciclina, a partir de malonamilamida y
ocho unidades de malonilcoenzima-A, que originan la cadena policetídica, que luego es
deshidratada para formar el tetraciclo. Luego de varios procesos se origina la sustancia
como tal.
La figura 8.8 muestra un esquema biogenético propuesto para la anfotericina-B.
Aquí es importante mencionar que se están desarrollando trabajos con ingeniería genética
para producir diferentes compuestos de interés farmacéutico, gracias al conocimiento que
se tiene de la ruta de las cadenas policetídicas.
SEnz
CoAS NH2
8 malonilCoA O O O O
O O NH2
MalonamilCoA
O O O O O
Cadena policetídica intermedia
- 3 H 2O
Cl HO NMe2
H H OH
OH
NH2 NH2
OH
OH O OH O O O O O O O
Clorotetraciclina
Figura 8.7. Esquema biogenético resumido para las tetraciclinas, por la vía de la
malonilcoenzima- A.
O
OO
O O O O O O O
HO O
O O O O O O O O
OH
OH
HO O OHOH OHOHO
OH
OH
OH
OH
HO O OHOH OHOHO
COOH
O
O
OH
NH2
HO
Figura 8.8. Esquema biogenético para la anfotericina-B, a partir de una cadena policetídica.
O O
CH3 n OH
O O O O O O O
CH3 +
CH2 SCoA -
O CH2 SCoA CH3 CH2 CH2 SCoA
Tricétido
Tricétido Tetracétido
Si se siguen adicionando moléculas de malonilcoenzima-A, se generan sucesivamente
un hexacétido, un octacétido, un decacétido, etc. Esto se puede resumir en la expresión
general:
O O O
O O Enz.
+ n
CH3 + n CO2 + n AcetilCoA
SCoA CH3 CH2 SCoA
HO CH2 SCoA
n
Cadena policetídica
H2O
O CH3
O CH3 CH3
HO H O HO
COOH aromat.
O COOH O COOH
O
O OH
Figura 9.6. Esquema biogenético que explica como a partir de un pentacétido, se puede dar origen a
dos compuestos aromáticos distintos, pero que tienen como característica el patrón de oxigenación
meta.
Red. y
deshidratación Reducción
Aromatización
OH
CHO
OH
OH
Heterocornol-B
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Capítulo 9
Metabolitos de hongos
Además de los metabolitos secundarios que se encuentran en los organismos vegetales y
animales, el reino de los hongos incluye muchos macro- y microorganismos, que son
fuentes de metabolitos secundarios de interés farmacéutico. Los hongos han sido utilizados
a través de la historia para fines mágico-religiosos y en la alimentación, también han sido un
problema para la agricultura, especialmente debido a las micotoxinas que producen algunos
hongos filamentosos. En el primer caso están los denominados hongos sagrados, que
incluyen Amanita muscaria, varias especies de Psilocybe y Claviceps purpurea. Entre los
más conocidos están los denominados alcaloides del ergot que se obtienen del hongo
Claviceps purpurea, que es un parásito del centeno o cornezuelo, y que han servido para el
desarrollo de medicamentos utilizados para el tratamiento de migrañas, inhibidores de
prolactina, anti Parkinson, entre otros usos. También es el caso de los hongos del género
Penicillium, gracias a los cuales se obtuvo inicialmente el antibiótico tan importante como
es la penicilina. También son conocidos por ser la fuente de ergosterol, una sustancia
precursora de las vitaminas D, que son importantes en diferentes procesos fisiológicos
humanos. Estos y otros ejemplos se han logrado gracias a la investigación de los hongos
encontrados en diferentes hábitats terrestres, pero recientemente se han iniciado estudios
con hongos del mar, los cuales se constituyen en una despensa hasta ahora poco conocida y
explorada, de metabolitos secundarios de interés para desarrollar productos útiles para el
mantenimiento de la salud, como las penicilinas, las cefalosporinas, las ciclosporinas, las
estatinas, entre otros.
Se calcula que existen en la naturaleza unas 1.5 millones de especies de hongos, de los
cuales solo un 10% ha sido clasificado taxonómicamente. Se clasifican en un reino
diferente, porque a diferencia de los vegetales no poseen pared celular, sino quitina; y no
realizan la fotosíntesis. Una clasificación breve los subdivide en basidiomicetos,
ascomicetos, zigomicetos, oomicetos, deuteromicetos (hongos imperfectos), y
microsporidiomicetos. Los deuteromicetos incluyen géneros como Alternaria, Aspergillus y
Penicillium.
Los hongos producen diversidad de compuestos que incluyen desde antibióticos hasta
micotoxinas. Todos estos compuestos son producidos básicamente por tres rutas: la del
ácido mevalónico que da origen a compuestos tales como terpenoides y esteroides; la del
ácido shikímico que da origen a muchos compuestos aromáticos y a alcaloides aromáticos;
y la de las cadenas policetídicas, que da origen a ácidos grasos, otros compuestos
aromáticos, etc.
Aunque los antibióticos han sido la gran contribución de los hongos para la salud humana,
se vienen encontrando nuevas sustancias, y más importante con un mayor potencial uso
farmacéutico gracias a las diferentes actividades biológicas que presentan. La tabla 9.1
presenta una lista de metabolitos, sus fuentes y sus actividades biológicas reportadas.
Tabla 9.1. Ejemplos de metabolitos bioactivos de hongos y sus actividades biológicas.
Ciclosporinas
Las ciclosporinas son un grupo de oligopéptidos cíclicos apolares, siendo la ciclosporina-A,
el más conocido, y que posee actividad inmuno supresora. Es utilizada ampliamente en los
procesos de trasplante de corazón, hígado y riñón.
HO
O O
N N NH
N N
O O O
O N
O O
NH NH
NH N
O O O
Ciclosporina-A
La ciclosporina-A (CyA), se utiliza en numerosas enfermedades como la enfermedad de
Graves, uveítis, colitis ulcerosa, enfermedad de Crohn, miastenia gravis, lupus eritematoso
sistémico, dermatomiositis, psoriasis, artritis reumatoide, y ciertas nefropatías donde se
involucren factores inmunológicos. Por estas propiedades, la ciclosporina-A se prepara por
métodos biotecnológicos, como la fermentación sumergida.
NHN
NH
HN
Fenilahistina
La palmarumicina CP-1, se aisló del hongo endofítico Coniothyrium palmarum. Es una
sustancia que contiene una rara estructura de espirobisnaftaleno. Esta sustancia tiene
propiedades antimicóticas, antibacteriana y antiproliferativa. Un compuesto relacionado con
un grupo acetato en posición para respecto al hidroxilo, denominado rithidenona-H, ha sido
aislado del endófito Rhytidysteron rufulum, muestra actividad contra dos líneas de células
cancerosas.
O
O
O
O
HO HO
O O
O O
Palmarrumicina-CP1 Rithidenona-H
La rhizoxina es un policétido macrocíclico aislado del hongo Rhizopus chinensis. Se origina
por la bacteria Burkholderia que vive en sus hifas. Además de ser un problema para los
cultivos de arroz, esta sustancia es muy citotóxica contra células tumorales humanas y
murinas. Esta sustancia se liga la β-tubulina e inhibe la mitosis, por lo que se la clasifica
como un antimitótico.
H
O O
O H
HO
O
O O
O
N
OMe
Rhizoxina
El epoxiquinol-B es un compuesto pentacíclico altamente funcionalizado, aislado de un
hongo no identificado. Su estructura novedosa es la de un dímero de pentacétido, Esta
sustancia presenta una fuerte actividad anti angiogénica. La angiogénesis está relacionada
con diferentes enfermedades como el cáncer, la artritis reumatoide, la retinopatía diabética,
y otras enfermedades crónicas.
O
HO O OH
O O
O
H
O
Epoxiquinol-B
La fumagilina es un meroterpenoide antibiótico que fue aislado inicialmente en 1949 del
hongo Aspergillus fumigates. Es muy usado para el tratamiento de enfermedades causadas
por micrósporas, por ejemplo, en pacientes con sida, los cuales tienen disminuido su
sistema autoinmune. También para pacientes recién trasplantados y para pacientes con
micrósporas en los ojos. Además, esta sustancia inhibe la angiogénesis, lo cual es
indispensable para el crecimiento de tumores y la metástasis. Otros estudios han mostrado
que la sustancia inhibe el desarrollo de varias líneas células de cáncer. Sin embargo, debido
a los efectos laterales que presenta, se vienen estudiando análogos químicos para mejorar
sus propiedades. Esta sustancia se ha identificado también en aguas superficiales mediante
técnicas como extracción en fase sólida SPE, y HPLC-ESIMS.
O
O
OMe
O
O
OH
O
Fumagilina
La destruxina-B es un ciclodepsipéptido aislado del hongo entomopatogénico Metarhizium
anisopliae en 1961. Posteriormente se ha aislado de otros hongos del género Althernaria y
Ophiosphaerella. Esta sustancia ha mostrado un amplio espectro de actividades que
incluyen: fito toxica, antiviral, insecticida, antitumoral, citotóxico y citostática. Esta
sustancia está siendo investigada por sus propiedades potenciales contra cánceres como el
colo-rectal y del hígado.
O
H
O
NH
H N
N
O N O
O
NH
O O
Destruxina-B
La cotylenina-A aislada en 1970 desde un caldo de cultivo de Cladosporium sp., es un
glicósido diterpenoide con potencial utilidad para el desarrollo de alternativas terapéuticas
contra el cáncer de pulmón, de seno y leucemia.
O
O
HO
O O
O
OMe
HO O
HO OMe
Cotylenina-A
La myriocina, es un ácido graso aminado, aislado inicialmente en 1972 del ascomiceto
termofílico Myriococcum albomyces. Esta sustancia es un inhibidor potente de la serina-
palmitoil transferasa. Uno de sus derivados el Fingolimod®, fue aprobado por la FDA en
2010 para el tratamiento de la esclerosis múltiple. Estudios posteriores han mostrado que
tiene potencial contra diferentes tipos de cáncer como el de mama, glioblastoma, de
próstata, de pulmón, colangiocarcinoma, gástrico, pancreático, colon, de ovario, de vejiga,
y contra problemas hematopoyéticos. La myriocina puede analizarse mediante técnicas
como HPLC acoplada a espectrometría de masas y HPLC con detector de fluorescencia.
O OH
HO
NH2 OH O
OH
Myriocina
La cytocalasina-E, es una micotoxina del hongo Aspergillus clavatus, que crece en
alimentos almacenados. Es una sustancia inhibidora de la angiogénesis y del crecimiento
tumoral. En el caso del cáncer de ovario, esta sustancia es menos citotóxica que sustancias
aprobadas como doxorubicina, paclitaxel y vinblastina. Es una sustancia que ha ayudado en
el avance del conocimiento sobre los procesos de metástasis.
O HO
H O
H
OH
O O
NH
O
Cytocalasina-E
La apicidina es un tetrapéptido cíclico, aislado del hongo endofítico Fusarium
pallidoroseum. Esta sustancia inhibe las enzimas histona desacetilasas tanto en los parásitos
como en los mamíferos. Presenta potencial para el desarrollo de agentes terapéuticos contra
cánceres como leucemia promielocítica, cervical, de seno, de páncreas, renal, de pulmón,
de colon, de hígado, entre otros. Esta sustancia muestra potencial en terapia de infarto de
miocardio y como antiparasitario.
O O
NH
N
HN NH
N
O O H
OMe (CH ) COC H
2 4 2 5
Apicidina
La chaetocina es una epiditiocetopiperazina aislada inicialmente de un medio de cultivo
líquido fermentado de Chaetomium minutum. Esta sustancia se menciona como un agente
antitumoral potencial. Diferentes estudios muestran que este metabolito ejerce una
actividad antiproliferativa importante contra diferentes tipos de cáncer como el de hígado,
leucemia, de seno, de pulmón, de colon y de próstata. Esta sustancia induce apoptosis de
células de cáncer hepático.
OH
O N
NH S
S
N O
O
N
NH S
S N
O
OH
Chaetocina
La galiellalactona es un hexacétido aislado de Galiella rufa. Esta sustancia presenta
potencial anti angiogénico y anti metastásico. Se estudia su potencial contra el cáncer de
próstata. Además, presenta actividad antiinflamatoria.
OHH
O
O
H
(-)-Galiellalactona
En general los hongos filamentosos, y especialmente los endófitos (o endofíticos, porque
conviven con plantas), se utilizan biotecnológicamente para producir sustancias para la
terapia del cáncer como el taxol. Son ejemplos de estos Fusarium oxysporum, cultivado en
caldo de papa-dextrosa, y Aspergillus niger aislado de Taxus cuspidate.
Es importante destacar que no solo se investigan los metabolitos contra cáncer sino también
con otros potenciales usos farmacéuticos, por ejemplo, el hongo endofítico Aspergillus sp.,
produce compuestos tipo fenalenona, que muestran actividad contra el VIH.
HO
O OH
HO
O OH
HO
Asperfenalenona-A
La dehidrocurvularina aislada de Alternaria cinerariae, junto con la galiellalactona, aislada
de Galiella rufa; han mostrado un potencial uso para el tratamiento de inflamaciones
intestinales.
O O CH3
OH HO
O
O
OH O
Galiellalactona Dehidrocurvularina
Pigmentos
A partir de hongos se han obtenido pigmentos tipo quinona de colores que van del amarillo
al rojo, como los reportados en especies Fusarium sp., Talaromyces verruculosus, y
Stemphylium lycopersici. Varios de estos compuestos además de tener uso potencial como
colorantes para textiles, presentan propiedades antioxidantes, antibacterianas y anti cáncer.
Del género Aspergillus, se obtuvo la Asperversina-A, que es un metabolito raro que se
asemeja a un híbrido entre xantona y esteroide. Para esta sustancia se reporta actividad
antimicótica.
Otros pigmentos incluyen sesquiterpenos tipo azuleno, como el caso del 7-acetil-4-
metilazuleno-1-carbaldehído, aislado de los cuerpos fructíferos del hongo comestible
Lactarius deliciosus. Esta sustancia muestra una actividad moderada contra Staphylococcus
aureus.
H O
O
7-acetil-4-metilazuleno-1-carbaldehído
Los hongos del género Monascus, son conocidos como fuente de pigmentos. Estos son
metabolitos secundarios que son ampliamente utilizados como colorantes de alimentos en
el mundo, muy especialmente en países del oriente como China, Japón y otros. Se han
reportado unas 57, y a estas sustancias se les atribuyen propiedades anti cáncer,
antimicrobianas, anti mutagénicas, antidiabéticas, entre otras. Estos pigmentos son mezclas
de azafilonas, y se conocen tres pigmentos: el pigmento Monascus naranja (sigla inglesa
MOP), el pigmento Monascus rojo (MRP), y el pigmento Monascus amarillo (MYP). Los
compuestos presentes en estas mezclas incluyen la rubropunctamina (amarillo), la
monascorubramine (amarillo), rubropunctatina (naranja), monascorubrin (naranja),
monascina (amarillo), y ankaflavina (amarillo).
R
O
O
N
O R1
O
Estructura general de pigmentos rojos de Monascus
R1 = H / aminoácido / glucosamina
R1 = H, R = C5H11, rubropunctamina
R1 = aminoácido, R = C7H15, monascorubramina
Hongos marinos
Aunque comparativamente con los hongos terrestres, los hongos de origen marino han sido
muy poco investigados, las perspectivas de encontrar nuevos y novedosos metabolitos de
interés farmacéutico en los marinos es muy grande. Los estudios realizados muestran que
hongos de los géneros Aspergillus y Penicillium, también abundan en el mar, debido
posiblemente a que tienen la posibilidad de soportar niveles de salinidad altos. La mayoría
de las especies analizadas conviven con organismos como algas y esponjas, y en sitios poco
estudiados como manglares y sedimentos marinos. Los metabolitos más abundantes en los
hongos marinos son los alcaloides y derivados de policétidos, seguidos de péptidos,
terpenos, lactonas y esteroides. Otro grupo de metabolitos interesantes son las quinonas.
En cuanto a las actividades biológicas, las más reportadas son citotóxica y antimicrobiana,
seguidas de otras como antioxidante, antiinflamatoria, anti-invasión (palabra inglesa
antifouling), actividad para disminuir niveles de lípidos, letalidad contra camarones, entre
otras. Entre los miles de metabolitos aislados la halimida, un péptido llevó a la síntesis de la
plinabulina, la cual está en fase II para su potencial uso contra el cáncer de pulmón. Sin
embargo, en la medida que se evalúen más metabolitos, y se desarrollen condiciones
biotecnológicas adecuadas es de esperar que se encuentren nuevas sustancias de uso
farmacéutico en el futuro.
Técnicas de separación e identificación
La técnica combinada HPLC-MS, ha mostrado ser muy útil para procesos como la
identificación de los mismos hongos. Por ejemplo, el hongo Aspergillus flavus, un hongo
filamentoso que es muy común en diferentes alimentos ricos en almidón como el maíz, y
produce micotoxinas, por lo cual es un problema económico y de salud. El análisis por la
técnica combinada HPLC-ESIMS, permite reconocer 14 compuestos marcadores como son
la aflatoxina B1, la aflatoxina G1, el ácido aspergílico, la aspirona, la betaina, la chrisogina,
el desacetil parasiticólido-A, el flufurano, la gregatina-B, el ácido hidroxisidónico, el ácido
nictotínico, la fomaligina-A, y la espinulosina. Estos compuestos se reconocen en sus
espectros de masas por sus iones cuasimoleculares [M+H]+ . En el caso de compuestos
como las circumdatinas aisladas del hongo Aspergillus ocraceus, se han optimizado
métodos combinados que permiten la separación y análisis de micotoxinas. Por ejemplo, la
combinación UPLC − MS − IT – TOF (sigla inglesa correspondiente a ultraHPLC – Mass
Spectrometry – Ion Trap – Time of Flight), permite la identificación de estas sustancias.
Los espectros de masas muestran los iones cuasimoleculares [M+H]+, [M + Na]+, y [M + K]
+
; además de fragmentos característicos.
Es interesante anotar, que para la diferenciación de especies de hongos como los del género
Ganoderma, reconocidos como hongos alimenticios y con diferentes propiedades
medicinales, se utilizan técnicas de espectrometría de masas, a partir del tejido del hongo
directamente. Este género comprende más de 300 especies y es de amplio consumo en
países orientales. Por las propiedades nutricionales de algunas de estas especies, es
necesario contar con herramientas para su identificación rápida. Es un ejemplo el estudio
realizado con espectrometría de masas de ionización directa (sigla inglesa DI – MS), el cual
permite reconocer las especies de hongos de este género por sus componentes
característicos como son los ácidos ganodéricos. Los espectros de masas obtenidos
muestran iones pseudomoleculares [M + K]+. Este método ofrece posibilidades interesantes
para otros estudios similares que ayuden a identificar entre especies cultivadas y silvestres.
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Capítulo 10
Glicósidos
cianogénicos
Muchas plantas sintetizan compuestos que, por hidrólisis ácida, liberan cianuro de
hidrógeno. Esta capacidad, conocida como ciano génesis, se ha observado durante siglos en
plantas tales como albaricoques, duraznos, almendras y otras plantas alimenticias
importantes.
Estas sustancias producen muchas víctimas cada año. La mayoría de los casos de
envenenamiento con cianuro son resultado del consumo de plantas de las familias
Rosáceas, Fabáceas (Leguminosa), Euforbiáceas, o miembros de los géneros Sorghum
(Poaceas o Gramíneas). Aunque muchos de los casos de envenenamiento son accidentales
(Como por ejemplo las reses que comen semillas frescas de sorgo), una cantidad de
personas está expuesta diariamente a su consumo. Aunque el organismo humano puede
eliminar cantidades relativamente grandes de HCN rápida y eficientemente, existe un
consenso creciente en el sentido de que ciertas condiciones neurológicas provienen de
envenenamiento crónico con cianuro. Un caso especialmente crítico es el del casabe, el cual
es una harina para alimentación humana, obtenido de la denominada yuca brava, que
corresponde a Manihot esculenta, familia euforbiáceas. El tubérculo de esta planta es la
base de alimentación en más de medio billón de seres humanos en el mundo, especialmente
de países sub desarrollados; pero contiene glicósidos cianogénicos como la amigdalina y la
lotaustralina, que son neurotóxicos y pueden generar parálisis y muerte. También se
hipotetiza que el consumo de dietas altas en estas sustancias puede llevar a la carbamilación
de proteínas, en personas con enfermedades inflamatorias crónicas tales como la
enfermedad renal crónica y el reumatismo.
Dos clases de sustancias naturales son los responsables de esta capacidad cianofórica: Los
glicósidos cianogénicos y los cianolípidos. Ambos son derivados de α-
hidroxinitrilos (cianohidrinas) y ambos liberan un componente carbonílico y HCN cuando
se remueve la porción de carbohidrato o de ácido graso. La presencia de HCN se detecta
fácilmente mediante varios ensayos de coloración. La 10.1 muestra la estructura general de
los glicósidos cianogénicos y los procesos enzimáticos implicados en la liberación de HCN
a partir de ellos, pasando por un intermedio cianohidrina.
R R
C N Hidrólisis C N
R' R' Gli-OH
O
Gli Enz. O H
Glicósido cianogénico Cianohidrina Carbohidrato(s)
Enz.
R
HCN
R' O
Figura 10.1. Esquema que explica cómo se libera el HCN a partir de los glicósidos cianogénicos.
A pesar de que se ha sabido que muchas plantas son cianogénicas, son muy pocas las
sustancias aisladas e identificadas. Esto se debe al hecho de que estas sustancias son
difíciles de aislar y purificar, así como también son inestables a la hidrólisis. Al romperse
los tejidos vegetales que contienen estas sustancias, las enzimas presentes las hidrolizan.
Además, los carbohidratos y otros glicósidos que se encuentren presentes dificultan su
purificación. Hay tres glicósidos cianogénicos que se consiguen comercialmente:
amigdalina, prunasina y linamarina. La Figura 10.2 muestra las estructuras de los
glicósidos cianogénicos más comunes.
OGentiobiosa OGlucosa
CN CN
HO
CH3
OGlucosa OGlucosa
CH3
CN CN
CH3CH2
CH3 OGlucosa
CN
Biogénesis
Todos los glicósidos cianogénicos conocidos se originan a partir de los aminoácidos: L-
fnilalanina, L-tirosina, L-leucina, L-valina, y L-isoleucina, con excepción de los que
contienen funciones ciclopenteno, los cuales provienen de 2- ciclopentenil-l-glicina; y
aquellos de hongos y bacterias, los cuales provienen de L-glicina. La figura 10.3 muestra
las estructuras de estos aminoácidos.
NH2
R = H, Fenilalanina
COOH
R = OH, Tirosina
R
H2N
COOH NH 2
COOH
Leucina Valina
H2N
NH2
H2N COOH
COOH
COOH
Aldoxima
- H2O
R
OGlicosil R
C R
OH Oxid. C H
R' Glicosil. C
R'
N R'
N
N
Nitrilo
Figura 10.4. Esquema biogenético general que explica el origen de los glicósidos cianogénicos a
partir de aminoácidos.
Función biológica
Existen algunos estudios para tratar de comprender el papel biológico de los glicósidos
cianogénicos y estos estudios han generado varias hipótesis al respecto, una de las cuales es
que las plantas los producen como mecanismo de defensa contra depredadores. Esto lo
sustentan la misma actividad tóxica de estos compuestos, además de otras actividades que
han presentado contra microorganismos. De esta toxicidad sacan ventaja algunos insectos,
que acumulan estas sustancias para defenderse de depredadores, al consumir plantas que
contienen estas sustancias, aunque también se ha reportado que algunos insectos son
capaces de producirlos por biosíntesis de novo.
Hidrólisis enzimática
Los glicósidos cianogénicos se hidrolizan para generar un compuesto carbonílico (aldehído
o cetona), uno o varios carbohidratos y HCN. La hidrólisis enzimática ocurre cuando los
tejidos frescos que contienen glicósidos cianógenos son alterados (P.ej. rotos), de ahí que
su aislamiento sea difícil. Precisamente este proceso de hidrólisis enzimática es el que hace
que se libere HCN, y es la base del denominado Ensayo de Guignard, el cual permite
determinar la existencia de estas sustancias en muestras vegetales.
Ensayo de reconocimiento (Ensayo de Guignard)
En el fondo de un tubo de ensayo se colocan unos gramos de tejido vegetal fresco triturado
o desmenuzado. En la boca del tubo se suspende un papel de filtro impregnado con picrato
de sodio (Papel picrosódico) y se sella herméticamente. Después de un tiempo si el tejido
contiene sustancias cianogénicas, el papel toma coloración rojiza. Algunos autores
adicionan
2 ó 3 gotas de benceno, cloroformo o tolueno antes de tapar, y otros someten a
calentamiento el tubo cerrado para acelerar la hidrólisis.
Más recientemente se vienen diseñando nuevos dispositivos con el fin de detectar pequeñas
cantidades de HCN, dada su toxicidad, lo que seguramente ayudará también en la detección
de los compuestos cianogénicos naturales.
Distribución natural
Los glicósidos cianogénicos se han encontrado en alrededor de 2500 especies de plantas de
unas 110 familias. Se les encuentran en helechos, gimnospermas (tanto en mono- y
dicotiledóneas), angiospermas y varios insectos. En forma general, las concentraciones más
altas se encuentran en las hojas, pero algunos se encuentran en raíces, semillas u otros
tejidos vegetales.
Muchos glicósidos cianogénicos tales como prunasina, sambunigrina, linamarina y
lotaustralina, se encuentran ampliamente distribuidos en la naturaleza. Algunos otros, tales
como los que contienen funciones ciclopenteno (p. ej. ginocardina) se han encontrado en
pasifloráceas, flacourtiáceas y turneráceas.
La cardiospermina se conoce únicamente en sapindáceas, mientras que su éster p-
hidroxibenzoato, solamente se conoce en rosáceas. La heterodendrina solamente se conoce
en leguminosas (gén. Acacia) y sapindáceas (gén. Heterodendron).
Otros glicósidos cianogénicos se encuentran en sapotáceas (gén. Lucuma), leguminosas
(gén. Vicia, Holocalyx), (gén. Davallia), rutáceas (gén. Zieria), caprifoliáceas (gén.
Sambucus), liliáceas (gén. Chlorophytum), platanáceas, campanuláceas, magnoliáceas,
calicantáceas, papaveráceas, gramíneas, juncáceas, scheuzeriáceas, juncagináceas, etc.
Síntesis
Aunque los glicósidos cianogénicos son producidos por diferentes plantas, debido a su
capacidad de generar ácido cianhídrico, también existen reportes de procesos para su
síntesis química.
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Capítulo 11
Compuestos azufrados
Históricamente, los metabolitos secundarios de interés farmacéutico más conocidos e
investigados han sido principalmente compuestos con carbono, hidrógeno, oxígeno y
nitrógeno; como los vistos en los capítulos anteriores. En cambio, los metabolitos
secundarios azufrados son menos conocidos muy probablemente debido a la inestabilidad
química de algunos grupos funcionales azufrados, sin embargo, los estudios recientes han
mostrado el gran potencial biomédico de estas sustancias naturales, y en particular su
papel destacado en los complejos mecanismos de defensa del organismo humano.
El azufre es esencial para la vida y se encuentra en varias biomoléculas fundamentales
como los aminoácidos metionina y cisteína, el regulador redox glutatión, el agente
metilante S- adenosilmetionina y en los cofactores biotina, coenzima-A, ácido lipoico y
tiamina (Figura 11.1.).
O
SH
O O O O
HS
HS OH NH
OH HO NH OH
NH2
NH2 NH2 O
L-cisteína
L-metionina Glutatión
O
NH2
HN NH O
N N
H S
H OH
N
COOH S
S S
OH
Biotina
Acido lipoico Tiamina (Vitamina B1)
N NHN
2
S NH2
N N
HOOC O
S HO N
O O O N
NH2 P
NH NH O O O N N
O P O
OH O OH
OH OH
HO OH
P O
O OH
O
S O O
S S S S OH
S
O NH2
OH OH
Br Br
O O
S S
NH NH
N N
HO OH
Psammaplyn-A
Figura 11. 2. Estructuras químicas de algunos metabolitos azufrados naturales con diferentes
grupos funcionales.
Diferentes estudios han mostrado que las sustancias azufradas del ajo, las cuales se
encuentran también en otras plantas como la cebolla (Allium cepa); participan en procesos
de señalización de células y tejidos de mamíferos, los cuales están asociados con la salud y
los procesos de envejecimiento. Desde el punto de vista dietario, es ampliamente aceptado
que el consumo de ajo y otros vegetales aliáceos, está asociado con diferentes beneficios
en la salud humana, los cuales incluyen el reducir el riesgo de varios tipos de cáncer, en
especial del tracto gastrointestinal, el reducir el riesgo de enfermedades cardiovasculares,
y la diabetes tipo 2. Uno de estos compuestos es el dialiltrisulfuro DATS. Esta sustancia
participa en diferentes procesos enzimáticos en los cuales además de liberarse H2S, genera
otros compuestos reactivos como dihidropersulfuros (H2S2), dihidropolisulfuros (H2Sn),
hidropersulfuros (RS2H) e hidropolisulfuros (RSnH). Algunos de estos compuestos
participan en procesos de señalización en cerebros de animales, además de presentar
acción antiinflamatoria y citoprotectora contra el stress oxidativo. Sin embargo, muchos
de estos procesos no son todavía comprendidos del todo.
Glucosinolatos
Los glucosinolatos (conocidos con la sigla GS) son metabolitos secundarios azufrados,
que desempeñan papeles importantes en los vegetales, por ejemplo, como anti herbívoros,
y que además presentan actividades como la prevención contra el cáncer y actividad
antibiótica.
Los glucosinolatos son compuestos con el grupo funcional β-tioglucósido-N-
hidroxisulfato. Son además precursores de los isotiocianatos, están presentes en al menos
16 familias de plantas angiospermas dicotiledóneas e incluyen un número grande de
especies comestibles. Se han identificado más de 132 glucosinolatos diferentes. La figura
11.3 muestra ejemplos estructurales de varios glucosinolatos naturales. La sinalbina y la
sinigrina están presentes en el aceite de mostaza negra Brassica nigra y mostaza blanca
Sinapis alba. La glucorafanina fue aislada inicialmente del rábano Raphanus sp., y está
presente en el broccoli Brassica oleracea, y la glucomoringina de Moringa sp.
HO O
R S HO
OH
N OH
OSO3H O
OH O
R=
R= R=
O HO
S
Glucorafanina Progoitrina y
(Precursor del sulforafano) Sinalbina Glucobenzsisaustricina
epiprogoitrina
R=
R= R=
NH GluO
Glucobrassicina
Glucomoringina Sinigrina
R C N
R=
n Nitrilo
H2O Glucosa R SH R S-
R S
Glu N R N C S
N N OSO H OSO 3 -
Isotiocianato
Myrosinasa 3
OSO3H Aglucona
R S C N
R=
OH
Tiocianato
O NH
S
Oxazolidin-2-tiona
Figura 11.3. Esquema de los procesos de hidrólisis y conversión en diferentes metabolitos a partir
de los glucosinolatos.
N N O
S+ COO-
CH3
HO OH
m/z 298.2
Figura 11.4. Esquema que explica el origen de los fragmentos observados en el espectro de masas
ESI de la S-adenosilmetionina SAM.
Síntesis de glucosinolatos
Dado el gran interés en conocer aún más sobre sus propiedades químicas y su potencial
bioactivo, se vienen desarrollando métodos para la síntesis de los glucosinolatos. Un
ejemplo es la síntesis de los glucosinolatos ω-metilsulfanilalquilados partiendo de cloruros
de hidroximoilo funcionalizados en el azufre, vía nitronatos, y acoplamiento final con
tioglucosa.
Referencias bibliográficas