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Capítulo 4

COLORANTES Y COLORACIONES
INTRODUCCIÓN

Las diversas morfologías y estructuras de los microorganismos puede examinarse de dos

maneras: observando microorganismos vivos sin colorear (preparados en fresco) y observando
células muertas teñidas con colorantes. El examen en fresco de los microorganismos permite
conocer algunas de sus características (morfología, tamaño, movimiento, etc.); sin embargo, las
microorganismos vivos son casi incoloros y no se pueden visualizar fácilmente al microscopio
óptico normal cuando se encuentran suspendidos en agua, de ahí que se utilicen colorantes para
incrementar su contraste con el entorno que los rodea y de esta forma hacerlos visibles.

La luz es una radiación electromagnética que atraviesa el espacio con movimiento

ondulatorio, siendo su velocidad igual a la frecuencia por la longitud de onda (). La parte del
espectro electromagnético entre los 400 y 800 nm se llama espectro visible, la luz entre estos dos
límites de  es visible al ojo humano y contribuye a la sensación de color dependiendo de su
naturaleza o característica de la . Así, la luz con  = 400 - 425 nm es de color violeta y la de  =
640 - 670 nm es de color rojo.

OBJETIVOS

1. Fundamentar los conceptos de: Color / Colorante y coloración / Cromóforo / Auxocromo.

2. Observar microorganismos vivos en el microscopio de campo claro.
3. Estudiar su morfología, agrupación y apreciar las diferencias de tamaño entre organismos
procarióticos y eucarióticos.
4. Aprender a diferenciar el movimiento browniano de la movilidad de los microorganismos.

1. COLORANTE Y COLORACIÓN

1. COLOR. El color de un objeto depende de la  que refleja la luz blanca, la cual presenta todos
los colores; es decir, todas las . Cuando la luz blanca incide sobre una superficie, parte de ella
se absorbe y otra se refleja, habiendo otras que transmiten su color dependiendo de aquella 
que no se elimina; si el objeto solo absorbe  de una amplitud reducida del espectro, este
objeto aparecerá de un color complementario al absorbido y un colorante es una sustancia
química que permite esta acción, de absorber y eliminar ciertas ; así, si se absorbe la luz roja,
el objeto aparecerá verde y si se absorbe el azul el objeto será anaranjado.

La luz visible y la ultravioleta (UV) son capaces de excitar los electrones de valencia de una
molécula, la luz UV excita electrones de enlace de moléculas hasta lograr que el enlace se
rompa, los compuestos coloreados tienen enlaces múltiples; es decir, enlaces en que los
electrones pueden excitarse fácilmente, por lo cual se requiere de energía que le puede
proporcionar la zona del UV y no en la visible, por lo tanto aparentemente son incoloros.

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Cap. 4. Colorantes y Coloraciones ____________________________________________

2. COLORANTE. Los colorantes son compuestos aromáticos solubles en agua (generalmente en

forma de sales), que tiene color y ceden color, quedando el objeto coloreado con el color del
colorante. Un colorante posee los siguientes componentes:

MOLECULA INCOLORA + CROMÓFORO (RADICAL) + AUXOCROMO

CROMÓGENO

COLORANTE

Químicamente contienen un ión orgánico coloreado y otro ión inorgánico, y la mayoría de

ellos presentan enlaces múltiples, lo que da lugar a que presenten absorción de la luz en la zona
visible.

Estos pueden dividirse en dos grupos:

1. Ácidos. El colorante es ácido si la porción coloreada tiene carga negativa; es

decir si tiene un anión coloreado, siendo en este caso repelido por estructuras de
la célula que presenten la misma carga, como es el caso de la superficie
bacteriana. Ejemplo de ello tenemos, a la eosina como a la nigrosina.
2. Básico. Si la porción coloreada es el catión, cargado positivamente y con
afinidad por estructuras de la célula con carga negativa. Las bacterias toman
mejor los colorantes básicos, como son el cristal violeta, el azul de metileno y la
safranina.

2.1. CROMÓGENO. Es aquella parte del colorante que posee la potencialidad de coloración y
que en su estructura posee un radical llamado cromóforo.

2.2. LOS CROMOFOROS (chroma = color; phoros = dar, llevar). Los cromóforos son aquellos
grupos que absorben en la región del visible y por lo tanto son los responsables del color
de un compuesto. Así por ejemplo tenemos los cromóforos: Quinonas, Azo, y Nitro.

O O
Quinona

-N=N–
Azo

-N=O–
Nitroso

Basta la presencia de uno de ellos en una molécula para que se confiera color,
como en el caso de los carbonilos en que es necesario la acumulación de estos para
conferir color. Así, éste compuesto CH3-CO-CH3 es incoloro, pero CH3-CO-CO-CH3 ya
presenta una coloración amarilla verdosa.

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El benceno es incoloro,

Mientras pero el pentabenceno, presenta una coloración azul.

AUXOCROMOS (Auxo = aumentar). Los auxocromos son compuestos que solos no

proporcionan coloración en una molécula, pero combinados con cromóforos aumentan la
intensidad de esta coloración; los auxocromos donan pares de electrones no compartidos,
mediante un mecanismo de resonancia al sistema insaturado del cromóforo. Estos pueden
ser:

A) Simples. Que involucra un átomo no saturado

-NR2 -NH2 -OH -SO3H

B) Compuestos. Que involucra dos átomos no saturados

• Grupos hidroxilaminados -NHOH
• Grupos hidroxinicos -NHNH2
• Grupos thiohidroxilaminados -SNH2

Acidofilia y basofilia significa afinidad, los grupos auxocromos determinan si un colorante

es ácido (OH) o básico (NH2); los colorantes ácidos se ionizan y dan a la porción del colorante
una carga negativa y los básicos una carga positiva.

El grupo NH2 es básico porque su átomo de N pasa a pentavalente por adición de H2O ó de
un ácido:
H
H H
+ H2O R–N
R–N
H OH
H

H
H H
R–N + HCl R–N
H Cl
H

Ejemplo de un colorante donde se hace ver la actuación de un cromóforo y de una

auxocromo:
CROMÓFORO
NO2
NO2 NO2
NO2 NO2 NO2 NO2

CROMÓGENO
TINTE

OH
ACIDO
PÍCRICO
OH
AUXOCROMO
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Cap. 4. Colorantes y Coloraciones ____________________________________________

Algunos colorantes llevan el grupo sulfónico (S02 OH) fuertemente ácido, que posee la
propiedad de formar sales, este radical débilmente auxocromo sirve para dos fines en una
molécula de un colorante; primero, hace soluble en agua a los tintes; y segundo, transforma un
tinte básico en uno de carácter ácido, al Introducirse en el núcleo bencénico.

Los colorantes básicos, están constituidos por sales de bases de color, generalmente
cloruros, sulfatos o acetonas y los colorantes ácidos son sales de ácidos coloreados generalmente
sódicos, potásicos cálcicos o amónicos; el tejido de acuerdo a su acidez o alcalinidad captan el
colorante respectivo por aposición de cargas, o sea que el anillo que es ácido se colorea con
colorante básico y en el citoplasma depende de cada estructura; siendo generalmente básico y se
colorea con colorantes ácidos.

Como habíamos comentado anteriormente, un compuesto para que sea un colorante o

tinte, es necesario que posea el grupo cromóforo que le dará la característica del color, estos
grupos le dan el carácter ácido o básico, así tenemos: Cromóforos básicos y ácidos, que pasamos a
describir.

CROMÓFOROS BÁSICOS

1. El Grupo Azo ( - N – N – ). Se les llama colorantes azoicos y son derivados de azobenceno.

Aquí tenemos, entre los más importantes.
• Anaranjado de metilo
• Anaranjado G.
• Pardo de Bismark Y.
• Sudán R.
• Rojo de Burdeos.
• Azul Azoico.
• Amarillo Brillante.
• Escarlata Biebrich.
• Verde de Jano B.
• Rojo de Congo.
• Anaranjado de Metilo.
• Azul de Tripan.
• Rojo de Metilo.
• Negro Sudan B.

2. El Grupo Acina.
N

Está contenido en las Fenacinas y dentro de ellos tenemos:

• Rojo Neutro.
• Violeta Neutro.
• Violeta Amatista.
• Azocarmín G.
• Safranina O.
• Insulina.
• Nigrosina.
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3. El Grupo Idamínico ( - N = ). Se halla en las indaminas, tiacinas, muchos de ellos presentan

dos anillos bencénicos unidos al átomo de nitrógeno, donde uno de los grupos es quinónico.

NH = =N- - NH

En las Thiacinas los anillos bencénicos están unidos además por un átomo de azufre:

=N-

NH = -S-

Uno de los colorantes muy conocido con esta base de Thiacina es el azul de metileno.
CH3
CH3
N- -S- - N2 CH3
CH3 C1
- N2 -

Entre los colorantes con base de indofenoles tenemos:

• Azul de Metileno.
• Azul de Indofenol.
• Azul Celeste A y B.
• Azul Celeste de Metileno.
• Violeta de Metileno.
• Tionina.
• Azul de Toluidina O.

CROMÓFOROS ÁCIDOS

Dentro de ellos podemos citar a los núcleos:

1. Nitro (NO2):
• Ácido Pícrico.
• Aurancia.
• Amarillo de Martius.

2. Quinónico.

• Indaminas.
• Xantenos.
• Di, tri, fenil metanos.
• Ácido Rosólico.
• Fucsinas.
• Violeta de Metilo.

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Cap. 4. Colorantes y Coloraciones ____________________________________________

• Verde de Metilo.
• Violeta Cristal.
• P-rosalina.

2 CLASIFICACIÓN DE COLORANTES BIOLÓGICOS

1. Colorantes Nitro. Los cuales son ácidos.

2. Colorantes Azoico. Estos pueden ser monoazoicos, bi y poli azoicos.

2.1. Monoazoícos: El cromóforo es -N = N- une anillos benceno ó naftaleno.

• Rojo de Burdeos.
• Amarillo Brillante.
• S Crisoidina.
• Anaranjado de Metilo.
• Verde Jano B.
• Rojo de Metilo.
• Anaranjado G.
• Sudan R.

2.2. Los colorantes Poliazoicos

• Azul Azoico.
• Escarlata de Siebrich.
• Pardo de Sismark Y.
• Rojo Congo.
• Sudan IV.
• Azul de Tripán.
• Negro Sudan S.

3. Colorantes de Antraquinona. Los cuales derivan del antraceno pasando por antraquinona. El
anillo quinónico es el cromóforo y la antraquinona es el cromógeno, dentro de ellos tenemos:
• Alizarina.
• Rojo de Alizarina.
• Purpurina.

4. Colorantes de la Ouinonimina. Estos contienen dos cromóforos, el grupo de la Indamina ( - N =

) y el anillo Ouinónico; así tenemos:
• Indaminas.
• Indofenoles (azul de indofenol).
• Thiacinas (tienen un átomo de azufre ligados a los radicales Fenilo y Quinona). (Azul
Celeste A y B, Azul Celeste de Metileno, Violeta de Metileno, Tionina, Azul de Toluidina
O).
• Oxacinas: El azufre de las thiacinas es reemplazado por oxígeno. (Azul Brillante de Cresilo,
Violeta de Cresilo, Sulfato Azul nilo, Resazurina).
• Acinas. Son derivados de Fenacinas con dos núcleos bencénicos.
1. Aminoácidos. Resultan de introducir una o más grupos amino en la molécula de
fenacina, se usan como indicadores (Rojo Neutro, Violeta Neutro).
2. Safraninas. En estos compuestos, uno de los átomos de nitrógeno del grupo acina es
pentavalente y lleva ligado otro anillo bencénico, (Azocarmin G, Safranina O).
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3. Insulinas. Son aminoderivados metilados de las Safraninas, (Indulina, Nigrosina)

5. Colorantes del Fenil Metano. Aquí tenemos a los principales colorantes usados en
bacteriología, los compuestos son metanos con los hidrógenos sustituidos por radicales y así
tenemos: Trietil metanos, trifenil metanos y con grupos aminos en los fenilos tenemos:
• Colorantes de diaminotrifenilmetano. Son colorantes fuertemente básicos (Verde
Brillante, Verde Claro Amarillento SF, Verde de Malaquita).
• Colorantes de triaminotrifenilmetano. Son también fuertemente básicos. (Fucsina Ácida,
Fucsina Básica, Violeta Cristal, Verde de Etilo, Violeta de Etilo, Violeta de Hoffman,
Verde de Yodo, Azul de Metileno, Verde de Metilo, Violeta de Metilo, Neofucsina,
Pararosalína, Rosanilina, Azul Espíritu, Azul Victoria 4 R).
• Colorantes de Hidroxitrifenilmetanos. Son derivados del trifenilmetanos en los que los
grupos amínicos de las rosanilinas se han sustituido por hidroxilos, cambio en ácido su
propiedad básica (Acido Leucorrosóllco).
• Colorantes de difenilnaftilmetano. Son naftilderivados de los colorantes de
difenilmetanos (Azul Victoria B, Verde de lana (Green cotton)).

6. Colorantes Xantenos. Son derivados del Santeño, en este grupo se tiene una serie de
indicadores importantes:
• Colorantes de la Pironina. Son derivados diaminometilados del Santeño y están
estrechamente relacionados con los difenilmetanos (Pironina B, Pironina Y).
• Colorantes de Rodamina. Las rodaminas, semejantes a la pironina además llevan un anillo
bencénico, más un grupo carboxilo (Azul Rápido R y Rodamina B).
• Colorantes de Fuorano. Son derivados del compuesto fluorano, que no colorea. Son
derivados de la fluoresce(na sal de dihidroxifluorano (Eosina B., Eosina Y, Eritrosina
azulada, Eritrosina amarillenta, Etileosina, Mercurocromo 220, Metileosina, Floxina B,
Rosa de Bengala).
• Colorantes de Fenolftaleína y Sulfonftaleína. La fenoltaleína comprende un anhídrido
ftálico más un derivado fenólico. Una Sulfonftaleína es un compuesto de ácido
ortosulfonbenzoico, con un fenol o derivados fenólico. Además de la Sulfonftaleína
tenemos los siguientes colorantes: Azul de bromoclorofenol, Verde de bromocresol,
Púrpura de bromocresol, Azul de bromofenol, Rojo de bromofenol, Azul de bromotimol,
Verde de clorocresol, Rojo de Clorocresol, Cresolftaleíná, Rojo de cresol, Púrpura de
Metacresil, Rojo de Fenol, Azul de timol.
• Colorantes de Acridina. Que usualmente son usados como antisépticos (Acriflavina,
Atabrina, Acriflavina neutra, Rivanol, Fosfina).

7. Colorantes Naturales. Entre ellos tenemos los siguientes subgrupos:

• Indigo. Derivadas de vegetales del género Indigófera, el colorante que lleva se denomina
índigo.
• Carmín de Índigo. Es la sa! sódica del ácido indigodisulfónico, un colorante azul con
propiedades ácidas.
• Cochinilla. Obtenida de las hembras del insecto Coccus cacti, “cochinilla”, la cual es
transformada en Carmín por acción del alumbre u otras sales metálicas. Es especial para
colorear núcleo de células.
• Orceína. Se obtiene de los Iíquenes: Lecanora tinctorea y Rocella tinctorea que contienen
fenol, que por adición de amoníaco y oxígeno se convierten en Rocín. Esta a la vez tratada
con amoniáco y agua se convierte en Orceína.
• Tornasol. Se obtiene de los mismos líquenes tratándose con cal y carbonato sódico y
luego con amoniaco y oxígeno.

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Cap. 4. Colorantes y Coloraciones ____________________________________________

• Brasilina. Obtenida de "Palo del Brasil". Inicialmente incolora a la exposición del aire, se
oxida y se convierte en un colorante rojo llamado Brasileína, con combinación con
alumbre o fierro se utiliza como colorante para núcleos celulares.
• Hematoxilina. Esta se obtiene del ''Palo de Campeche", que es una leguminosa, se le
extrae con agua y evapora al aire, al residuo se le trata con éter, se lava con agua y se
cristaliza.

3. CUESTIONARIO

1. Definir colorantes ácidos y básicos. ¿Cuál es el propósito de cada uno?.

2. ¿Cómo funciona una preparación coloreada, comparada con una gota para el estudio de la
morfología y motilidad de las bacterias?.

3. ¿Por qué razón tenemos que teñir a las bacterias?.

4. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Agurto, T. – 1983 - COLORANTES Y COLORACIONES EN: MICROBIOLOGÍA, PARASITOLOGÍA E

HISTOLOGÍA. Edic. Populares. Lima - Perú. 173 pp.
Mendo, M. - 1990 - MEDIOS DE CULTIVO EN MICROBIOLOGÍA. 3ª Edición. Edit. Tricelm S.A. 132
pp.

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